简介:摘要目的研究感染人体的细菌L型的分离培养,寻找一种培养细菌L型的最佳办法,以便临床鉴定与研究细菌L型。方法对在普通血液培养过程中瓶底出现轻微暗紫红、上清液微混或瓶壁有少量颗粒状物生长时,分别用血浆分离针抽取可疑培养物同时转种于普通血液琼脂培养基、L型增菌培养基及L型琼脂培养基中培养,观察其生长情况。结果在血琼脂固体培养基上最终形成了细菌L型,在液体培养基上形成了细菌型、L型、将可疑培养物再用血浆分离针转种于L型细菌液体培养基上又分离出23例L型细菌,使原来一般血培养阳性率提高。结论经过对细菌L型的分离培养研究,发现血琼脂固体培养基培养对于培养细菌L型有较好的效果,在临床上可以用于鉴定与研究细菌L型。
简介:树突状细胞(DC)是一类专职性抗原呈递细胞,不仅启动免疫反应和诱导免疫耐受,还在调节免疫反应与免疫耐受的平衡中起决定性作用.肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中深受关注,肝移植物容易存活,伴有肝移植的其他器官(如心脏、肾脏等)移植存活时间也较其单独移植明显延长.最近有人提出,在肝移植耐受中DC可能起关键作用,但因其难于分离培养,国外仅美国Pittshburgh大学在做相关研究,国内尚未见报道.材料与方法:1.肝非实质细胞的分离:取6~8w小鼠,麻醉后无菌开腹,门静脉插管,用前灌液(PBS+肝素500μ/100ml)灌流2~3min,改用注射器缓慢推注2mlⅣ胶原酶(GIBCOL公司,0.05%);取材后剪碎,15mlⅣ胶原酶液(0.05%)体外消化30min.尼龙网过滤,PBS液清洗(400g×5min离心)两次,稀释成4~5ml细胞悬液.下铺细胞分离液Percoll(Pharmacia公司)制成的不连续密度梯度液,500g×30min离心后,细胞分三层,先吸弃最上层细胞碎片,再吸取两液体界面的肝非实质细胞,避免吸到最底层的血细胞,RPMI1640液(GIBCOL公司)清洗两次,400g×5min离心,即可得肝非实质细胞.2.肝树突状细胞(HDC)的培养:将肝非实质细胞用含灭活的10%胎牛血清(GIBCOL公司)的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2.5×106/ml,接种于24孔培养板,每孔1ml,加GM-CSF(GIBCOL公司)10ng/ml.培养第三天轻轻吸去未贴壁细胞,换液.后隔天半量换液,培养第7~8d可收取HDC.结果与讨论每只小鼠可得肝非实质细胞约1.0~1.5×107个,细胞大小不一,类型较多.培养24~48hr后,有大量细胞贴壁生长,少量HDC前体细胞半贴壁状散在分布,经筛选、扩增,第4d时HDC数量增多,出现6~8个细胞组成的小集落.第7~8d,HDC数量增多,此阶段细胞有一明显的增殖高峰,有大量半贴壁半悬浮的集落,集落表面的细胞有小的突起.第7~8d,每只小鼠HDC得率约为2~3×106个.因HDC难于分离培�
简介:目的探索来源于人的表皮细胞的分离培养方法,为其进一步作为皮肤组织工程中的种子细胞或临床应用奠定前期研究基础。方法取3~9岁健康儿童包皮环切术后包皮,经分离酶处理分离真表皮,再将表皮以胰蛋白酶消化为细胞悬液,分别接种于有血清培养基DMEM和无血清培养基K-SFM中进行细胞培养,观察表皮细胞生长融合情况及克隆形成率。结果表皮细胞在DMEM和K-SFM培养液中均能融合成片,但在K-SFM中的融合成片时间明显短于在DMEM中所需时间;在K-SFM中2周时克隆形成率显著高于在DMEM中的克隆形成率。结论两步酶法分离表皮细胞接种于K-SFM中培养,是一种简便有效的表皮细胞分离培养方法。
简介:从三叶草(Trifoliumrepens)、荔枝(LitchichinensisSonn.)、大蒜(Garlic)等根际土壤中筛选出内生菌根真菌的孢子,在自制的固体和液体培养基上进行人工培养(Is、ILe及E),并将培养得到的菌根真菌接种尾叶按(Eucalyptusurophylla)无菌苗、玉米等植物.结果表明:以上三种植物根际分离的内生菌根在各种培养基上均长出白色菌落,随后均长出白色的丝状体,形态、大小基本一致,将其接种植物一定时间后,可在幼根皮层细胞观察到内生菌根特有的孢囊、丛枝现象,再从接种植物根部以同样的方法分离培养,亦得到形态、结构相同的菌根真菌.根据培养菌根的特征推断,初步认为该内生菌根为球囊霉属(GlomusTul.
简介:目的:比较弧菌在科玛嘉弧菌显色培养基与常规弧菌培养基上的生长情况及菌落特征。方法:用科玛嘉弧菌显色培养基与常规弧菌培养基分离弧菌。结果:弧菌在科玛嘉弧菌显色培养基上与硫代硫酸盐.柠檬酸盐.胆盐一蔗糖琼脂培养基(TCBS)及双洗平板上所获的菌落数显示有较好的相似性,差异无显著性(P>0.05,χ^2检验),但科玛嘉弧菌显色培养基的灵敏度(95.6%)和特异度(94.3%)较高。结论:科玛嘉弧菌显色培养基用于临床对弧菌的分离培养既迅速,又简便,值得推广。
简介:目的采用机械分离和酶消化相结合的方法分离小肠上皮类器官单位(IOUs),并进行形态及功能鉴定,建立稳定的分离培养技术。方法采用机械法剪碎小肠组织,中性蛋白酶和胶原酶联合消化分离组织碎片,差速沉淀法获得IOUs,通过相差显微镜观察IOUs形态,组织学、免疫组化证实其增殖特性及上皮刷状缘完整性,原代二维培养观察IOUs体外增殖及细胞群体组成。结果分离的IOUs大部分形态完整,PAS染色显示连续的刷状缘,并可见杯状细胞,PCNA染色阳性并呈梯度改变,IOUs体外培养可见构成小肠的各胚层细胞。结论采用机械分离和酶消化相结合的方法可以得到形态完整、增殖活跃的IOUs,有望为组织工程小肠构建提供种子细胞。
简介:[摘要] 目的:从粪便中分离、培养和检测病原菌,对于临床治疗及预后调查有一定的价值。粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等,各种正常菌群含量甚多,仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。此次我们主要分离培养并鉴定粪便标本中的大肠埃希菌和痢疾志贺菌[3]。方法:本文利用伊红美蓝平板培养后的菌落特征,再提纯培养细菌进行革兰染色镜检、动力实验、生化反应。可鉴定粪便标本中的病原菌。
简介:分离是为了最后的辉煌。——题记2005年10月12日,酒泉卫星发射中心指挥大厅。点火!起飞!抛掉逃逸塔!助推器分离!一二级分离!整流罩分离!船箭分离!一次次令人激动的成功分离,终于迎来了最后的辉煌——飞船准确入轨。于是,才有了9时39分,北京航天飞控中心中国载人飞船发射总指挥陈炳得的郑重宣布:“神舟六号载人飞船发射取得圆满成功!”
简介:摘要:以广西梧州动物研究所黑叶猴为研究对象,在微观水平上,通过高通量测序的方法对黑叶猴粪便肠道菌群的DNA进行定量检测;宏观水平上,在掌握灵长类肠道菌群的类型并配制相应选择培养基的基础上,对黑叶猴粪便中的微生物进行分离与纯化,最终通过对各培养基的菌群染色鉴定,分析得出黑叶猴肠道菌群种类及数量分布,探讨黑叶猴肠道共生菌群与能够消化纤维素、取食植物的有毒部分这一独特生态位之间的联系。整个实验结果能够解释实验过程出现的各种实验现象,说明了黑叶猴肠道微生物是革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌,黑叶猴肠道微生物大致属于以下四个属:拟杆菌属(Bacteroidetes)、疣微菌属(Verrucomicrobiota)、变形菌属(Proteobacteria)、厚壁菌属(Firmicutes)。并且各属中的各物种表明黑叶猴肠道微生物有致病菌和调节肠道功能的菌落。说明黑叶猴肠道内的菌群相互作用、相互制约共同形成了一个稳定的肠道系统,从而维持了机体的健康。其中中黑叶猴肠道菌群中的优势菌群是在纤维物质消化中起主要作用的厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)。