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  • 简介:虽然双杂交系统可筛选出大量蛋白质相互作用,摘要酵母双杂交系统是研究蛋白质相互作用的一种有效方法,双杂交系统通过简便的酵母遗传分析对报告基因表型进行检测即可实现对于蛋白质间相互作用的研究

  • 标签: 体系新 双杂交体系 新发展
  • 简介:应用酵母双杂交技术构建重组人雌激素受体基因酵母,用以检测类,抗雌激素化合物和环境样品的类,抗雌激素活性.采用多聚酶链反应(PCR)法扩增人雌激素受体(hER)基因,构建诱饵质粒pGBKT7-ERLBD;分别提取并纯化两种含有ER共激活因子基因的靶质粒pGADg24-GRIP1和pGAD424-SRC1;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,分别构建两种ER双杂交酵母ER+GRIP1和ER+SRC1.考察双杂交酵母与不同激素:17β-雌二醇(E2)、二氢睾酮(DHT)、孕酮(PG)以及三碘甲状腺原氨酸(T3)的结合情况,并考察了雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬(4-OHT)与酵母的相互作用.结果表明:ER+GRIP1和ER+SRC1酵母均能够专一性的和E2结合,并存在显著的剂量-效应关系,E2对ER+GRIP1和ER+SRC1酵母β-半乳糖苷酶活性诱导的EC50值分别为7.3×10^-11mol·L^-1和1.5×10^-10mol·L^-1,其中ER+GRIP1酵母细胞诱导产生的酶活性值明显高于ER+SRC1-酵母细胞.4-OHT能够抑制E2诱导ER+GRIP1酵母细胞产生的酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,IC50值为1.0×10^-7mol·L^-1.表明重组人雌激素受体基因酵母可以用于检测化合物和环境样品的类,抗雌激素活性.

  • 标签: 酵母双杂交 人雌激素受体 重组基因酵母 抗雌激素活性
  • 简介:目的:构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法:以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料,提取柱头的总RNA,用亲和层析法分离纯化mRNA,利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果:羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2.5×10^5;扩增后文库的库容量约为4×10^8,重组率为96%,插入片段大小为0.4~3kb,平均长度在0.8kb左右。结论:构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库,为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

  • 标签: 羽衣甘蓝 柱头 CDNA文库 酵母双杂交
  • 简介:目的:采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统,筛选与甲状旁腺素1型受体(PTH1R)相互作用的蛋白。方法:将全长P册JR基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵,用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTHIR和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中,检测Mell报告基因的表达,并进行相互作用的验证。结果:测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTH1R相互作用;根据对SNAPIN基因的功能分析,其可能与细胞内钙稳态的调控有关。结论:为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的机制提供了一定的线索。

  • 标签: 甲状旁腺素l型受体 酵母双杂交 相互作用 SNAPIN
  • 简介:生命中无时无刻不存在生物大分子之间的相互作用,其中包括核酸之间、核酸与蛋白质之间以及蛋白质之间的相互作用。以往研究蛋白质之间的相互作用通常采用生化技术,如偶联、免疫共沉淀等方法。1989年,Fields和Song创立了一种崭新的遗传学方法用于研究蛋白质之间的相互作用,即酵母双杂交系统(Yeast

  • 标签: 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用 报告基因 转录激活 杂交蛋白 细胞周期
  • 简介:在长期进化中,植物形成了抵御病毒等病原微生物侵染的精细防御系统。在病毒侵染、复制和传播过程中,其编码的一些蛋白,如外壳蛋白、运动蛋白、复制酶类等能够与植物基因编码的蛋白发生相互作用。酵母双杂交系统是体外研究蛋白质间相互作用的有利工具,不但可以用于研究已知蛋白质的互作,还可以发现新蛋白,揭示特定蛋白互作网络与作用机制,在植物蛋白与病毒蛋白互作研究中已得到广泛的利用。本文主要综述利用酵母双杂交系统研究植物与病毒蛋白相互作用的国内外进展。

  • 标签: 酵母双杂交 植物 病毒
  • 简介:目的构建肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒,为进一步研究其相互作用蛋白奠定基础。方法将人肝再生增强因子的编码序列重组入pGBKT载体中,经酶切及序列分析鉴定构建正确后,转化酵母AHl09菌株,转化子在SD/-His/-Trp选择培养基上培养;滤纸法β-半乳糖苷酶活性测定;Westemblot检测目的蛋白表达情况。结果正确地构建了人肝再生增强因子的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hALR,其酵母AHl09转化菌在SD/-Trp培养基上30℃培养65h,长出φlmm菌落,而在SD/-Trp-His培养基上不生长,β-半乳糖苷酶活性检测呈阴性。Westemblot结果显示目的蛋白以35KD的融合蛋白形式表达。结论诱饵质粒pGBKT7-hALR对宿主菌AHl09没有毒性作用,能稳定表达目的蛋白,不能自身激活报告基因,可用于酵母双杂交的筛选工作。

  • 标签: 肝再生增强因子 酵母双杂交 自身激活作用
  • 简介:利用酵母双杂交试验,鉴定了细胞内信号传导蛋白SMAD3和SMAD4的相互作用。通过SMAD3和SMAD4各突变体的同源和异源相互作用的双杂交反应,确定SMAD4介导信号传递的功能区在中间连接区,SMAD3的功能区在C末端。

  • 标签: SMAD3 SMAD4 酵母双杂交
  • 简介:目的:筛选与癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)相互作用的蛋白。方法:构建诱饵(Bait)质粒pGB-Psmd10-1,采用β-半乳糖苷酶滤膜分析检测其自身转录活性,以Bait质粒筛选人Hela细胞MATCHMAKERcDNA文库,共转染重复验证阳性克隆,并测序鉴定。结果:成功构建Bait质粒,经验证对报告基因LacZ无自激活作用。以Bait质粒筛选人Hela细胞cDNA文库,获得83个克隆,其中5个克隆经重复验证确定为阳性克隆,测序结果显示其cDNA为Psmc4的3段不同剪接体(NM_006503.2,NM_153001.1)。结论:在人Hela细胞中,Psmc4为与Cankyrin相互作用的蛋白。

  • 标签: 癌性锚蛋白重复序列 酵母双杂交 Psmc4 HELA细胞
  • 简介:MeCWINV6是木薯6个细胞壁转化酶基因之一。本研究中应用酵母杂交技术筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子,为进一步研究该基因的表达调控提供基础。由MeCWINV6的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建木薯酵母杂交cDNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子。构建的cDNA文库库容为7.08×106,插入片段大小在250~2000bp间。筛选大于1000bp的35个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析筛选出锌指蛋白、组氨酸蛋白H1.2和AT-hook核定位蛋白三个转录因子以及一个线粒体受体TOM5。为进一步研究MeCWINV6基因的表达调控机制提供了候选转录因子。

  • 标签: MeCWINV6 SMART技术 c DNA文库 酵母单杂
  • 简介:酵母基地的人才“酵母”李一丹1994年10月23日,中央电视台《新闻联播》节目报道,我国最大的食用酵母基地在宜昌建成。这个基地就是国家“七五”工业性试验项目,集科研,生产,贸易为一体,年产4000吨高活性干酵母的宜昌食用酵母基地。这个日前我国乃至业洲...

  • 标签: 酿酒活性干酵母 食用酵母 酒精活性干酵母 研究开发 酵母调味品 高科技人才
  • 简介:小魔女苗苗一边准备材料,一边嘀嘀咕咕:"面粉、水、奶油、糖、鸡蛋,还需要什么?哦,对了,酵母。"

  • 标签: 酵母 魔法 面粉 奶油
  • 简介:两种风马牛不相及的产品组合在一起,创造出一种新的品类,具有某些让消费者迫切想拥有的功能。这种看似随机无意的混搭,能够产生惊人的效果,实际上是经过了品牌经理无数次探询和试验,才得以“灵光乍现”。

  • 标签: 产品组合 品牌经理 消费者
  • 简介:酵母提取物是一种国际流行的营养性多功能鲜味剂和风味增强剂,在欧洲占鲜味剂市场的1/3.均采用面包酵母,啤酒酵母,园酵母等为原料,通过自溶法包括改进的自溶法,酶解法,酸热加工法等来制备.

  • 标签: 酵母提取物 酵母深加工 鲜味剂 风味增强剂
  • 简介:摘要华裔和中国文化因素是贯穿彼得?凯里整个创作的一个重要主题,在他的小说中较为真实地再现了华裔在澳国历史上的处境。凯里的创作打破了澳国文学史上对华裔和中国的类型化表述,同时也强调了某些类型化表述。在澳大利亚的民族认同中,由于白澳政策的长期存在和深远影响,使得备受压制的华裔的族裔认同走向了社会主流认同的反面。然而,华裔的这种反向认同也促进了澳大利亚以白人为主的民族认同的形成。

  • 标签: 彼得?凯里 华裔 文化认同 套话
  • 简介:以19个欧洲丁香品种为亲本,进行了38个杂交组合的人工杂交授粉和杂交种子播种试验。结果表明,有26个杂交组合能够正常结实,但结实率差异较大,其中有5个杂交组合的结实率达到90%以上;杂交种子播种后,有25个组合能够正常出茁。但出苗率差异很大。通过对杂交授粉结实率和杂交种子出苗率的统计分析,探索了欧洲丁香不同品种间人工杂交亲和力的强弱,为今后丁香杂交苗的培育及优良单株的筛选奠定了基础。

  • 标签: 欧洲丁香 杂交组合 亲和力 结实率 出苗率
  • 简介:通过综述国内外杜鹃花自然杂交与远缘杂交的研究,归纳了前人在杜鹃花自然杂交以及远缘杂交取得的成果,杜鹃花自然杂交现象较为频繁,自然杂交后代的发现能大大缩短杜鹃花育种进程.远缘杂交主要存在花粉管生长异常、胚败育、杂交苗白化三个问题,通过一定技术手段可以解决.尽管杜鹃花远缘杂交整体成功率较低,亲本间可配性差异大,然而远缘杂交能够创造新种质、转移目标性状,同时有助于研究种间亲缘和进化关系.

  • 标签: 杜鹃花育种 自然杂交 远缘杂交
  • 简介:常规研究蛋白质相互作用的生化方法包括化学交联、免疫共沉淀等,这些方法反映的是体外的情况而非体内情况,而且这些方法无法让我们直接克隆与某已知蛋白质作用的未知蛋白质的基因。最近一种新的技术逐渐成熟并得到广泛应用,它就是“Yeasttwo-hybridsys-tem”,我们姑且将其译为“酵母双杂合系统”。该技术

  • 标签: 酵母双杂合系统 转录激活因子 报告基因 蛋白质相互作用 转录激活区 启动子