简介:摘要目的探讨胆道闭锁(BA)小鼠肠道通透性变化以及基质金属蛋白酶-7(MMP-7)对其影响的机制。方法将BALB/c新生幼鼠采用随机数表法分为4组:对照组(NC组)、BA模型组(BA组)、肠道高MMP-7对照组(MNC组)和BA肠道高MMP-7组(MBA组)。采用腹腔注射轮状病毒和anti-Ly6G抗体建立BA纤维化模型;通过向空肠内注射MMP-7纯化蛋白构建肠道高MMP-7环境。完成各项指标检测,多组间比较应用单因素方差分析,两组间比较采用t检验,细菌易位率比较采用χ2检验。结果BA组和MBA组血清MMP-7水平[(2.28±0.21)、(2.35±0.23) ng/ml]显著高于NC组[(0.48±0.11) ng/ml,t= -29.866、-28.853,P<0.05];MNC组和MBA组的回肠液[(0.71±0.12)、(0.68±0.10) ng/ml]和大便MMP-7水平[(0.48±0.07)、(0.43±0.06) ng/ml],均显著高于NC组[(0.10±0.04) ng/ml,t= -19.273、-21.542,P<0.05;(0.06±0.02) ng/ml,t= -21.118、-23.087,P<0.05]和BA组[(0.08±0.02) ng/ml,t=-20.948、-23.932,P<0.05;(0.05±0.01) ng/ml,t= -22.131、-24.552,P<0.05]。BA组和MBA组的血清FITC-Dextran浓度[(74.58±2.30)、(95.75±5.28)μg/ml]和细菌易位率(43.33%、73.33%),均显著高于NC组[(42.50±2.30)μg/ml,t= -38.172、-35.828,P<0.05;10.00%,χ2=8.523、24.754,P<0.05];MBA组血清FITC-Dextran浓度和细菌易位率高于BA组(t=-14.236,P<0.05;χ2=5.554,P<0.05)。BA组和MBA组肠道上皮紧密连接蛋白Claudin-1表达均显著低于NC组[蛋白质印记法(Western blot):(0.47±0.13)、(0.45±0.06)倍比1.00倍,t=16.265、33.576,P<0.05;平均吸光度值:0.10±0.01、0.09±0.01比0.21±0.02,t=22.423、20.390,P<0.05]。MBA组E-cadherin表达显著低于NC组和BA组[(0.40±0.09)倍比1.00、(0.95±0.11)倍,t=24.570、15.232,P<0.05;0.07±0.01比0.23±0.05、0.21±0.02,t=12.842、30.444,P<0.05]。结论小肠内注射MMP-7可模拟BA术后肠道高MMP-7环境,肠道MMP-7进一步加重BA小鼠肠道通透性,可能与肠道E-cadherin、Claudin-1蛋白表达下调有关。
简介:摘要目的探讨肝内胆管上皮细胞(IBDECs)中维生素D受体(VDR)在胆道闭锁(BA)中可能发挥的作用及临床意义。方法回顾性分析2015年1月至2019年12月在西安交通大学第二附属医院和西安交通大学附属儿童医院接受肝门空肠吻合术(Kasai术)治疗的38例BA患儿IBDECs中VDR的表达水平,免疫组织化学检测VDR在BA患儿IBDECs中的蛋白表达水平,以胆总管囊肿患儿IBDECs中VDR表达水平为对照;用Masson染色法观察肝组织纤维化程度;并分析BA患儿IBDECs中VDR的表达水平与手术时肝纤维化程度及Kasai术后难治性胆管炎发生率和自体肝生存时间之间的相关性。通过聚肌胞苷酸[Poly(I∶C)]模拟dsRNA病毒感染,体外干预人肝内胆管上皮细胞(HiBECs),观察其对HiBECs活性和凋亡的影响及对HiBECs中VDR表达水平的影响。采用独立样本t检验比较两组样本之间的差异;采用χ2检验或Fisher′s确切概率法分析VDR与BA患儿临床病理常数的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同VDR表达水平组BA患儿Kasai术后自体肝生存时间的差异。结果共38例BA患儿纳入本研究,其中23例IBDECs中VDR蛋白水平无显著降低,15例VDR蛋白水平显著降低。与IBDECs中VDR表达水平无明显降低的BA患儿相比,显著降低者肝纤维化程度更严重(P<0.001),Kasai术后发生难治性胆管炎的比率更高(P=0.017)。与对照组相比,IBDECs中VDR表达水平显著下降的BA患儿自体肝生存时间更短(P=0.030)。Poly (I∶C)可引起BA患儿HiBECs的凋亡率增加(P<0.000 1)、细胞活性降低(P<0.05);Poly (I∶C)还可引起HiBECs培养基中炎症因子(干扰素、肿瘤坏死因子α、白细胞介素-6)分泌增加(P<0.001)。Poly (I∶C)干预可引起BA患儿HiBECs中VDR蛋白的表达水平显著下降(P<0.001)。结论Poly (I∶C)可引起BA患儿HiBECs损伤及HiBECs中的VDR表达水平下降;IBDECs中VDR表达水平显著下降可能是BA预后不良的标志物。
简介:摘要目的本实验旨在进一步验证与评价M2BP与M2BPGi在胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝纤维化中的作用。方法收集2019年9月至2020年11月天津市儿童医院普外科收治的48例行肝相关手术的患儿肝组织标本,患儿按疾病类型分为实验组(BA组)35例,其中男17例,女18例,年龄为60(30, 60) d;对照组(DC组)13例,其中男7例,女6例,年龄为120(60, 720) d。DC组中包括2例胆汁淤积,7例胆总管囊肿(choledochal cyst,CC),4例胆管发育不良(biliary hypoplasia,BH)。通过免疫组织化学检测肝组织中M2BP蛋白含量,分析其与肝组织纤维化分级的相关性;通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR),检测肝组织中M2BP mRNA含量,分析其转录、翻译水平是否表达一致。另收集患儿中26例BA、4例BH的血清,检测患儿肝功能相关的生化指标,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测其血清M2BPGi浓度。患儿组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验;用Spearman相关分析评价M2BP及M2BPGi水平与肝纤维化分级的相关性,建立ROC曲线评价血清M2BPGi浓度在肝纤维化中的作用。结果①免疫组织化学结果显示,M2BP表达于肝细胞、巨噬细胞胞质内;BA组患儿肝组织中M2BP蛋白的含量为0.187(0.116, 0.222),高于DC组的0.122(0.072, 0.141),组间比较,差异有统计学意义(P=0.004);肝组织中M2BPGi的含量与肝纤维化分级存在正相关(rs=0.847,P< 0.001)。②qRT-PCR结果显示,BA组患儿肝组织中M2BP mRNA水平为0.099(0.059, 0.138),高于DC组的0.036(0.015,0.064),组间比较,差异有统计学意义(P<0.001);Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化中M2BP mRNA水平为0.129(0.093, 0.194),高于Ⅰ~Ⅱ级肝纤维化的0.060 (0.027, 0.098),组间比较,差异有统计学意义(P<0.001);与肝组织中M2BP蛋白含量表达一致,随着肝纤维化分级增加,M2BP mRNA水平也随之增加。③ELISA结果显示,Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化的血清中M2BPGi含量为6.07 (5.03 ,10.33) ng/ml,高于Ⅰ~Ⅱ级肝纤维化的2.70(2.03, 3.68) ng/ml,组间比较,差异有统计学意义(P<0.001)。单独建立血清中M2BPGi评估肝纤维化分级的ROC曲线,当评估Ⅲ~Ⅳ级肝纤维化时,显示曲线下面积为0.972 (95%的置信区间为0.918~1.000),敏感度、特异度、准确度、PPV和NPV分别为0.889、1.000、94.45%、100.00%和90.01 %,M2BPGi的临界值4.48 ng/ml。结论M2BP在BA肝组织中高表达且随肝纤维化程度加重而增加,血清中其糖基化异构体M2BPGi在预测BA患儿肝纤维化的严重程度方面有一定价值。
简介:目的通过回顾性对比和分析新生儿阻塞性肝炎(neonatalobstructivehepatitis)和先天性胆道闭锁(congenitalbiliaryatresia)患儿的超声学检查结果,探讨超声检查在两种疾病鉴别诊断中的应用价值。方法2005年6月至2008年10月,对本院19例经腹腔镜胆道X射线造影证实为重症新生儿阻塞性肝炎和21例经病理学检查证实为先天性胆道闭锁患儿空腹时超声图像中胆囊形态和大小,进食前、后胆囊收缩程度及有无肝门纤维块等进行回顾性统计和分析。结果超声检查时,两组患儿空腹胆囊的形态异常率及胆囊长轴缩短率比较,先天性胆道闭锁组高于阻塞性肝炎组,且差异有显著意义(P〈0.05);肝门纤维块出现率比较,差异亦有显著意义(P=0.001)。两组患儿进食后,胆囊收缩功能明显消失率比较,差异有显著意义(P=0.028)。结论早期行超声检查,通过观察患儿空腹时胆囊长轴长度和形态及有无肝门纤维块,将有助于两种病变的鉴别诊断。进食后胆囊收缩功能明显消失,对两种疾病的鉴别诊断有协助诊断意义。
简介:摘要目的研究纤维连接蛋白1(fibronectin 1,FN1)在胆道闭锁(biliary atresia,BA)肝纤维化进程中的作用,阐述其作用机制与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关因子的关系。方法利用基因数据库数据对FN1在肝纤维化中的作用进行生物信息学分析。收集2017年4月至2020年10月在天津市儿童医院普外科手术时留取的患儿肝组织标本31例,其中因非肝胆疾病导致死亡的婴儿肝脏组织样本3例、先天性胆总管扩张症(congenital biliary dilatation,CBD)5例和BA 23例;根据日本Ohkuma's肝纤维化分级标准对所有肝组织样本进行分级处理,按照纤维化程度又将BA分两组:轻度(Ⅰ~Ⅱ级)、重度(Ⅲ~Ⅳ级);应用免疫组织化学检测FN1、PI3K、p-Akt和肝星状细胞活化标志物α-SMA在肝组织中的表达情况。分析以上蛋白与肝纤维化分级的相关性,利用qRT-PCR检测肝组织FN1 mRNA的表达水平并进行统计学分析。结果生物信息分析结果显示FN1在肝脏中表达量较高,是调控小鼠肝纤维化的核心基因之一。FN1在BA肝组织中的表达情况:(1)免疫组织化学检测显示,FN1表达于BA肝细胞的细胞质以及肝细胞外间隙,半定量分析结果显示,FN1的表达水平与肝纤维化程度呈正相关(rs=0.938,P<0.01),其在BA重度肝纤维化组表达明显高于轻度肝纤维化组[(0.135 8±0.041 6)比(0.054 8±0.009 5),t=-6.035,P<0.001];(2)qRT-PCR定量分析显示BA重度肝纤维化组FN1 mRNA的表达水平亦显著高于轻度肝纤维化组,为(1.038±0.264 3)ng/ml比(0.522 1±0.236 5)ng/ml,P<0.01。采用Pearson相关分析显示,PI3K与PI3K/Akt通路上下游基因FN1(r=0.981,P<0.01)和α-SMA(r=0.988,P<0.01)在BA肝纤维化中的表达都呈现显著正相关;同样,p-Akt与该通路上下游基因FN1(r=0.946,P<0.01)和α-SMA(r=0.971,P<0.01)在BA肝纤维化中的表达也都呈现显著正相关。结论BA肝组织中FN1随着肝纤维化程度的加重而增加,并经PI3K/Akt信号途径参与调控肝纤维化进程,干预FN1可能会成为治疗BA肝纤维化的新靶点。
简介:摘要目的通过回顾性分析胆汁淤积症患儿的临床资料,探讨γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transpeptidase,GGT)与肝杨氏模量在胆道闭锁(biliary atresia,BA)和婴儿肝内胆汁淤积(intrahepatic cholestasis,IHC)鉴别诊断中的应用价值。方法收集2017年9月至2019年12月西安交通大学附属儿童医院住院治疗的胆汁淤积症患儿120例为研究对象,根据术中胆管造影结果和随访情况,将患儿分为BA组(50例)和IHC组(70例)。比较两组患儿就诊年龄、临床表现、实验室检查结果、胆囊收缩率、同位素肝胆显像、肝杨氏模量、内科治疗效果等指标,分析GGT与肝杨氏模量在BA与IHC鉴别诊断中的应用价值。结果两组患儿的就诊年龄、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆汁酸、空腹血糖、血氨、脾大,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患儿的大便颜色、肝脏大小、总胆红素(total bilirubin,TB)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、GGT、肝杨氏模量、同位素肝胆显像阳性、餐后1 h胆囊收缩率、内科治疗效果差异有统计学意义(P<0.001)。对TB、DB、GGT、肝杨氏模量和GGT+肝杨氏模量进行ROC曲线分析,曲线下面积分别为0.820、0.809、0.906、0.876和0.926。当GGT超过界值198.85 U/L时提示患儿为BA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为82.0%、84.3%、78.8%、86.8%和83.3%。当肝杨氏模量超过界值8.6 kPa时提示患儿为BA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为88.0%、80.0%、75.9%、90.3%和83.3%。GGT与肝杨氏模量联合诊断提示患儿为BA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为98.0%、68.6%、69.0%、98.0%和80.8%。多因素Logistic回归分析发现,DB>115.55 μmol/L、GGT>198.85 U/L和肝杨氏模量>8.6 kPa均为BA的危险因素(OR=9.510,P=0.001;OR=24.634,P<0.001;OR=21.469,P<0.001)。结论GGT与肝杨氏模量在BA与IHC的鉴别诊断中有较好的应用价值,GGT超过界值198.85 U/L、肝杨氏模量超过界值8.6 kPa时能有效提示患儿为BA。
简介:摘要目的研究sonic hedgehog(Shh)信号通路核转录因子Gli1/Gli2在恒河猴轮状病毒(RRV)感染致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化(EMT)中的调控作用。方法通过RRV构建胆道闭锁小鼠模型,根据RNA干扰技术对Shh信号通路关键转录因子Gli1/Gli2表达调控的不同,将实验小鼠分为正常组、模型组、Gli1过表达组、Gli1 shRNA组、Gli2过表达组、Gli2 shRNA组,应用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测实验小鼠肝脏组织中EMT关键调控因子Snail/Slug及EMT特征性细胞因子波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白的表达;对不同分组中的小鼠肝脏组织分别行苏木精-伊红染色和Masson染色观察记录肝纤维组织表达面积百分比。采用单因素方差分析和LSD-t检验进行数据分析。结果Gli2过表达组、Gli2 shRNA组及模型组Snail、Slug、Vimentin、α-SMA、E-cadherin mRNA相对表达量分别为15.13±3.40、5.48±0.46、8.78±1.06、12.40±2.18和3.06±0.53;3.73±1.16、5.62±1.75、3.56±1.06、3.88±1.16和10.51±1.83;8.13±1.27、5.32±0.98、5.05±0.98、4.02±0.77和5.12±1.60。与模型组相比,Gli2过表达组Snail、Vimentin、α-SMA的mRNA表达明显升高,E-cadherin的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(t=4.53、5.29、8.12、-2.13,均P<0.05);与模型组相比,Gli2 shRNA组Snail、Vimentin的mRNA表达明显降低,E-cadherin的mRNA表达明显升高,差异均有统计学意义(t=-2.86、-2.12、5.62,均P<0.05)。Gli2过表达组、Gli2 shRNA组及模型组Snail、Slug、Vimentin、α-SMA、E-cadherin蛋白灰度比值分别为2.02±0.39、0.31±0.08、0.95±0.17、1.07±0.17和0.42±0.06;0.53±0.13、0.40±0.18、0.20±0.04、0.28±0.07和1.09±0.31;0.70±0.15、0.42±0.22、0.64±0.13、0.81±0.11和0.42±0.09。与模型组相比,Gli2过表达组Snail、Vimentin、α-SMA蛋白灰度比值明显升高,差异均有统计学意义(t=12.71、4.28、3.70,均P<0.05);与模型组相比,Gli2 shRNA组Vimentin、α-SMA表达明显降低,E-cadherin表达明显升高,差异均有统计学意义(t=-6.14、-7.57、5.96,均P<0.05)。Gli1过表达组及Gli1 shRNA组小鼠肝脏组织未见明确EMT特征细胞因子表达变化趋势。正常组、模型组、Gli1过表达组、Gli1 shRNA组、Gli2过表达组、Gli2 shRNA组肝脏纤维组织表达面积百分比分别为(1.03±0.58)%、(33.02±11.39)%、(39.81±5.67)%、(26.06±1.29)%、(49.81±8.57)%和(17.55±0.66)%。Gli2过表达组及Gli2 shRNA组与模型组肝脏纤维组织表达面积百分比相比,差异均有统计学意义(t=3.21、-2.96,均P<0.05);Gli1过表达组及Gli1 shRNA组与模型组肝脏纤维组织表达面积百分比相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论Shh信号通路在胆道闭锁小鼠肝纤维化中起重要作用,Shh信号通路关键转录因子Gli2可显著调控胆道闭锁小鼠肝脏EMT过程。
简介:摘要目的通过回顾性分析胆汁淤积症患儿的临床资料,探讨γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transpeptidase,GGT)与肝杨氏模量在胆道闭锁(biliary atresia,BA)和婴儿肝内胆汁淤积(intrahepatic cholestasis,IHC)鉴别诊断中的应用价值。方法收集2017年9月至2019年12月西安交通大学附属儿童医院住院治疗的胆汁淤积症患儿120例为研究对象,根据术中胆管造影结果和随访情况,将患儿分为BA组(50例)和IHC组(70例)。比较两组患儿就诊年龄、临床表现、实验室检查结果、胆囊收缩率、同位素肝胆显像、肝杨氏模量、内科治疗效果等指标,分析GGT与肝杨氏模量在BA与IHC鉴别诊断中的应用价值。结果两组患儿的就诊年龄、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆汁酸、空腹血糖、血氨、脾大,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患儿的大便颜色、肝脏大小、总胆红素(total bilirubin,TB)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、GGT、肝杨氏模量、同位素肝胆显像阳性、餐后1 h胆囊收缩率、内科治疗效果差异有统计学意义(P<0.001)。对TB、DB、GGT、肝杨氏模量和GGT+肝杨氏模量进行ROC曲线分析,曲线下面积分别为0.820、0.809、0.906、0.876和0.926。当GGT超过界值198.85 U/L时提示患儿为BA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为82.0%、84.3%、78.8%、86.8%和83.3%。当肝杨氏模量超过界值8.6 kPa时提示患儿为BA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为88.0%、80.0%、75.9%、90.3%和83.3%。GGT与肝杨氏模量联合诊断提示患儿为BA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为98.0%、68.6%、69.0%、98.0%和80.8%。多因素Logistic回归分析发现,DB>115.55 μmol/L、GGT>198.85 U/L和肝杨氏模量>8.6 kPa均为BA的危险因素(OR=9.510,P=0.001;OR=24.634,P<0.001;OR=21.469,P<0.001)。结论GGT与肝杨氏模量在BA与IHC的鉴别诊断中有较好的应用价值,GGT超过界值198.85 U/L、肝杨氏模量超过界值8.6 kPa时能有效提示患儿为BA。