简介：目的研究银屑病特异表达microRNA（miRNA）与靶基因及基因功能之间调控网络及作用机制。方法采用基因芯片技术筛选银屑病皮损组织和健康皮肤组织中差异性表达的miRNA,并通过生物信息学对差异表达的miRNA进行靶基因预测及靶基因功能富集分析,构建银屑病差异表达miRNA与靶基因及基因功能调控网络,得到网络核心调控的miRNA和受调控作用的核心靶基因及关键性基因功能。结果得出银屑病皮损组织中明显上调的关键miRNA10个,调控的关键基因12个,主要功能21项,明显下调的关键miRNA21个,调控的关键基因22个,主要功能28项结论特异性表达的miRNA主要调控的靶基因及其基因功能与银屑病发病密切相关,为银屑病基因层面的机制研究提供了有效的依据。

简介：目的研究银屑病患者外周血T细胞主控基因RUNX1及其靶基因SLC9A3R1、人类白细胞抗原（HLA）-C及磷酸激酶（PKC）-βⅠ的mRNA表达,进一步了解RUNX1及其下游基因与银屑病外周血T细胞活性异常的关系。方法取20例银屑病患者及20名健康对照外周血,分离、培养、扩增外周血T细胞并鉴定纯度;提取纯化mRNA并反转录合成cDNA,实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测RUNX1、SLC9A3R1、HLA-C及PKC-βⅠ在mRNA水平表达。结果银屑病患者外周血T细胞RUNX1、SLC9A3R1、HLA-C及PKC-βⅠmRNA表达水平均高于健康对照组,银屑病组RUNX1、SLC9A3R1、HLA-C及PKC-βⅠmRNA与对照组的表达水平比值分别为1.8071、2.2494、2.0744及2.3784。结论RUNX1及其靶基因表达水平的增高可能引起外周血T细胞的活化,并参与银屑病的发病。

简介：摘要目的通过对已验证的hsa-miR-204-5p靶基因的提取和功能富集分析，为进一步探究其生物学功能及调控机制提供数据支持和理论指导。方法应用mirTarBase和TarBase数据库提取已被验证过的hsa-miR-204-5p靶基因，取其交集，将集合基因分别进行GO富集分析和Pathway富集分析。结果miR-204-5p在多物种间具有较高保守性。在MirTarBase和TarBase数据库中分别得到398个和600个靶基因，重叠获得85个共有靶基因，其中同时被qPCR、Westernblot、Reporterassay进行过检测的靶基因为15个。GO分析得到13个基因的生物进程信息、12个基因的细胞组分信息、12个基因的分子功能信息。Pathway分析显示靶基因富集于线粒体通路。结论hsa-miR-204-5p的靶基因主要富集于凋亡相关进程及通路，与多种肿瘤生物学进程密切相关。

简介：摘要目的研究miRNA-326是否作用于其靶基因BCL-XL，探讨miRNA调控血小板凋亡的分子机制。方法利用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成双荧光素酶报告基因实验系统，分别构建含有BCL-XL 3′端非翻译区(3′ untranslated region，3′UTR)片段的野生型和变异型的双荧光素酶载体，设置对照组，转染细胞检测相对荧光强度。结果分别构建了PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-WT(野生型)和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-MT(变异型)的双荧光素酶报告基因质粒载体；miRNA-326序列和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-WT质粒共转染测定的相对荧光强度显著低于对照组(miRNA-326阴性对照序列和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-WT质粒共转染组)(P＝0.034)；同时也显著低于miRNA-326序列和PsiCHECK-BCL-XL-3′UTR-MT质粒共转染的变异组(P＝0.022)。结论miRNA-326作用于BCL-XL基因的3′UTR；这为研究miRNA调控血小板凋亡的分子机制奠定了基础。

简介：无

简介：摘要目的确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA2404基因产物为Sigma N转录因子，鉴定Sigma N信号系统参与调控的下游靶基因。方法采用生物信息学软件并根据Sigma N调控基因启动子序列特征，预测并分析钩体基因组中LA2404基因及其调控的靶基因。采用等位交换原理构建问号钩体LA2404基因敲除株(ΔLA2404)。采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测ΔLA2404敲除株中候选靶基因mRNA水平变化。构建LA2404基因原核表达系统并提纯目的重组蛋白(rSigma N)。采用凝胶迁移试验(gel electrophoresis mobility shift assay, EMSA)验证Sigma N调控的靶基因。结果致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株有一个Sigma N编码基因以及22个含Sigma N启动子序列的靶基因。ΔLA2404敲除株有钩体典型、活泼的运动方式，外形无明显变化。ΔLA2404敲除株中LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773基因mRNA水平显著下调(P<0.05)，其他靶基因mRNA水平无明显变化。EMSA结果显示，rSigma N可与上述靶基因启动子序列结合。结论LA2404基因产物为Sigma N调控基因。LA1188、LA2306、LA3426、LA1968、LA1313、LA3806和LA0773的启动子序列能与转录因子Sigma N结合，上述7个基因表达受Sigma N通路调控。

简介：目的炎症反应被认为是动脉粥样硬化的始动环节，也是防止动脉粥样硬化的重要靶点。众多基因参与调控此过程，PPARβ/δ可通过参与炎症反应从而影响动脉粥样硬化。我们通过生物信息学分析发现lncRNAAL110200可能影响PPARB，8的表达，从而我们推测lncRNAAL110200可能通过调节PPARβ/δ表达从而影响动脉粥样硬化炎症反应。本研究旨在通过体外实验研究IncRNAAL110200对炎症刺激物脂多糖的应答并初步验证其靶基因。方法我们首先使用qRT—PCR检测在炎症刺激物脂多糖（LPS）刺激下IncRNAAL110200表达量的改变；然后我们再利用qRT—PCR检测了IncRNAAL110200干扰和过表达后PPARβ/δmRNA表达水平的改变。结果我们研究发现LPS可上调IncRNAAL110200（1.85倍，P〈0．001）和PPARβ/δ（2．67倍，P〈0．01）表达；但是无论高表达还是低表达IncRNAAL110200都不影响PPARβ/δ的表达。结论综上所述，我们的研究发现，动脉粥样硬化炎症刺激物LPS可以上调lncRNAAL110200及PPARβ/δ表达，但是PPARβ/δ非lncRNAAL110200的靶基因。

简介：摘要自噬是降解细胞内蛋白质和受损细胞器的一个动态过程，维持着细胞内的环境稳定，并为细胞的存活提供良好条件。高氧性急性肺损伤（HALI）是临床氧疗的严重并发症之一。HALI的发病机制尚不明确，已有研究表明自噬参与了HALI的发生过程。调控自噬的通路机制众多，包括磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路、丝裂素活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（MAPK/ERK）信号通路、磷酸腺苷依赖性蛋白激酶/unc-51类自噬激活激酶1（AMPK/ULK1）信号通路以及转化生长因子-β（TGF-β）、叉头转录因子O1（FoxO1）和Ras三磷酸腺苷酶超家族成员Rab11a参与的信号通路，上述信号通路相关基因作为微小RNA-21-5p（miR-21-5p）靶基因在众多疾病中具有调控自噬活性的作用。本文就miR-21-5p靶基因调控自噬的各信号通路进行综述，以期寻找到有关HALI中miR-21-5p靶基因调控自噬发挥肺保护作用机制的线索，也为后续基础研究提供相关理论依据。

简介：目的检测寻常性银屑病皮损中miR-320及其下游靶基因survivinmRNA的表达水平。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测40例寻常性银屑病患者皮损及40名健康对照皮肤中miR-320、survivinmRNA的表达水平,运用双荧光素酶报告实验验证survivin是miR-320的靶基因。miR-320和survivin表达水平两组间比较采用t检验,寻常性银屑病皮损中miR-320与survivin表达的相关性采用Pearson相关分析。结果与健康对照皮肤相比,寻常性银屑病皮损中miR-320表达量为对照组的（0.561±0.11）倍,表达明显下调（t=3.06,P〈0.05）;survivinmRNA表达量为对照组的（2.034±0.26）倍,表达水平明显上调（t=3.35,P〈0.05）;双荧光素酶报告实验结果提示survivin是miR-320的靶基因,寻常性银屑病皮损中miR-320与survivinmRNA呈负相关（r2=0.634,P〈0.05）。结论miR-320可能通过调控其下游靶基因survivin的异常表达参与寻常性银屑病皮损的形成过程。

简介：抗血管生成治疗可提高晚期癌症患者的生存率。目前，尚无可靠标志物用来指示抗血管生成治疗后肿瘤内血管改变情况。本研究通过使VEGF基因失活来模拟抗血管生成的治疗作用。HCT116细胞肿瘤异种移植物含有较少的被SMA（＋）的外皮细胞包被的内皮管。

简介：目的通过对miRNA-126＊进行靶基因预测及信号通路生物信息学分析,以期为miRNA-126＊靶基因相关实验及其调控肺发育机制的深入研究奠定基础。方法首先利用microRNA（miRNA）芯片技术分别检测胎龄16d、19d和21d胎鼠肺组织中miRNA-126＊的表达水平,进而应用miRGen2.0数据库通过生物信息学方法预测其可能的靶基因,然后对其靶基因集合应用Cytoscape及其插件BiNGO进行功能富集分析（GO-analysis）,最后应用DAVID数据库进行靶基因信号转导通路富集分析（KEGGPathwayanalysis）。结果miRNA-126＊表达量在胎龄16d、19d和21d3组胎肺组织间逐渐上升。miRNA-126＊预测靶基因共有422个,其靶基因集合功能富集于葡萄糖醛酸转移酶、糖代谢等分子功能,多细胞器官发育、发育进程等生物学过程及细胞分隔、细胞器界膜等细胞组分上。信号转导通路则显著富集于RNA降解信号通路,以及朊蛋白疾病信号通路中。结论本研究结果提示miRNA-126＊参与了大鼠胎肺发育过程,为今后研究肺发育提供理论基础。

简介：摘要目的探讨维生素D受体（VDR）基因多态性与寻常型银屑病的关系。方法2018年3月至2020年2月在海南医学院第二附属医院皮肤性病科和体检中心分别收集101例海南籍汉族寻常型银屑病患者与79例海南籍健康对照。采用靶基因捕获测序法对VDR基因及其上、下游各2 kb进行全长测序，对于最小等位基因频率大于1%的单核苷酸多态性（SNP）进行基于SNP和单倍型的关联分析。采用生物信息学方法预测风险位点对基因功能的影响。结果基于SNP的关联分析显示，40个SNP（29个位于内含子区、1个位于外显子区及10个位于基因间区）为银屑病的易感位点，其OR值为0.148（95% CI：0.016~1.294）~2.779（95% CI：1.260~6.130），P < 0.001~0.976。生物信息学预测显示位于外显子2上的rs2228570可引起氨基酸改变（蛋氨酸→苏氨酸），继而导致基因功能改变。基于单倍型的关联分析显示，10个单倍型为寻常型银屑病的保护性单倍型，在健康对照组和银屑病患者组中的频率分别为5.150%~45.570%、1.110%~33.170%，其OR值为0.198（95% CI：0.040~0.985）~0.630（95% CI：0.419~0.947），P值0.002~0.048。结论在海南籍汉族人群中，发现40个寻常型银屑病相关的风险SNP，分别位于内含子区、外显子区及基因间区域，同时发现10个保护性单倍型。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-497在胶质瘤细胞中表达及调控Wnt3a基因靶点抑制胶质瘤细胞增殖的影响。方法病毒载体质粒pLVTHM、元件质粒PsPAXZ和pMDZ.G 3个质粒共同组成慢病毒包装系统。重组质粒pGL3-WNT3a-wt 3’端非编码区(3’UTR)/pGL3-WNT3a-mut 3’UTR与miR-497共转染胶质瘤细胞株U251，检测处理组与对照组荧光素酶活性的变化，验证Wnt3a是miR-497作用靶点。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胶质瘤细胞株U251转染miR-497后Wnt3a基因在mRNA和蛋白表达。荧光定量PCR检测胶质瘤细胞株U251感染病毒LV-miR-497后表达变化。噻唑蓝(MTT)检测胶质瘤细胞株U251感染病毒LV-miR-497和/或瞬时转染Wnt3a质粒后细胞生长曲线。结果荧光素酶实验验证miR-497与Wnt3a的3’UTR野生型结合位点(WT)，与突变型Wnt3a质粒转染的U251细胞比较，野生型质粒转染细胞的荧光素酶活性显著降低。miR-497在mRNA和蛋白水平抑制Wnt3a的表达，miR-497与Wnt3a呈负相关，两组有差异统计学意义(0.95±0.23、0.31±0.09，P<0.05)。慢病毒载体转染miR-497建立稳定细胞株，与对照组比较，LV-miR-497转染后miR-497高表达，差异有统计学意义(0.86±0.14、8.51±1.32，P<0.05)。MTT检测胶质瘤细胞转染miR-497后增殖，结果提示过表达miR-497能够抑制胶质瘤细胞的生长，3组差异有统计学意义(0.78±0.41、0.54±0.22、0.60±0.09，P<0.05)。LV-miR-497处理的U251细胞比用LV-ctrl处理的细胞形成更小和更少的集落，3组差异有统计学意义(0.67±0.35、0.61±0.14、0.59±0.11，P<0.05)。结论miR-497直接作用Wnt3a基因靶点，高表达miR-497抑制肿瘤细胞增殖。

简介：摘要miR-203是近来研究发现的上皮特异性miRNA，通过调控靶mRNA转录后的表达，抑制角质形成细胞增殖潜能，诱导细胞周期退出和细胞分化，在上皮相关疾病中发挥重要作用。HPV通过抑制miR-203，调控下游靶基因以调节病毒生命周期。本文就miR-203的生物学特性，调控靶基因p63、survivin、细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）在HPV感染中的作用以及与宫颈癌、尖锐湿疣和口咽癌等相关疾病的研究进展作一综述。

简介：

简介：摘要目的研究高脂饮食小鼠腹脂微小RNA(miRNA)的差异表达，探讨高表达miR-335在脂类代谢过程中作用。方法对高脂饮食的小鼠腹脂进行miRNA芯片分析，检测小鼠腹脂miRNA的差异表达；采用生物信息学方法预测miR-335靶基因，双荧光素酶报告系统及点突变实验验证靶基因外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶4(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphordiester-ase4, ENPP4)和脂肪酸去饱和酶1(fatty acid desaturase1, FADS1)；3T3L1细胞中转染miR-335模拟体，检测靶基因mRNA和蛋白表达量；实时荧光定量PCR检测miR-335和靶基因在高脂饮食小鼠不同组织中的表达量。结果高脂饮食后，模型组小鼠体型明显大于对照组，小鼠血清总胆固醇(P＝0.016)和三酰甘油(P＝0.014)水平显著上升。高脂饮食的小鼠脂肪组织中多种miRNA发生差异表达，其中miR-335表达上升尤为明显(P＝0.024)。通过Targetscan预测miR-335靶基因，结合其功能，筛选出ENPP4和FADS1。报告基因试验显示miR-335通过"种子区"与ENPP4和FADS1预测靶位点结合从而抑制ENPP4和FADS1基因的表达，点突变实验证实了结合的靶位点；设计合成miR-335模拟体转染3T3L1细胞，培养48 h后，FADS1 mRNA表达水平显著下降(P＝0.038)，ENPP4和FADS1蛋白水平均显著下降(P＝0.033, P＝0.007)。与对照组相比，高脂饮食后miR-335在肝脏、白棕脂肪组织和脑中显著性高表达(P＝0.017, P＝0.002, P＝0.003, P＝0.031)；而ENPP4和FADS1在脑(P＝0.006, P＝0.034)和棕色脂肪组织(P＝0.014, P＝0.037)中表达量显著下降，同时ENPP4在肝脏中的表达量也极显著下降(P<0.001)。结论miR-335是与脂类代谢和脂肪沉积相关的miRNA，ENPP4和FADS1基因是miR-335的靶基因。

简介：摘要目的探讨miRNA-181b（miR-181b）与骨髓增生异常综合征（MDS）预后因素的相关性及预测的miR-181b靶基因主要生物学功能，评价miR-181b对MDS风险预测能力。方法选择2019年1月至9月中国医学科学院血液病医院符合2016年世界卫生组织（WHO）诊断标准的131例MDS患者的骨髓样本，同时收集患者临床资料，包括血常规检查、血液疾病相关基因检测结果等，进行回顾性研究。应用荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测所有骨髓样本中miR-181b的表达量。根据国际预后评分系统（IPSS）、基于WHO分型的预后评分系统（WPSS）以及修订版IPSS（IPSS-R）三种评分系统将患者按不同危险度分组，比较各组患者miR-181b的表达差异，并分析部分预后评分因素[白细胞计数（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板计数（Plt）、中性粒细胞计数（ANC）、原始粒细胞比例、突变基因]与miR-181b表达的相关性。通过生物信息学在线工具TargetScan对miR-181b进行靶基因预测，并进行功能分析。结果miR-181b表达量随IPSS、WPSS、IPSS-R危险度的升高均增加，且在各评分系统中不同危险度的患者间miR-181b表达量差异均有统计学意义（均P<0.01）；miR-181b表达量与三种预后评分系统分数均呈正相关（r值分别为0.437、0.368、0.327，均P=0.001）；miR-181b表达量与患者骨髓原始粒细胞比例呈正相关（r=0.450，P<0.01），与Plt呈负相关（r=-0.199，P=0.024），与WBC、Hb、ANC以及是否有血液疾病相关基因突变均无相关性（均P>0.05）。生物信息学预测miR-181b潜在靶基因1 363个，主要富集的生物学过程有转录调控、RNA代谢过程的调控等，其中有22个靶基因与血液疾病相关，包括5个已证实的与MDS发病相关的基因（RUNX1、ASXL2、NRAS、ATM和KRAS）；有血液疾病相关且为miR-181b靶基因的突变患者（32例）miR-181b相对表达量[中位数（P25，P75）]为1.33（0.63，1.60），高于无突变患者（99例）的0.85（0.49，1.38），差异有统计学意义（Z=2.285，P=0.022）。结论miR-181b与MDS预后评分系统危险度有相关性，其可能参与了MDS发病的分子生物学过程。

简介：摘要目的明确低温缺血再灌注心律失常大鼠心肌miRNA表达的变化及其靶基因。方法清洁级健康雄性SD大鼠，2～3月龄，体重300～400 g，麻醉后开胸取心脏，建立离体心脏灌注模型。成功建立离体心脏灌注模型6个，采用随机数字表法分为2组(n＝3)：对照组(C组)和心脏缺血再灌注组(IR组)。采用全心停灌60 min再灌注30 min的方法制备低温心脏缺血再灌注损伤模型。记录再灌注期间心律失常评分。通过高通量测序筛选出2组心肌表达有显著性差异的miRNA(DEmiRNAs)。利用RNAhybrid和miRanda数据库对DEmiRNAs调节的mRNA行靶基因预测，通过Gene Ontology和KEGG数据库对靶基因进行富集分析，选取与心律失常密切相关且表达水平较高的miRNA进行RT-PCR检测。结果高通量测序结果：与C组比较，IR组有7个miRNA表达有显著性差异(novel-miR-17、novel-miR-19、novel-miR-30、novel-miR-43、rno-miR-122-5p、novel-miR-16和rno-miR-429)。与心律失常关系密切且表达水平较高的miRNA有4个：与C组比较，IR组心肌novel-miR-17、novel-miR-30和rno-miR-122-5p表达上调，rno-miR-429表达下调(P<0.05)。通过miRNA-mRNA相关性分析结果：GJA1基因是novel-miR-17的靶点。结论心肌novel-miR-17可能作用于GJA1基因参与大鼠低温缺血再灌注心律失常的发生。

简介：摘要目的分析微小核糖核酸(mi RNA)let-7c通过靶定细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)抑制肝癌细胞增殖的临床意义，并探讨其对肝癌细胞增殖的影响以及靶基因。方法选取人低转移肝癌细胞-97L(MHCC-97L)、人高转移肝癌细胞(HCCLM3)、人肝癌组织(HepG2)、人肝癌细胞-7721(SMMC-7721)、人肝细胞LO2、小鼠抗人细胞周期蛋白依赖激酶抗体等进行细胞培养，利用Western blot检测转染后小鼠CDK6表达情况，转染48 h后应用细胞裂解液对三组蛋白进行提取，将材料分为观察组、对照组、空白组，观察组转染let-7c，对照组转染阴性对照miRNA，空白组未进行转染处理；应用二喹啉甲酸法对各孔细胞蛋白浓度进行测定。结果let-7c对肝癌细胞HCCLM3增殖结果显示，于450 nm处观察组、对照组转染后24 h吸光度值差异无统计学意义(P>0.05)；转染48 h后观察组、对照组HCCLM3细胞中CDK6蛋白含量发生较大变化，观察组的CDK6蛋白表达量为(0.58±0.05)，均低于对照组的(0.81±0.08)与空白组(0.85±0.09)(t＝10.107、13.876，均P<0.05)；转染后72 h，观察组细胞处于G1期比例为(56.21±3.25)%，明显高于对照组的(45.21±1.56)%与空白组的(46.24±1.98)%，差异均有统计学意义(t＝16.146、13.862，均P＝0.000)。结论肝癌细胞中let-7c呈低表达，将let-7c上调可有效调控CDK6，从而抑制癌细胞生长，对肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用。

简介：摘要目的观察miR-3074-5p及其靶基因p27在子痫前期胎盘组织中的表达情况，初步探讨miR-3074-5p/p27分子途径在子痫前期病理过程中的作用。方法收集2017年9月至2018年3月期间在天津医科大学第二医院产科行剖宫产手术的子痫前期患者（子痫前期组，16例）和相同孕周非子痫前期的剖宫产产妇（对照组，9例）的胎盘组织，通过实时定量PCR、免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）和Western blotting检测，比较两组胎盘组织中miR-3074-5p以及p27、细胞周期蛋白D1（cyclin D1，CCND1）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin dependent kinase 2，CDK2）等蛋白的表达水平。应用双荧光素酶基因报告系统，验证miR-3074-5p对p27 mRNA的靶向抑制作用；通过RNA干扰技术，敲低人绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo中p27蛋白的表达水平，观察p27表达下调对细胞生理活性的影响。结果与对照组相比，子痫前期组胎盘组织中miR-3074-5p（P=0.034）与CCND1蛋白的表达量都显著下调（P=0.031），而p27蛋白的表达量则显著上调（P=0.010）；IHC结果显示，p27和CCND1蛋白主要表达于合体滋养层细胞中。双荧光素酶报告系统检测结果证实，miR-3074-5p能与p27 mRNA的3’UTR序列结合而抑制其表达；敲低HTR-8/SVneo细胞中p27的表达水平后，细胞的增殖（P=0.014）和侵袭（P=0.045）活性都显著增强。结论miR-3074-5p可能通过直接靶向抑制p27的表达而参与调控人绒毛外滋养层细胞的生理活性，进而影响胎盘发育及功能；胎盘组织中miR-3074-5p的异常低表达可能通过诱导p27的表达而参与子痫前期的病理过程。