简介：应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母，用以检测类，抗雌激素化合物和环境样品的类，抗雌激素活性．采用多聚酶链反应（PCR）法扩增人雌激素受体（hER）基因，构建诱饵质粒pGBKT7-ERLBD；分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGADg24-GRIP1和pGAD424-SRC1；诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187，于营养缺陷型培养基（SD／-Trp／-Leu）上筛选阳性菌落，分别构建两种ER双杂交酵母ER＋GRIP1和ER＋SRC1．考察双杂交酵母与不同激素：17β-雌二醇（E2）、二氢睾酮（DHT）、孕酮（PG）以及三碘甲状腺原氨酸（T3）的结合情况，并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬（4-OHT）与酵母的相互作用．结果表明：ER＋GRIP1和ER＋SRC1酵母均能够专一性的和E2结合，并存在显著的剂量-效应关系，E2对ER＋GRIP1和ER＋SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7．3×10^-11mol·L^-1和1．5×10^-10mol·L^-1，其中ER＋GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER＋SRC1-酵母细胞．4-OHT能够抑制E2诱导ER＋GRIP1酵母细胞产生的酶活性，并存在显著的剂量-效应关系，IC50值为1．0×10^-7mol·L^-1．表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类，抗雌激素活性．

简介：什么是基因重组？回答有多种说法。笔者认为，基因重组就是在原有基因类型的基础上，任何造成细胞基因型变化或基因在DNA分子上重排的过程。因此，就发生的层次来说，基因重组有DNA分子水平和细胞水平两个层次。DNA分子水平的基因重组，就是在原有基因类型的基础上，基因在DNA分子上发生排列顺序上的变化。细胞水平的基因重组，就是由于细胞整体的行为变化而发生的基因在整个细胞中发生重新组合的过程。因此，基因重组的结果使特定细胞中的基因种类、数量或在DNA分子上的排列顺序发生可遗传的改变，都可能会导致细胞代谢发生变化而影响生物性状的表现。

简介：重组雌激素受体基因酵母筛选南山茶子抗骨质疏松有效部位的实验的结果显示醋酸乙酯部位对雌激素受体表现出双向调节的作用,南山茶重组人基因酵母孕激素受体拮抗作用,南山茶的抗孕激素活性测定分别称取南山茶子醇提物

简介：复习“基因突变和基因重组”这节内容时主要是通过基于常态下的教学教材,实现学生对基因突变的基本概念的掌握,从而加深对基因突变的内涵和外延的理解.基因重组内容涉及减数分裂过程,这一直是教学的难点,因此在复习过程中教师要注重对学生实际理解能力和图形分析能力的培养,通过实践提高学生的认知能力.

简介：利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1～D6(简称OCIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.

简介：阐述了酵母表达系统在表达外源基因特别是大分子真核生物基因方面的优越性,分析了由于酵母表达系统的局限性如聚合体的存在、信号肽加工不完全、内部降解等而造成的产物不均一现象,提出了相应的解决方法。

简介：有许多不同的酵母已经有效地被利用来分析或表达真核蛋白。酵母的优点是生长快速，发酵条件可轻易批量化，设备相对简单．各项遗传和生物特性都被充分了解，更重要的是可以像哺乳动物细胞一样做转译后的修饰．所以非常适合于真核重组蛋白的大量生产。

简介：摘要目的考察重组（酵母）乙肝疫苗的临床免疫效果。方法以我院接种该疫苗的240名患者为研究对象，对不同免疫程序的免疫效果进行考察。结果接种1月后，加速免疫程序和常规免疫程序患者均能获得较高的免疫保护率，两组患者间无统计学差异(P>0.05)。接种1年后的随访评价结果显示，加速免疫程序组患者的免疫保护效果弱于常规免疫程序组患者，且具有统计学差异(P<0.05)。结论重组（酵母）乙肝疫苗具有较高的免疫保护率，且在0、1、6月常规免疫程序中的免疫效果更持久。

简介：

简介：摘要目的构建hIL-10基因的酵母表达载体，为hIL-10在毕赤酵母高效表达和生物学功能研究奠定基础。方法采用PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增hIL-10基因，以内切酶EcoRI/XbaI对hIL-10基因和质粒pPICZαA进行酶切，将酶切产物进行连接，纯化连接产物并电转化E.coliDH5α，用含Zeocin的LB培养基筛选重组大肠杆菌并抽提质粒进行酶切和DNA测序鉴定；以重组质粒电转化感受态毕赤酵母，以不同浓度Zeocin的YPDS平板筛选重组酵母菌株并对重组酵母作菌落PCR鉴定。结果经PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增获得大小约540bp的片段；重组质粒经EcoRI/XbaI酶切后获得约540bp和3500bp的两种片段；DNA测序结果与Genbank中hIL-10基因序列一致；重组酵母经菌落PCR也获得540bp的片段。结论成功构建了hIL-10基因的酵母表达载体pPICZαA-hIL-10。

简介：乙肝疫苗是预防并最终控制乙型病毒性肝炎（乙肝）最有效的手段。我国以往乙肝基因工程疫苗的研究大部分单纯以儿童或单纯以成人研究为主，为了获得乙肝基因工程疫苗的免疫效果和安全性，我们采用重组酵母乙肝疫苗对869例6～60岁的对象进行了免疫效果观察，现将结果报告如下。

简介：巴斯德毕赤酵母表达载体连同外源基因通过同源重组整合至宿主染色体基因组座位上,我们将在巴斯德毕赤酵母中表达外源蛋白的情况总结如表1,　　巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白分胞内的表达和分泌到胞外两种方式

简介：目的为了解不同剂量重组酵母乙肝疫苗封成人免疫效果。方法采用0、1、6月免疫程序，对98位18-40岁健康成人接种5ug和10ug两种剂型重组酵母乙肝疫苗。结果接种10ug组个别人有轻度反应，5ug组无任何全身和局部反应。两组观察对象于初免后36个月，检测抗-HBS阳转率分别为84．00％、61．22％，抗体GMT滴度为197．53和110．66。结论接种重组酵母乙肝疫苗后3年采用检测高剂量抗体阳转率和抗体GMT滴度显着高于低剂量组。说明成人接种10ug重组酵母乙肝疫苗免疫效果优于5ug。

简介：摘要目的评价儿童接种重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫效果。方法采用随机整群抽样法选取489例接种重组酵母乙型肝炎疫苗儿童，接种后检测血清HBsAg、抗-HBs和抗-HBc水平,随访观察免疫效果。结果本组489例儿童在免疫接种1年后和5年后的HBsAg阳性率、抗-HBc阳性率之间的差异无统计学意义（P＞0.05），免疫接种5年后的抗-HBs阳性率为33.95%，明显低于免疫接种1年后的93.56%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论儿童接种重组酵母乙肝疫苗能够获得持久、有效的免疫效果，值得进一步推广使用。

简介：目的构建针对人抑凋亡基因Livin的小干扰RNA（siRNA）重组表达质粒载体。方法通过分子克隆技术,设计并合成具有基因特异性的3组寡核苷酸片段,克隆到pmU6质粒载体,并经菌落PCR鉴定及测序鉴定,Livin的siRNA序列成功克隆到重组表达质粒载体中。结果经菌落PCR鉴定及测序鉴定证实,人Livin的siRNA序列成功克隆到表达载体中,插入序列正确。结论成功构建了LivinsiRNA质粒表达载体,为后续研究降低或沉默Livin基因表达后能否有效抑制膀胱癌细胞增殖和促进细胞凋亡奠定了基础。

简介：目的:利用Adeasy-1系统,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体.方法:PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段,经测序验证无误后,亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒.经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒,再在293细胞中进行包装扩增,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达.结果:测序证实PCR产物为CARP全长cDNA;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;转染293细胞3天后可见绿色荧光,回收病毒可以重复感染293细胞,证明病毒包装成功.

简介：全程免疫后的时间与抗-HBs有效阳性率之间存在线性关系,　　2.2 接种后不同时间的HBsAg、抗-HBc、HBV感染情况 ,将各组之间有效阳性率回归分析发现全程免疫后的时间与抗-HBs有效阳性率之间存在线性关系(P＜0.01)

简介：对晚期胰腺癌这一“回天乏术”的恶性疾病，上海瑞金医院研究出一种新的治疗方法。在超声内镜引导下植入基因重组的人5型腺病毒治疗一例晚期胰腺癌患者，疗效观察发现具有缩小肿瘤体积、破坏肿瘤新生血管的作用，有望为晚期胰腺癌患者提供一种新的治疗手段。

简介：摘要：目的：对成人接种重组酵母、CHO乙肝疫苗的效果进行分析。方法：研究对象选择接种乙肝疫苗的成年人，均于2021.11-2023.07期间，在我疾病预防控制中心接种，共计96例，通过随机抽样法分组，各48例。常规组、研究组分别接种重组酵母乙肝疫苗、重组CHO乙肝疫苗，比较研究接种结果，以抗-HBs阳性率情况为主。结果：两组接种人员从年龄、性别、体重指数方面的乙肝疫苗接种效果相比，抗-HBs阳性率并无明显差异性，P>0.05；且两组接种人员在接种后均无明显不良反应，具有接种安全性；但是，两组接种人员中，体质量指数超过或等于28的成人抗-HBs的阳性率低于体质量指数小于28者，差异性显示P<0.05。结论：为成人接种重组酵母、CHO乙肝疫苗所产生的效果比较接近，且接种期间不会产生严重不良反应，具有接种有效性和安全性。

简介：本文研究了发酵过程中高级醇的产生与基本氨基酸代谢的关系.在发酵液中加入一定量的缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸,结果酵母对这三种氨基酸的同化作用增强,相应高级醇的产量也增加了,表明啤酒的高级醇含量与相应氨基酸的同化作用有关.于是,我们尝试从啤酒酵母基本氨基酸透性酶的BAP2基因表达着手,研究了它在发酵过程中对基本氨基酸同化的影响和对高级醇产生的影响.BAP2基因的表达能促进缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的同化率,从而导致啤酒中异戊醇(由亮氨酸合成)含量增加,但由缬氨酸合成的异丁醇和由异亮氨酸合成的戊醇并没有增加.而且结果还显示每种高级醇的合成机理是相互联系的.