简介：

简介：摘要目的建立大鼠肺动脉内皮细胞(PAEC)、肺静脉内皮细胞(PVEC)以及肺微血管内皮细胞(PMVEC)的体外分离和培养方法，分析3种肺血管内皮细胞的生物学特征及功能。方法本研究为实验研究。精分1只雄性SD大鼠肺动脉、肺静脉，肺组织取边缘剪碎，各样本分别用混合酶液消化，以血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)免疫磁珠法分选内皮细胞，用内皮细胞专用培养基培养。倒置显微镜下观察3种肺血管内皮细胞的形态差别，通过免疫荧光鉴定各组细胞纯度。通过免疫荧光和Western blot观察3组细胞血管性血友病因子(vWF)和平滑肌激动蛋白抗体(α-SMA)蛋白表达情况。通过基质胶体外成环实验比较3组细胞1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5 h成环情况。采用SPSS 22.0和FlowJo 10软件进行统计学分析和统计作图。结果3组细胞24 h后均迅速贴壁，vWF免疫荧光染色均为阳性。3组细胞形态均为铺路石状，其中PAEC为典型的铺路石状，大多数呈椭圆形；而PVEC、PMVEC形态更细长。免疫荧光显示PVEC和PMVEC细胞浆内少量α-SMA蛋白弥散表达[(0.16±0.03)、(0.23±0.01)]，而PAEC中几乎观察不到α-SMA蛋白表达(0.06±0.01)。随着时间推移，3种肺血管内皮细胞成环周长均呈先上升后下降趋势，其中PVEC组成环长度最长。3组细胞成环周长在组间、时点间、时间和组间交互作用差异均具有统计学意义(P值均<0.01)。结论该方法所获得的3种肺血管内皮细胞纯度高，可在体外稳定培养。3种血管内皮细胞生物学功能有差别，其中PVEC体外成环能力最强。PAEC细胞表达α-SMA蛋白量最少。

简介：背景：人尿源性干细胞研究较少，目前尚无稳定高效的培养方法。目的：比较3种培养基对人尿源性干细胞生长和增殖的影响，优化其培养方法。方法：离心、提纯尿液获取人尿源性干细胞，利用贴壁法分别在角质细胞无血清培养基、祖细胞培养基以及尿源性细胞培养基(角质细胞无血清培养基和祖细胞培养基以等比例混合而成)进行培养，观察细胞生长状态，MTT法检测细胞增殖情况，绘制生长曲线。结果与结论：3种培养基均能够培养出尿源性干细胞，尿源性干细胞在角质细胞无血清培养基中缓慢生长，在祖细胞培养基中生长较快，在尿源性细胞培养基中生长最好。结果表明，尿源性细胞培养基为人尿源性干细胞最佳生长培养基，能够快速、高效的培养出人尿源性干细胞。

简介：目的建立可行的人骨髓间充质干细胞（humanmarrowmesenchymalstemcells,hMSCs）的培养方法,并对其生物学特性进行初步研究。方法于2013年1月—2014年6月采用密度梯度离心法和贴壁法分离培养hMSCs,用免疫组织化学（免疫组化）法鉴定表面标志并分析其核型,光镜观察其生长和形态变化。结果本实验分离的hMSCs纯度高、贴壁好,以长梭形为主,至少在传代培养6代内增殖快,性状稳定。免疫组化染色显示hMSCs表达CD29和CD44,不表达CD45及CD34,核型正常。结论密度梯度离心法可获得增殖活跃且纯度较高的hMSCs,有特征性表型,适合体外较长期的培养hMSCs。

简介：摘要目的将病毒滴度不同的狂犬病毒PV-2061株接种Vero细胞，收获连续传代培养的病毒液后脑内注射小鼠，通过小鼠的死亡情况确定细胞传代培养法对于该病毒的检测限度。方法先采用小鼠脑内接种法测定狂犬病毒的病毒滴度，然后将10倍系列稀释的狂犬病毒接种Vero细胞，在细胞上连续传代3次后收获细胞培养物并脑内注射小鼠，观察小鼠的死亡情况。结果小鼠脑内接种法检测狂犬病毒的病毒滴度为7.0lgLD50/ml，且不高于1LD50/ml的病毒无法致小鼠死亡。细胞传代培养法检测狂犬病毒的结果为0.1LD50/ml的狂犬病毒检出率为5%～10%，0.01LD50/ml的狂犬病毒无法检出。结论细胞传代培养法检测狂犬病毒PV-2061株的检测限度约为0.1LD50/ml，且灵敏度远高于小鼠脑内接种法。

简介：目的研究缺氧、缺血诱导培养对骨髓间充质干细胞（BMSC）生长的影响,并通过检测神经导向因子Slit2表达的变化,证实缺氧、缺血诱导可促使其表达增加,为缺血性脑卒中血管再生研究打下基础。方法雄性SD大鼠1只,鼠龄4-6周龄,体质量在120-160g,清洁级。采用密度梯度离心法,分离大鼠BMSC,用10%胎牛血清达氏修正依氏培养液（DMEM）进行培养,至第3代细胞行流式细胞仪鉴定;取第3代细胞通过缺氧预处理不同时间（12、24、48h）进行分组,缺氧预处理后进行缺血培养,观察细胞生长状况;采用酶联免疫吸附分析（ELISA）法,检测细胞上清液中Slit2表达水平的变化;应用激光共聚焦显微镜观察缺氧预处理组缺血培养与正常对照组细胞形态及Slit2蛋白表达形态。结果成功分离培养大鼠BMSC,并通过流式细胞仪鉴定成功;缺氧预处理后BMSC对缺血耐受能力增强,缺氧预处理48h组细胞存活率较高（80%）;ELISA结果显示,缺氧预处理24h组Slit2分泌水平是（422.66±24.42）ng/L,缺氧后缺血培养24hSlit2分泌水平是（521.10±20.16）ng/L;与相同时间点正常对照组Slit2分泌水平[（279.63±14.91）ng/L,（326.70±14.85）ng/L]相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;激光共聚焦扫描显微镜显示,缺氧预处理组BMSC较正常对照组BMSC细胞形态大,且荧光强度增强。结论当缺氧、缺血诱导后,BMSC分泌Slit2增加,为进一步体内研究打下实验基础。

简介：目的探讨小鼠脊髓源性神经干细胞与纹状体源性神经干细胞的分离培养方法及增殖特点，比较两种来源的神经干细胞发育时期上的异同，寻找更有利于脊髓损伤修复的种子细胞。方法利用显微解剖、无血清培养和单细胞克隆技术在孕14d小鼠的胎鼠的脊髓及纹状体中分离培养具有单细胞克隆能力的细胞，免疫荧光染色检测克隆细胞的神经巢蛋白（nestin）抗原和诱导分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达，并比较两种来源的干细胞在培养及分化方向上的异同点。结果从胎鼠的脊髓和纹状体中成功分离出神经干细胞，两种来源的干细胞均具有连续克隆能力，可传代培养，表达nestin。脊髓血清诱导分化后脊髓源性神经干细胞8．tubulinⅢ阳性细胞（13．5±0．8）较纹状体源性神经干细胞（17．4±1．1）减少，而nestin、GFAP阳性细胞明显增多（45．7±0．3vs539．2±1．2；25．2±1．3vs18．8±0．91，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论依据细胞增殖特点和分化结果的区别，证实纹状体源性神经干细胞更适合用于移植修复脊髓损伤。

简介：目的探讨GB对体外培养的胚鼠脊髓神经元存活和生长发育的作用。方法胚胎大鼠脊髓神经细胞原代培养，相差显微镜下进行细胞计数和显微测量，观察GB对神经元存活和生长发育的作用。对培养7d细胞行NSE免疫组化染色，光镜下观察GB对NSE染色阳性神经元生长发育的影响。结果GB及NGF能够促进体外培养胚胎大鼠脊髓神经细胞及NSE染色阳性神经元的存活，促进其细胞及突起的生长。其促进脊髓神经细胞的存活、胞体及突起发育的作用与NGF一致，而其促进神经突起分化与生长的作用强于NGF。结论NGF和GB能促进培养大鼠发育期脊髓神经元存活、分化和生长，并且表现出各自作用的特异性。

简介：目的：探讨颈椎后纵韧带骨化（ossificationofposteriorlongitudinalligament，OPLL）成纤维细胞培养的方法及其生物学特性，为研究OPLL的病理、生理及发生机制等提供生物学基础。方法：采集OPLL患者减压过程中未骨化的部分和颈椎外伤手术减压过程中正常后纵韧带，用原代培养的方法进行体外培养，倒置显微镜观察细胞形态和分泌形成钙结节的过程，并应用VonKossa方法染色；MTT比色法分析细胞增殖特性；碱性磷酸酶（ALP）活性定量测定和骨钙素（OC）测定比较病变组和正常组差别。结果：经VonKossa染色后镜下显示黑色结节，证实为钙结节；细胞数量从第3d开始明显增加，并快于正常组；病变组ALP分泌量为（28．564±0．65）U／gprot、OC分泌量为（1．044±0．14）ng／ml，明显高于正常组（P〈0．05）。结论：OPLL患者后纵韧带成纤维细胞增殖较快，经培养后表达成骨细胞特性。

简介：目的　研究蜕皮甾酮(ecdysteroneEDS)对内毒素（LPS）所导致的脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡和坏死的保护作用。　方法　采用体外培养HUVECs为模型，LPS作为致伤因素，EDS作为保护因素，应用流式细胞仪和荧光显微镜观测培养HUVECs凋亡和坏死的变化。　结果　正常培养的血管内皮细胞凋亡和坏死较少，LPS刺激后细胞凋亡和坏死同时增加，凋亡增加幅度大于坏死，EDS处理后凋亡和坏死同时减少。　结论　提示EDS对LPS导致的HUVECs凋亡、坏死有一定的调节作用。

简介：目的:探讨肾疏宁防治系膜基质硬化的细胞分子机制.方法:应用细胞培养技术,进行肾小球系膜细胞培养,采取血清药理学方法,制备肾疏宁药物血清,并分为低、中、高三个剂量梯度,利用血管紧张素Ⅱ为刺激因子,在4h、8h、16h、32h四个时间段观察肾疏宁药物血清对正常和病理状态下系膜细胞增殖和分泌系膜基质ColⅣ及FN的影响.应用MTT测定系膜细胞增殖,细胞ELISA测定ColⅣ及FN的含量,RT-PCR检测ColⅣ及FN的mRNA水平.结果:血管紧张素Ⅱ能明显促进MC增殖和系膜基质中ColⅣ及FN的分泌,16h达到高峰,32h时呈下降趋势,肾疏宁血清中、高剂量组对ColⅣ及FN的分泌均有明显抑制作用,并呈现剂量依赖关系.RT-PCR结果也说明肾疏宁血清对正常和血管紧张素Ⅱ刺激下的MC分泌ColⅣ及FN的mRNA表达有下调作用.结论:肾疏宁能明显抑制肾小球系膜基质中ColⅣ及FN的合成与分泌,并在基因水平上对其有影响作用.这可能也是肾疏宁临床治疗MsPGN疗效较佳并且防治肾小球硬化的作用机理之一.

简介：

简介：无

简介：摘要目的分析细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞水平在ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者预后评估中的价值。方法选取聊城市第二人民医院2020年9月至2021年8月收治的经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的STEMI患者158例，检测患者入院即刻和术后48 h的细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞比例；于治疗后随访1个月，依据心血管不良事件发生情况，分为心血管不良事件发生组与未发生组，分析与STEMI患者临床预后相关的影响因素及相关性。结果158例STEMI患者中有27例发生心血管不良事件（17.09%）。与未发生组相比，发生组收缩压、左室射血分数（LVEF）、低密度脂蛋白水平差异均有统计学意义（t=2.82、4.27、2.32，均P < 0.05）。发生组、未发生组术后48 h外周血细胞毒性T淋巴细胞［（22.75±8.39）%、（29.23±4.61）%］、NK细胞［（13.73±4.64）%、（20.64±4.52）%］水平均明显低于术前（t=-5.05、-83.68、-142.71、-7 084.80，均P < 0.001）；发生组术前、术后48 h外周血细胞毒性T淋巴细胞［（27.47±3.35）%、（22.75±8.39）%］和NK细胞［（21.42±4.36）%、（13.73±4.64）%］水平均明显低于未发生组（t=7.68、13.10、4.16、5.76，均P < 0.001）。单因素分析显示，术前细胞毒性T淋巴细胞 < 27.47%、术前NK细胞 < 21.42%、LVEF及低密度脂蛋白可能是影响STEMI患者预后的危险因素（P < 0.000、0.012、0.019、0.033）。Cox回归分析显示，术前细胞毒性T淋巴细胞 < 27.47%、术前NK细胞 < 21.42%是影响STEMI患者预后的独立危险因素（均P < 0.001）。结论STEMI 患者基线细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞水平降低提示不良预后风险增加。

简介：摘要目的探讨儿童髓母细胞瘤(MB)初诊时外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对其生存的影响。方法采用病例对照研究，入组2018年8月至2020年1月就诊于首都医科大学附属北京世纪坛医院儿科的61例初治MB患儿，检测初治时患儿外周血常规、淋巴细胞亚群和免疫球蛋白定量，根据外周血常规结果计算得出NLR，以受试者工作特征(ROC)曲线确定最佳临界值，将患儿分为高NLR组(≥2.07)21例和低NLR组(<2.07)40例。分析2组患儿无进展生存(PFS)和总体生存(OS)情况。若生存分析存在差异，则进一步比较2组患儿临床特征、淋巴细胞亚群、免疫球蛋白定量的差异，若存在差异，则分析NLR与其相关性。生存分析采用Kaplan-Meier法，组间比较采用Log-rank检验。组间比较采用χ2分析、Mann-Whitney U检验和独立样本t检验。结果生存分析发现，高NLR组MB复发率(38.1%比10.0%，χ2＝6.879，P＝0.016)和死亡率(19.0%比0，χ2＝8.154，P＝0.011)高于低NLR组。高NLR组患儿的PFS中位时间(12个月比19个月，χ2＝9.775，P＝0.002)和OS中位时间(19个月比20个月，χ2＝8.432，P＝0.004)短于低NLR组。2组患儿临床特征分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。但高NLR组T淋巴细胞[(67.93±6.37)%比(73.38±8.08)%，t＝2.886，df＝48.865，P＝0.006]、T辅助细胞(Th)[(30.86±5.53)%比(34.29±7.44)%，t＝2.037，df＝51.981，P＝0.047]、T抑制细胞(Ts)[(27.39±5.50)%比(30.84±6.58)%，t＝2.164，df＝47.581，P＝0.035]的百分比均低于低NLR组。NLR与T淋巴细胞(r＝-0.303，P＝0.018)、Ts(r＝-0.260，P＝0.043)存在负相关性。结论初治时NLR较高的MB患儿预后相对较差，这种预后差异可能与T淋巴细胞、Ts等免疫细胞相关。

简介：摘要目的探究巨噬细胞极化对周细胞-肌成纤维细胞转分化及移植肾间质纤维化形成中的作用。方法分别收集5例2010~2015年在南京医科大学第一附属医院确诊慢性移植物失功(CGD)受者的移植肾组织和正常肾组织(对照组)，采用常规染色和免疫荧光染色的方法检测M1型和M2型巨噬细胞在肾组织中的表达与分布，并用聚合酶链式反应(PCR)法检测样本中CD68、CD206和iNOS mRNA；采用转化生长因子-β1(TGF-β1)体外刺激小鼠血管周细胞系，采用免疫印迹、细胞荧光的方法检测周细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)的表达；分别构建血管周细胞与M1型或M2型巨噬细胞联合培养模型，采用免疫印迹、细胞荧光、PCR等方法检测周细胞中α-SMA和PDGFR-β的表达。结果在CGD受者的移植肾组织中观察到显著的CD68+iNOS+的M1型巨噬细胞浸润，而CD68+CD206+细胞未显著浸润，且CD68、iNOS、CD206 mRNA在CGD组中的表达均高于对照组(P<0.05)；在CGD移植肾组织中，α-SMA和PDGFR-β的蛋白表达升高(P<0.05)，且α-SMA和PDGFR-β双染的细胞浸润于CGD受者移植肾间质中。体外实验中，TGF-β1可刺激小鼠周细胞中α-SMA和PDGFR-β升高(P<0.05)，且呈现时间依赖性；免疫印迹和细胞荧光中均可见M1型巨噬细胞可在体外促进小鼠周细胞中周细胞-肌成纤维细胞转分化相关指标升高，而M2型巨噬细胞无法促进周细胞发生周细胞-肌成纤维细胞转分化过程。结论M1型巨噬细胞极化可能通过促进周细胞-肌成纤维细胞转分化过程，促进移植肾间质纤维化的形成。

简介：摘要目的研究并探讨去白细胞悬浮红细胞、悬浮红细胞在同等离心条件下储存中的溶血率变化。方法此次研究的对象是选取2013年3月—2013年8月该站收集的90袋每袋200mL的血液，随机分为3组，悬浮红细胞组（30袋）、去白细胞悬浮红细胞I组（30袋）、去白悬浮红细胞II组（30袋），将其3组分别放置4℃冰箱内28d，分别7d、14d、21d、28d分别取样检测溶血率。结果悬浮红细胞组溶血率分别是7d（0.59±0.02）、14d（0.11±0.07）、21d（0.13±0.08）、28d（0.21±0.11）；去白悬红I组7d（0.14±0.09），14d（0.20±0.13），21d（0.24±0.14%，28d（0.10±0.22）；去白悬红II组7d（0.10±0.06），14d（0.21±0.10），21d（0.32±0.16），28d（0.41±0.18）。结论红细胞溶血与血液在去白过滤的分离中受损有关，但去白细胞悬浮红细胞在保存期溶血率小于0.8%范围内可以用于临床使用。

简介：摘要目的探讨白细胞介素(IL)-1β在淋巴细胞介导胶质瘤细胞凋亡中的影响。方法收集山东第一医科大学附属济南人民医院于2018年9月至2020年9月收治的胶质瘤患者36例，行手术切除中选择胶质瘤组织标本，包括胶质瘤细胞U251与U87，将载有增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的嵌合型腺病毒5(Ad5F35)型重组腺病毒(Ad-EGFP)与载有IL-1β的Ad5F35型重组腺病毒(Ad-IL-1β)转染到胶质瘤细胞U251与U87中，探讨转染后胶质瘤细胞U251与U87的IL-1β表达水平，应用噻唑蓝(MTT)检测U251与U87细胞的凋亡情况。记录IL-1β对U251与U87细胞的生长抑制作用。应用SPSS 23.0软件对数据进行分析，组间比较采用t检验。结果Ad-IL-1β组U251和U87细胞的IL-1β表达水平(2.21±0.36、1.24±0.21)高于Ad-EGFP组(1.24±0.21、2.45±0.35)，差异有统计学意义(t＝13.420、17.787，P<0.05)。Ad-EGFP组U251与U87细胞的凋亡率[(6.38±1.47)%、(5.62±1.39)%]高于Ad-IL-1β组[(12.23±2.28)%、(11.58±2.19)%]，差异有统计学意义(t＝12.939、13.786，P<0.05)。研究结果显示，Ad-EGFP组与Ad-IL-1β组在48 h U87细胞抑制率差异无统计学意义(t＝1.123，P>0.05)；Ad-IL-1β组在48 h U251细胞抑制率[(35.92±3.45)%]以及72 h U251、U87细胞抑制率[(43.03±4.46)%、(11.50±2.12)%]高于Ad-EGFP组48 h U251细胞抑制率[(21.95±2.46)%]以及72 h U251、U87细胞抑制率[(25.30±2.68)%、(9.02±1.86)%]，差异有统计学意义(t＝19.782、20.445、5.276，P<0.05)。结论IL-24能够抑制胶质瘤细胞的增殖，诱发细胞凋亡，调节细胞因子的表达，控制患者的病情发展。

简介：目的研究姜黄素（Cur）对K562细胞和HL-60细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系。方法用流式细胞光度术对K562细胞和HL-60细胞进行细胞周期检测，用蛋白免疫印迹检测细胞周期蛋白水平。结果姜黄素0—10mg／L作用24h可将K562细胞和HL-60细胞阻滞于G0／G1期，该期细胞比例增加；阻断细胞从S期向G2／M期转化，G2／M期细胞比例减少；姜黄素作用24h减少K562细胞和HL-60细胞CyclinD1、CyclinB1的蛋白水平，但几乎不影响K562细胞和HL-60细胞CyclinA的蛋白水平。结论姜黄素扰乱K562细胞和HL-60细胞的细胞周期进程与CyclinD1和CyclinB1的蛋白水平减少有一定关系。

简介：摘要目的研究不孕症病患外周血NK细胞、T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞临床特征。方法取2018年12月-2019年5月我院所收治患有不孕症的240例病患为对象其中包括126例继发性的不孕症、114例原发性的不孕症。同期接受早期的健康妊娠120例女性，同期健康的非妊娠120例女性；采用流式细胞学的检测方法，对不孕症病患、早期的健康妊娠与健康的非妊娠女性，外周血NK细胞、B细胞、T细胞的亚群特征进行检测分析。结果原发性不孕症组与继发性不孕症组，在外周血的CD8+T细胞、B细胞的水平状况上，均明显比健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性较低，差异统计意义存在，P<0.05；CD4+T/CD8+T比值高于健康非妊娠及早期健康妊娠女性，差异统计意义存在，P<0.05；原发性不孕症组与继发性不孕症组，在CD3T细胞的水平方面，明显比健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性较低，差异统计意义存在，P<0.05；各组间NK细胞的水平、CD4+T差异统计意义不存在，P＞0.05；原发性的不孕症组与继发性的不孕症组，在NK与B细胞的水平、T细胞的亚群等方面，差异统计意义不存在，P＞0.05。健康的非妊娠及早期的健康妊娠女性，在NK与B细胞水平、T细胞的亚群等方面，差异统计意义不存在，P＞0.05。结论不孕症病患B细胞、T细胞的亚群比例失调所引发机体细胞的免疫功能提升及体液免疫的应答紊乱现象，针对免疫性的不孕症发病机制当中起着关键作用。