简介:目的KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础.方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中.经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199.其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性.此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体.结果pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础.
简介:摘要目的研究探讨不规则抗体对ABO血型鉴定的影响,并为正确血型鉴定提供依据。方法随机抽取2015年9月-2016年9月间在我院申请输血治疗的患者5000例作为研究对象,通过对其实施血型鉴定、不规则抗体筛查,记录不规则抗体干扰血型鉴定的情况,并对这类患者进行进一步抗体鉴定,了解抗体的特异性、类型。结果5000例患者中共有29例筛出不规则抗体阳性干扰血型鉴定,检出阳性率为0.58%。在Rh系统、MNS系统、Lewis系统、P系统中均有不规则抗体产生,对血型鉴定造成干扰,对不规则抗体类型进一步鉴定,可见IgG和IgM类不规则抗体各占6.90%、10.34%,混合抗体占82.76%。结论IgG和IgM类不规则抗体是干扰ABO血型鉴定的主要因素,做好患者血清中的不规则抗体的检测、筛查对于保证输血患者的用血安全、提高治疗质量都有重要价值。
简介:目的制备并鉴定一组抗曲霉不同抗原的单克隆抗体。方法采用烟曲霉细胞壁抗原成分、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠菌属抗原的交叉反应。结果获得29株稳定分泌抗曲霉单抗的杂交瘤细胞株,其中用烟曲霉细胞壁抗原成分免疫获得11株,用分泌抗原免疫获得13株,用孢子免疫获得5株;Ig亚类鉴定,11个克隆株为IgG1亚类,3个克隆株为IgG3,15个克隆株为IgM。免疫荧光法鉴定29株单抗特异性识别烟曲霉细胞壁抗原,与其他曲霉抗原有交叉反应。结论29株单克隆抗体,对于建立侵袭性曲霉感染早期诊断方法、筛选曲霉保护性抗体以及研究抗体保护机制奠定了实验基础。
简介:摘要目的讨论研究对患者进行不规则抗体筛查及鉴定并及时发现具有临床意义的不规则抗体并选择相合的血液有助于确保患者输血安全。方法对我院2014年1月至2014年11月拟输血或手术备血的500名患者进行不规则抗体筛查。将筛查结果呈阳性的标本进行抗体鉴定并分析抗体特异性。结果不规则抗体阳性患者共9例,占1.8%。不规则抗体阳性患者进行抗体鉴定试验后Rh系统5例,占55.6;MNSs系统2例,占22.2%;抗A-1系统患者1例,占11.1%;P系统1例,占11.1%。对其输注无相应抗原的红细胞未有一例发生溶血性输血反应。结论对预期输血及手术备血患者进行抗体筛查既能有效避免由于配血困难而导致抢救时间延误的发生,又能够避免溶血性输血反应的发生。
简介:目的构建及初步鉴定大肠癌噬菌体抗体Fab呈现库。方法分离大肠癌患者外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA。用相应引物进行PCR,扩增出轻链和重链Fd段基因。经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XLl-Blue菌株,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中。结果从分离出的淋巴细胞中提取到高质量RNA.RT-PCR分别扩增出约680bp大小的K、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接转化,成功地构建了人源性Fab抗体基因库,库容量达2.1×10^7。轻链K、λ和重链Fd基因均插入pComb3的重组率为50%。结论构建了大肠癌患者自然致敏抗体Fab段噬菌体呈现库,为筛选大肠癌相关抗体打下基础。
简介:【摘要】目的 对输血患者进行血清意外抗体鉴定,分析其特异性以及分布情况,确保输血安全及有效性。方法 此次的研究样本来源于辖区内用血医疗机构,包括三甲医院3家,二甲医院6家。共收集到177例患者的血清标本,选取时间段在2019年9月~2020年9月。采取盐水介质法、凝聚胺法、聚乙二醇间接抗球蛋白法以及微柱凝胶法,对收集到的血清标本进行检测,筛查其意外抗体,分析本次研究对象中的意外抗体阳性率,并根据不同性别进行该项阳性率的比较。针对出现筛查结果显示为阳性的患者进行特异性鉴定,并分析其中特异性抗体的占比情况。结果 入选的177例输血患者中,经过意外抗体筛查的检测,发现有53例患者的血清被检出存在意外抗体,其阳性率为29.94%(53/177)。53例患者中男性与女性占比分别是30.20%(16例)、69.8%(37例),存在显著差异(P<0.05)。且女性阳性样本中有输血史31例(58.5%),有妊娠史15(28.3%),有输血史和妊娠史7例(13.2%)。53例意外抗体筛查为阳性的患者中,“Rh—hr”系统41例(77.4%),“MNSs”系统5例(9.4%),“Lewis”系统4例(7.5%),“P”系统1例(1.9%),“Kidd”1例(1.9%),自身抗体1例(1.9%),“Rh—hr”系统占比最高,均明显高于其他系统的检出占比(P<0.05)。在Rh血型系统抗体分布中,各类抗体的占比从高到低排列依次是抗
简介:摘要目的探讨孕妇红细胞血型不规则抗体的分布及特点。方法选择2016年1月至2018年6月,于青岛市中心血站进行红细胞血型不规则抗体鉴定的130例孕妇为研究对象。其年龄为25~42岁,中位年龄为32岁。对这130例孕妇的ABO及Rh血型进行鉴定,同时对其Rh血型系统不规则抗体效价采用试管法进行测定,红细胞血型不规则抗体筛查与鉴定采用微柱凝胶法或者试管法。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求,并且与所有受试者签署临床研究知情同意书。结果①纳入研究130例孕妇中,A、B、O、AB型血型为44例(33.8%)、48例(36.9%)、27例(20.8%)和11例(8.5%);Rh阳性为90例(69.2%),Rh阴性为40例(30.8%)。②本研究130例孕妇的血清标本中,Rh、MNSs、P、Lewis血型系统不规则抗体为71例(54.6%)、28例(21.5%)、3例(2.3%)和14例(10.8%),抗-HI为4例(3.1%)。③ 71例检出Rh血型系统不规则抗体的孕妇中,检出率最高的抗体效价为2,其检出率为26.8%(19/71)。抗体效价系512的孕妇为1例,其Rh血型为阴性,既往有RhD阳性红细胞制品输血史。结论青岛市红细胞血型不规则抗体阳性孕妇的不规则抗体分布,以Rh血型系统为主,其次是MNSs血型系统。对孕妇进行产前红细胞血型不规则抗体筛查和鉴定,有利于保证孕妇输血安全,以及降低新生儿溶血病(HDN)的发生风险。
简介:目的:制备针对人釉原蛋白的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法:用原核表达系统表达纯化的重组人全长釉原蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。小鼠体内诱导制备腹水,通过饱和硫酸铵沉淀法和蛋白G亲和层析柱纯化抗体。结果:筛选到3株能稳定分泌抗人釉原蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为H10G1、H3G1、G5H3。腹水单克隆抗体效价分别为1∶243000、1∶729000、1∶729000,纯化后单克隆抗体效价为1∶81000、1∶243000、1∶729000。3株单克隆抗体抗原表位分析显示均识别人釉原蛋白45~149位的氨基酸序列。结论:成功制备出针对人釉原蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究探讨釉原蛋白在牙根发育及牙周再生中的功能奠定了基础。
简介:目的应用自制的大肠癌相关蛋白SCAP47作为抗原制备兔多抗血清和鼠单克隆抗体,测定效价,鉴定特性,为相关抗体的临床应用提供可行性依据。方法①制备兔多抗血清:实验动物为纯种新西兰白兔,卡介苗基础免疫后,分次多点注射抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和双向凝胶扩散法测血清效价,分离高效价血清。②制备小鼠单克隆抗体:实验动物为BALB/c小鼠,分次腹腔、脾内注射抗原蛋白乳剂和水剂,采用ELISA测血清效价,高效价鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,有限稀释法亚克隆阳性细胞株,克隆细胞种植小鼠腹腔,收获腹水,纯化单克隆抗体,鉴定抗体效价、亚类、纯度。结果①3只实验兔中2只产生了一定效价的多抗血清,多抗血清效价:间接ELISA结果兔1为1:6400,兔2为1:1600;琼脂糖双扩试验结果兔1为l:32,兔2为1:4。②克隆了2株能产生抗SCAP47抗原的单克隆抗体细胞株抗SCAP47-B1和抗SCAP47-B2,将细胞种植于BALB/c小鼠腹腔,成功诱导小鼠腹水生成,以50、22kD为主要蛋白,Westernblot试验证实为小鼠IgG,琼脂糖双扩试验显示为小鼠IgG2a亚型;免疫荧光细胞组织化学试验显示,SCAP47蛋白在大肠癌细胞膜表面可表达,正常对照细胞未见表达,大肠癌细胞膜表面表达的SCAP47蛋白可与抗SCAP47-B1细胞株分泌的抗体产生特异性结合反应;纯化的单克隆抗体效价:SCAP47-B1为1:1600,SCAP47-B2则达到1:6400。结论通过杂交瘤单克隆抗体技术制备和纯化的抗SCAP47单克隆抗体,经效价检测和性质鉴定,证明初步达到了免疫试验的要求,为进一步的临床应用提供了可行性依据。
简介:摘要目的研究分析在临床输血中不规则抗体筛查及鉴定的意义。方法此次研究的对象是选取2016年1~9月本院门诊及住院患者进行血型检查的13566份标本,对其进行抗体筛查,筛查出阳性者,并对其进行抗体鉴定。结果13566份标本中筛查出阳性标本共24份。其中抗-E4例,抗-cE7例,抗-Ce4例,抗-M1例,抗-Mur1例,抗-Lea2例,自身抗体3例。在22份抗体阳性标本中,发生阳性抗体几率最高的为妇产科患者,共12例,所占比例为54.5%;其次为骨科、血液内科、肿瘤科、普外、神经外科。结论进行输血前,加强不规则抗体筛查和鉴定,可以及早发现、确认有临床意义的抗体,便于提前为抗体阳性的患者准备合适的血液,有助于降低输血性溶血反应的发生率,具有临床应用价值。
简介:目的:分析我院患者血型不规则抗体的分布特点,并探讨筛查血型不规则抗体对于临床输血的意义。方法:收集2021年1月至2021年12月期间,我院收治的患者17405例,采用微柱凝胶法对红细胞血型不规则抗体进行检测,对阳性患者鉴定其特异性,并调查其阳性率以及特异性分布。结果:本组17405例患者中共有94例血型不规则抗体,阳性率为0.54%(94/17405)。女性不规则抗体阳性率(0.63%)高于男性(0.40%),(P<0.05),抗体以Rh,MNSs和Lewis血型系统为主。结论:对住院患者进行不规则抗体筛查以及特异性鉴定具有重要意义,临床有必要考虑对患者和供血者常规开展Rh血型系统D、E、e、C、c五种抗原进行检测并实行抗原相合性血液输注。
简介:摘要:目的:探究在临床输血前给予患者血型鉴定和进行抗体筛查时,对患者输血安全性的影响效果。方法:对我院2021年3月——2022年3月期间接收的50例输血治疗患者展开回顾性研究,对患者展开ABO血清和RHE血型鉴定,并给予其抗体筛查,探究其对输血安全性的影响情况。结果:本研究的50例患者中,其均正常完成ABO血型和HR血型的检查,其中有12例患者为A型血,有11例患者为B型血,有11例患者为AB型血,有11例患者为O型血。同时,50例患者中,RhD阴性患者有3例,占比为6.00%。在进行抗体筛查时,有2例患者为不规则抗体阳性,占比为4.00%,其分别为妊娠患者和具有输血史患者。在给予输血干预后,患者均为发生不良反应,安全性较高。结论:在输血前对患者的血型进行鉴定,并展开抗体筛查工作,可保证将患者的输血安全性,减少患者不良输血事件的发生,意义显著。
简介:摘要:目的:探究在临床输血前给予患者血型鉴定和进行抗体筛查时,对患者输血安全性的影响效果。方法:对我院2021年3月——2022年3月期间接收的50例输血治疗患者展开回顾性研究,对患者展开ABO血清和RHE血型鉴定,并给予其抗体筛查,探究其对输血安全性的影响情况。结果:本研究的50例患者中,其均正常完成ABO血型和HR血型的检查,其中有12例患者为A型血,有11例患者为B型血,有11例患者为AB型血,有11例患者为O型血。同时,50例患者中,RhD阴性患者有3例,占比为6.00%。在进行抗体筛查时,有2例患者为不规则抗体阳性,占比为4.00%,其分别为妊娠患者和具有输血史患者。在给予输血干预后,患者均为发生不良反应,安全性较高。结论:在输血前对患者的血型进行鉴定,并展开抗体筛查工作,可保证将患者的输血安全性,减少患者不良输血事件的发生,意义显著。
简介:摘要目的分析临床输血前血型鉴定及抗体筛查对输血安全的重要性,以提高患者临床治疗的有效性和安全性。方法回顾性分析2017年3月-2017年8月我院收集的3366例患者的输血前血样标本。对所有输血前标本均进行输血前血型鉴定(ABO、RhD血型)和抗体筛查,并对血型鉴定结果和筛查结果进行统计分析。结果2419例标本属于手术室备血,占比71.87%。3366例标本中,检出A型血35.74%,B型血12.57%,O型血40.67%,AB型血11.02%。检出RhD阴性1.52%,其中妇科15例,产科21例,泌尿外科8例,胸外科4例,血液科2例,传染科1例;检测出不规则抗体阳性0.31%。结论临床输血前血型鉴定及抗体筛查有利于及时发现不规则抗体,同时减少溶血性输血反应的发生,对保证输血的安全性和有效性至关重要。
简介:摘要目的探讨输血前血型鉴定与抗体筛查对临床输血安全性的影响。方法选取2012年12月-2014年12月我院收治需要输血治疗的患者140例,将其平均分为对照组和观察组,每组患者70例。对照组患者在输血前所进行血型鉴定,观察组患者在对照组的基础上加用抗体筛查,比较两组患者因意外情况而造成的不能及时治疗情况发生的几率。结果对所有患者的临床资料进行回顾性分析后发现,观察组患者由于意外情况发生而不能及时治疗的几率为1.43%,明显低于对照组患者,P<0.05,具有显著性差异和统计学意义。结论在输血治疗之前对患者进行血型鉴定与抗体筛查能够减少各种输血反应情况的发生,保证患者得到良好的治疗,具有极其重要的临床应用价值,值得在临床中推广应用。