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  • 简介:噬菌体展示技术已成为制备高亲和力抗体的强有力的工具。而噬菌体抗体的筛选是在获得高亲和力抗体过程中很关键的一个环节。总结了针对不同复杂程度的抗原所须采用的不同筛选方法,并简单介绍了高通量筛选的优势。

  • 标签: 噬菌体展示 噬菌体抗体库 功能筛选 高通量筛选
  • 简介:目的构建及初步鉴定大肠癌噬菌体抗体Fab呈现。方法分离大肠癌患者外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA。用相应引物进行PCR,扩增出轻链和重链Fd段基因。经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XLl-Blue菌株,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中。结果从分离出的淋巴细胞中提取到高质量RNA.RT-PCR分别扩增出约680bp大小的K、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接转化,成功地构建了人源性Fab抗体基因,库容量达2.1×10^7。轻链K、λ和重链Fd基因均插入pComb3的重组率为50%。结论构建了大肠癌患者自然致敏抗体Fab段噬菌体呈现,为筛选大肠癌相关抗体打下基础。

  • 标签: 大肠癌 噬菌体抗体库 FAB抗体
  • 简介:应用Pharmacia公司的重组噬菌体抗体系统,从经过人交联纤维蛋白特异抗原D二聚体(DD)免疫过的鼠脾细胞mRNA中构建出组合单链抗体(ScFv)cDNA文库。文库cDNA克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化大肠杆菌TG1,得到2.5×105个氨苄抗性菌落。通过噬菌体表面呈现,用DD对表达的重组噬菌体单链抗体文库进行三轮亲和富集获得一株特异抗DD的噬菌体单链抗体(ScFvA11)。经Phage-ELISA鉴定,呈现在噬菌体表面的ScFvA11与DD结合的ELISA阳性滴度小于107tfu/ml,而与人纤维蛋白原结合的ELISA滴度大于1010tfu/ml,两者相差1000倍以上。表明ScFvA11具有较好的DD结合特异性。经序列分析,ScFvA11cDNA全长729bp,其中Vh基因354bp,编码118个氨基酸;Vl基因327bp,编码108个氨基酸;Vh与Vl之间为(Gly4Ser)315个氨基酸连接肽。

  • 标签: 单链抗体 噬菌体抗体库 纤维蛋白 D二聚体
  • 简介:目的该研究旨在利用噬菌体展示技术,构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体,搭建人源性抗体制备的技术平台,解决鼠源性单克隆抗体临床应用的不足,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体。对此抗体双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因,共有2.08×10^7个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此,所构建的噬菌体抗体的库容量为1.46×10^7,经过滴定,原始抗体的滴度为1.06×10^12pfu/mL。经初步筛选,抗体得到了不同程度的富集。结论利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建了小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性Fab噬菌体抗体,为人源性单克隆抗体的制备提供了良好的条件,为进一步的研究奠定了基础,亦将有益于小儿呼吸道合胞病毒感染的诊断、治疗和预防。

  • 标签: 抗体库 噬菌体展示技术 FAB抗体 呼吸道合胞病毒 儿童
  • 简介:如何治疗抗生素无效的感染?用另一种感染。东欧的医生们已经使用实验室培养的病毒安全地治愈了几百万例伤口。在(美国)这儿为什么不也试一下呢?

  • 标签: 噬菌体 实验室培养 抗生素 感染
  • 简介:由于在输血医学中应用血清试剂和治疗性鼠免疫球蛋白(Ig)制品,使人体产生的抗体特异性具有"一般化"倾向,治疗效果易受人抗鼠抗体诱发的免疫应答的影响.为避免这种B淋巴细胞转化的干扰,近来采用噬菌体展示技术取代组织培养法克隆人单克隆抗体,获得较理想的结果.本文就其研究现状及在输血中的应用综述如下.

  • 标签: 输血医学 抗体特异性 噬菌体展示技术 治疗性 B淋巴细胞 诱发
  • 简介:1985年,噬菌体展示(Phagedisplay)由Smith最早提出,1994年McCaffery等最先构建了噬菌体多肽和抗体展示文库,开始了噬菌体展示技术广泛应用的新时代.10多年来,噬菌体展示技术被用于抗体的制备,多肽及蛋白质和酶的制备,随着噬菌体展示技术的进一步发展,优越性被广泛认识,使用范围不断扩展.根据其基本原理一系列不同的噬菌体文库的构建使本技术的应用得到不断扩展.

  • 标签: 噬菌体展示技术 肝炎病毒抗体 展示文库 蛋白质 优越性 多肽
  • 简介:摘要噬菌体在普通显微镜下看不到,在电子显微镜下有四种外形,即有尾(均有一立方对称的头及螺旋对称的尾)、立方体(无尾,衣壳为立方对称)、丝杆状(无头尾区别,呈螺旋对称),和多形性(有包膜无衣壳)。大多数噬菌体由头部和尾部组成。例如大肠杆菌T4噬菌体头部呈六边形,立体对称,大小约95×65nm,内含遗传物质核酸;尾部是管状器官,长95~125nm,直径13~20nm,是由一个内径约2.5nm中空的尾髓和外面包着的尾鞘组成。尾髓具有收缩功能,可使头部核酸注入宿主菌。在头和尾连接处的颈部还有一个颈圈结构,颈圈有六根须。尾部末端有尾板、尾刺和尾丝。尾板内可能有使宿主菌细胞壁裂解的溶菌酶。尾丝为噬菌体的吸附器官,能识别宿主菌表面的特殊受体。

  • 标签: 噬菌体 检验
  • 简介:如何对噬菌体进行同位素标记噬菌体是一类细菌病毒,属于严格的寄生生物,没有细胞结构,更没有细胞器,所以其新陈代谢和繁殖必须借助于寄主细胞相应的细胞器等结构才能正常进行,即噬菌体不能离开活细胞单独生存和繁殖,所以不可能在培养基上培养。

  • 标签: 噬菌体 细菌 细胞结构 例析 实验 新陈代谢
  • 简介:英国剑桥的科学家最近宣称,噬菌体病毒有可能替代抗生素。以前,由于人类大量使用抗生素治疗细菌感染,许多细菌通过相互交换遗传物质获得了耐抗生素药性基因。该研究所的皮卡德说:“使用噬菌体治疗比传统的抗生素会更好,因为噬菌体不会破坏正常的微生物平衡。噬菌体只是能感染细菌的病毒,目前还没有关于噬菌体感染植物、动物或人类细胞的报道。”

  • 标签: 噬菌体感染 抗生素治疗 病毒 细菌感染 微生物平衡 抗生素药
  • 简介:摘要:《噬菌体侵染细菌的实验》是人教版普通高中新课程标准实验教科书生物必修 2《遗传与变异》中第 3章第 1节的内容。本文从备课的反思、教学过程的反思、习题选择的反思等方面,浅谈《噬菌体侵染细菌的实验》的教学反思。

  • 标签: 备课的反思 教学过程的反思 习题选择的反思
  • 简介:摘要近年来,细菌耐药性问题愈发严重,给全球公共卫生事业与医疗保健带来了困扰,研发新型抗菌药物需要投入更多的时间与资金。噬菌体作为一类能够特异性感染细菌、真菌、放线菌等微生物的病毒,可依赖宿主菌大量复制,种类丰富,且研发成本低,在抗感染治疗方面的价值十分可观,是具有巨大潜力的新一代生物抗菌剂。现通过对噬菌体杀菌机制、噬菌体抗感染方面研究进展以及临床应用进行综述,以期为噬菌体抗感染治疗及临床应用提供参考。

  • 标签: 噬菌体 感染 临床应用
  • 简介:目的:研究从噬菌体展示中筛选内毒素结合蛋白质配基,为其在内毒素致病作用机理及在内毒素血症防治研究中的应用奠定基础。方法:以内毒素为靶分子从随机七肽噬菌体展示中筛选内毒素的高亲和力噬菌体配体,通过ELISA鉴定,DNA测序及相关软件分析。结果:所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405nm可达1.965通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为FHENWPS肽段中包含有与内毒素分子发生亲和结合的一个共有序列。该序列展示肽的等电点为5.36,具有双嗜性,这有利于肽与LPS分子表面的位点相互作用从而产生亲和吸附。结论:运用亲和筛选方法从肽中筛选内毒素结合蛋白质配基是可行的。

  • 标签: 噬菌体展示肽库 内毒素 多肽 配基 亲和
  • 简介:目的构建表达抗人红细胞血型A抗原50A杂交瘤细胞的单链抗体(SeFv)。方法应用重组噬菌体抗体技术,从50A杂交瘤细胞中分离、构建单链抗体基因,并将其克隆入噬粒pCANTAB5E中,转化E.coliXL-Blue,辅助噬菌体援救构建50A噬菌体单链抗体;采用完整红细胞亲和富集法淘选阳性重组噬菌体,鉴定重组噬菌体并进行序列测定分析;免疫印迹试验检测重组单链抗体的特异性抗原活动。结果用M13KO7援救XL—Blue转化菌中的pCANTABSE重组噬菌体,得到滴度为4×10^9pfu/ml噬菌体单链抗体;免疫印迹试验证实表达产物保留了亲本单抗对人红细胞血型A抗原的特异性亲和力。结论成功构建50AMcAb单链噬菌体抗体,为进一步研制高特异性、高亲和力的基因工程原核血型检定抗体试剂奠定了基础。

  • 标签: 人红细胞 血型 单链抗体 噬菌体表面呈现 免疫印迹试验 特异性
  • 简介:摘要噬菌体可以直接裂解细菌对抗脓毒症,同时还可以通过免疫调节效应影响患者自身对病原菌的反应,起到协同对抗感染的作用。在抗生素的耐药性逐渐升高的情况下,噬菌体受到了中外研究者的广泛关注。随着噬菌体研究的深入,以及相关临床试验的不断开展,我们相信将噬菌体应用于脓毒症的治疗指日可待。

  • 标签: 脓毒症 噬菌体 治疗
  • 简介:摘要噬菌体是细菌依赖性病毒,在耐药性细菌感染上,有着显著的优势,与传统抗生素相比,疗效更为显著,且不会产生耐药性,是目前代谢动力学的研究重点。本文主要针对噬菌体在细菌感染治疗中的应用进行分析。

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  • 简介:摘要近年来,噬菌体在食品科学领域中的应用受到国内外研究学者的广泛关注。噬菌体的自身特性表明,其可作为一种杀菌/抑菌的生物制剂来控制食源性病原菌对食品的污染,是保障食品安全的理想工具。对于相关领域科研工作者和同行业工作人员具有十分重要的参考意义。

  • 标签: 食品安全控制 噬菌体 作用
  • 简介:摘要噬菌体是一类可以感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称。噬菌体被应用于临床抗细菌感染治疗已有100多年的历史,但因抗菌药物的发现及广泛使用使其逐渐淡出了人们的视线,仅少部分国家与学者仍坚持临床应用至今。在抗菌药物耐药问题日益严重、临床应对策略匮乏的今天,噬菌体治疗重新回到了人们的视野中。噬菌体作为抗细菌感染治疗的优势为特异性强,仅针对目标宿主菌,对周围其他菌株无影响,当目标宿主菌被杀死后衰减并被清除。自然界中噬菌体资源丰富,而且它们与细菌共同进化,几乎在任何时候均可根据临床的需求分离到针对致病细菌的噬菌体。另外,由于抗菌机制不同于现有的抗菌药物,噬菌体治疗对于所谓的"超级细菌"同样有效,且可破坏生物被膜,降低"超级细菌"的耐药性,与抗生素联合应用有很好的协同作用。噬菌体治疗也有其局限性,如噬菌体的分离、纯化与保存有一定难度。本文主要讨论噬菌体临床治疗的历史与现状,并预测噬菌体的发展潜力。

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