简介：目的研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1在牙周组织中的作用奠定基础.方法酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN和OPNmRNA表达变化,Westernblot检测PLAP-1、RUNX2和OCN蛋白表达变化并进行统计分析.结果培养的人PDLC来源于间充质;人PDLC矿化诱导21d后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21d时ALP活性较对照组明显增高（P＜0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR和Westernblot结果显示,人PDLC在mRNA和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA表达量随人PDLC成骨分化过程发生变化,诱导14d上调,诱导21d下调,较对照组有明显差异（P＜0.05）,Westernblot检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论PLAP-1在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.

简介：目的研究低氧对人牙周膜细胞（PDLC）的碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨相关基因表达的影响.方法采用组织块法体外分离培养人PDLC;取第3～5代细胞分别在常氧和低氧条件下培养后检测其ALP活性;并通过荧光定量聚合酶链反应（PCR）观察低氧处理后人PDLC中成骨相关基因的表达变化.结果低氧12、24、36、48h组ALP活性均比常氧组高;其中低氧48h组与常氧组相比明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;低氧48h组ALPmRNA表达比常氧组高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;4个时间点低氧组骨钙蛋白（OCN）mRNA表达均比常氧组高,且差异有统计学意义（12、36h：P＜0.05;24、48h：P＜0.01）.结论低氧增强人PDLC的ALP活性,上调ALPmRNA和OCNmRNA的表达,促进人PDLC向成骨细胞分化,同时促进成骨细胞的矿化,提示低氧环境对人PDLC的骨向分化功能产生一定的影响.

简介：目的初步探讨低氧环境诱导人牙周膜成纤维细胞（PDLCs）凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外正常氧（20%O2）或低氧（1%O2）状态下培养PDLCs,光学显微镜观察比较低氧诱导前后PDLCs形态学变化;台盼蓝染色实验检测PDLCs细胞死亡率的差异;凋亡实验比较各组PDLCs凋亡水平的变化。Western免疫印迹检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、p53、Caspase-3、Bcl-2与Bcl-xL蛋白的表达水平。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着低氧处理时间延长,人PDLCs细胞数量减少,体积逐渐变小,细胞胞质浓缩。台盼蓝染色实验与凋亡实验均证实低氧处理48h后PDLCs死亡率（t=3.855,P=0.018）与凋亡率（t=6.621,P=0.003）显著增高。Western免疫印迹结果显示PDLCs中HIF-1α、p53、Caspase-3蛋白随着低氧刺激时间延长逐渐升高,Bcl-2与Bcl-xL蛋白逐渐降低。结论低氧能促进PDLCs形态变化、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。

简介：目的：比较人牙周膜干细胞（humanPeriodontalligamentstemcells,hPDLSCs）和牙髓干细胞（humanDentalpulpstemcells,hDPSCs）的表型及生长特性,为深入研究这两种细胞生物学特性提供依据。方法：组织块法培养获得原代人牙周膜细胞和牙髓细胞,采用有限稀释法分别对两者克隆化培养、分离纯化得到hPDLSCs和hDPSCs,采用倒置相差显微镜观察细胞形态、CCK8法检测细胞生长活性并绘制两者生长曲线、流式细胞技术检测干细胞表面标志物,分析比较两种细胞集落形成率（colonyformationratio,CFR）。结果：hPDLSCs和hDPSCs镜下形态相似,生长曲线均呈＂S＂形,牙周膜细胞中STRO-1表达hPDLSCs阳性率为15.88±0.48%,牙髓细胞中STRO-1表达hDPSCs阳性率为11.86±0.43%,两者无显著性差异。两种干细胞均阳性表达间充质干细胞（Mesenchymalstemcells,MSCs）表面标志物STRO-1、CD29、CD44、CD90、CD73和血管内皮标志物CD105,其中STRO-1、CD29、CD90、CD73、CD105及CD166百分率达90%以上,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45。hDPSCs的集落形成率（4.31±0.08%）显著高于hPDLSCs的集落形成率（2.68±0.06%）（P〈0.05）。结论：hPDLSCs和hDPSCs细胞的形态相似,均高表达MSCs表面特异性标志物,hDPSCs的集落形成率显著高于hPDLSCs,说明hDPSC自我更新能力较hPDLSCs强,可为深入研究这两种干细胞提供实验依据。

简介：目的：研究人牙周膜成纤维细胞对甲硝唑的摄取，探讨摄取的机制及为通过牙根管给药途径提供实验依据。方法：采用高效液相色谱法研究人牙周膜成纤维细胞与甲硝唑孵育后不同时间细胞内药物的浓度，细胞内药物浓度与细胞外药物浓度的关系，以及温度、pH和转运抑制剂丙磺舒和腺嘌呤对细胞摄取甲硝唑的影响。结果：（1）孵育3min后人牙周膜成纤维细胞胞内甲硝唑浓度即可达到细胞外水平，之后胞内甲硝唑浓度出现逐渐降低，并在15min后达到平稳；（2）细胞内甲硝唑浓度随着细胞外甲硝唑浓度的增加而呈线性增加；（3）温度、pH和转运抑制剂对人牙周膜成纤维细胞摄取甲硝唑无明显影响。结论：人牙周膜成纤维细胞可快速摄取甲硝唑；甲硝唑通过简单扩散方式进入细胞内。

简介：多潜能的成体干细胞可以从人牙周膜（PDLs）组织中分离和大规模扩增，为牙周再生的临床治疗提供可靠的种子细胞来源。目前，衰老对问充质干细胞（MSC）及其细胞性能的影响尚不明确。本项研究旨在探讨不同年龄组的阻生第三磨牙牙周膜干细胞（PDLSCs）的特点，并比较它们的多能性和再生能力。将来自90颗新鲜拔除的第三磨牙牙周膜组织，根据捐献者年龄分为四组。

简介：摘要目的探讨并分析淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响。方法体外进行人牙周膜细胞的培养，基于矿化诱导这一条件下，把第三代细胞和六个不同浓度淫羊藿苷进行互相作用，即浓度为零（对照组）、浓度为10mg/L、1mg/L、0.1mg/L、0.01mg/L、0.001mg/L，借助于BSP表达水平、噻唑蓝比色法以及ALP活性测定，就其对于人牙周膜细胞增殖与骨向分化的影响进行分析。结果作用24个小时后，不同药物浓度都可使人牙周膜细胞增殖；48小时后，淫羊藿苷在1-0.001mg/L区间，对于人牙周膜细胞增殖能力的强化较为显著，在10mg/L时影响较小；72个小时后，淫羊藿苷浓度在0.1-0.001mg/L区间时，增殖能力较为显著；作用72个小时后，浓度在1-0.001mg/L区间的组数推动人牙周膜细胞骨向分化，相对于对照组而言，所存差异具有统计学意义，即P＜0.05，而10mg/L组和对照组之间所存差异不具统计学意义，即P＞0.05。结论基于一定的浓度范围内，利用淫羊藿苷不仅可以推动人牙周膜细胞的增殖，同时还可进一步推动其骨向分化。

简介：目的探讨复方珊瑚糊剂对体外培养牙周膜细胞的毒性作用。方法运用MTT分析法分析珊瑚糊剂的细胞毒性。结果复方珊瑚糊剂的浸出液及稀释液对牙周膜细胞的生长影响与对照组无明显差异。结论复方珊瑚糊剂在体外是一种生物相容性较好的生物材料，对于牙周膜细胞的生长再生没有明显的抑制作用，可考虑作为根管充填材料。

简介：目的：探讨人非ATP酶依赖性调节颗粒13（hRpn13）通过泛素-蛋白酶体通路（UPP）途径对人牙周膜细胞（PDLC）的作用，从而揭示其对PDLC增殖、分化和功能的调节作用。方法通过转染敲除来改变PDLC中hRpn13的表达后，用MTT法观测细胞形态，4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）来检测细胞增殖情况，通过检测碱性磷酸酶（ALP）和Ⅰ型胶原纤维的分泌情况来检测细胞成骨分化情况，最后通过检测NF鄄κB受体活化子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、泛素化蛋白的改变来研究hRpn13对PDLC功能的调节作用及其可能机制。结果hRpn13对成纤维细胞的增殖和ALP的活性，Ⅰ型胶原蛋白以及RANKL、OPG的表达起到了负性调节作用，同时hRpn13使泛素化蛋白聚集减少。结论hRpn13可以通过影响UPP通路来调节成纤维细胞的增殖、分化和功能。

简介：目的：研究α—MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对人牙周膜细胞（humanperiodontalligamentcells，hPDLcs）生物学行为的影响，为体外培养人牙周膜细胞寻找合适的培养基。方法：采用改良组织块培养法，分别用α-MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对hPDLcs进行体外培养，比较三组细胞在游出成功率、增殖及矿化等方面的差异。结果：α-MEM促进hPDLcs增殖作用最强。α—MEM组培养的细胞表达的碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）含量最高，与其它两组间有显著差异。DMEM—LG组矿化结节形成个数最多且体积大。结论：α-MEM促进hPDLcs增殖，DMEM—LG促进hPDLcs分化。应根据实验要求选择合适培养基。

简介：目的：探讨周期性张应力对体外培养的人牙周膜细胞生物活性的影响。方法：对体外培养的人牙周膜细胞施加不同大小的周期性牵张力（6％、12％、20％细胞表面拉伸率），24h后检测其对细胞的总蛋白合成、ALP活性、Col-Ⅰ和OCN分泌的影响。实验结果用SPSS13．0进行统计分析。结果：较小的牵张力对人牙周膜细胞生物活性无显著影响，随力值的增大，牵张力能够呈强度依赖性抑制人牙周膜细胞的活性，减少总蛋白合成及ALP活性，抑制C0l-Ⅰ及OCN的分泌。结论：周期性张应力可以抑制人牙周膜细胞的生物学活性，并呈强度依赖性。

简介：目的：探讨miR-223对人牙周膜成纤维细胞中核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）的调控作用。方法：构建过表达miR-223的人牙周膜成纤维细胞,Westernblot及实时定量RT-PCR检测人牙周膜成纤维细胞内RANKL和骨保护素（OPG）的表达,计算RANKL/OPG比值的改变。结果：过表达miR-223的人牙周膜成纤维细胞,RANKL的表达明显下调,RANKL/OPG比值下降。结论：miR-223可调控RANKL的表达,破坏RANKL/OPG比例的平衡,改变破骨细胞的微环境,影响破骨细胞分化。

简介：摘要目的研究白细胞介素1β（IL-1β）作用下人牙周膜干细胞（PDLSC）和骨髓间充质干细胞（BMSC）骨向分化的差异。方法应用茜素红染色、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、细胞增殖能力（MTT）法和实时荧光聚合酶链反应（PCR）对PDLSC和BMSC在IL-1β作用下的骨向分化能力进行检测，并比较两者之间的差异。实验组为含有IL-1β的各处理组，对照组内未加IL-1β。采用单因素方差分析和t检验对数据进行统计分析。结果随IL-1β浓度的增高，PDLSC形成矿化结节减少，茜素红染色逐渐变浅；而BMSC骨向分化能力未见明显减弱；ALP活性实验结果表明，在7 d时PDLSC各实验组与对照组相比差异具有统计学意义（F = 2361.11，P<0.001），BMSC各实验组与对照组相比ALP活性差异具有统计学意义（F = 240.68，P<0.001）；在14 d时PDLSC随炎症因子浓度增高，ALP活性显著降低，差异具有统计学意义（F = 1519.89，P<0.001），BMSC在IL-1β浓度为0.001、0.01、1 ng/mL的实验组与对照组相比ALP活性差异具有统计学意义（F = 22.52，P<0.001），两种干细胞在IL-1β最大浓度时（1 ng/mL）ALP活性最低；MTT结果表明，IL-1β能抑制干细胞的增殖能力，与PDLSC相比，BMSC增殖能力较低。实时荧光PCR结果显示，与对照组相比，两种干细胞实验组内ALP、Col-1、OCN和Runx2 mRNA表达水平均降低，BMSC内实验组中骨向分化基因表达与PDLSC内实验组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论在IL-1β作用下，BMSC的成骨能力较PDLSC高。

简介：目的：初步探讨低氧环境对人牙周膜成纤维细胞（periodontalligamentcells,PDLCs）增殖与凋亡的影响,以及低氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α）在该过程中的作用。方法：体外常氧条件和低氧（1%O2）条件下培养PDLCs,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测低氧诱导前后PDLCs生长速度的差异;流式细胞术比较PDLCs凋亡水平的变化。Western免疫印迹和实时定量PCR检测HIF-1α的表达水平。通过小干扰RNA（HIF1α-Si）转染PDLCs,检测低氧诱导下HIF-1α水平、细胞活性以及细胞凋亡水平的变化。结果：人PDLCs在低氧环境中培养48h后细胞活性显著抑制,凋亡水平增高,HIF-1α在蛋白和mRNA水平均显著升高。小干扰RNA（siRNA）转染PDLCs并于低氧下培养后HIF-1α表达明显降低,同时细胞活性增加、细胞凋亡显著下降。结论：低氧能通过上调HIF-1α表达抑制PDLCs增殖并促进其凋亡。

简介：摘要目的探讨低强度脉冲超声对高糖诱导人牙周膜干细胞（hPDLSCs）损伤的保护作用及机制。方法体外复苏培养hPDLSCs，分为正常对照组、高糖模型组及低强度脉冲超声30、60、90 mW/cm2组。高糖模型组和低强度脉冲超声组细胞采用高糖培养基（葡萄糖浓度为40 mmol/L）处理48 h，建立高糖模型；正常对照组细胞采用正常培养基（葡萄糖浓度为11 mmol/L）处理。低强度脉冲超声组细胞造模后每天分别给予30、60、90 mW/cm2低频脉冲处理20 min，连续处理7 d。7 d后采用噻唑蓝法测定各组细胞的体外增殖活性，流式细胞术检测各组细胞凋亡及细胞周期分布，荧光比色法检测各组细胞中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-6和Caspase-9活性，反转录PCR和蛋白质印迹法分别检测各组细胞中Wnt1、Wnt10b及β-连环蛋白（β-catenin）的mRNA和蛋白表达水平。结果与正常对照组比较，高糖模型组hPDLSCs的增殖活性明显降低（P<0.05），细胞凋亡率升高（P<0.05），细胞周期变化不明显（均P>0.05），Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性均明显升高（均P<0.05），Wnt1、Wnt10b及β-catenin的mRNA和蛋白表达均明显降低（均P<0.05）。与高糖模型组比较，低强度脉冲超声组细胞增殖活性升高（均P<0.05），细胞凋亡率降低（均P<0.05），细胞周期变化不明显（均P>0.05），Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性均降低（均P<0.05），Wnt1、Wnt10b及β-catenin的mRNA和蛋白表达均上调（均P<0.05），且超声强度为90 mW/cm2时上述指标变化最为明显（均P<0.05）。结论低强度脉冲超声可明显改善高糖诱导的hPDLSCs损伤，其可能是通过降低Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9活性和上调Wnt1、Wnt10b及β-catenin的表达来实现的。

简介：许多成人的机体组织中拥有大量干细胞,这些细胞能够再生出类似其生长的微环境,从而使复杂病变组织的再生成为可能.成体干细胞（SCs）包括骨髓干细胞（BMSCs）、牙髓干细胞（DPSCs）以及牙周膜干细胞（PDLSCs）,这些细胞具有高度的增殖潜能,表达干细胞相关的特异性标记物及体外培养多向分化的特征.

简介：摘要目的分析研究牙周膜干细胞在正畸牙移动中的作用，探究mTOR信号通路的表达意义。方法选择幼年大鼠共30只，分为两组，对照组不进行处理，实验组15只建立正畸牙移动模型，在右侧颌第一磨牙给予7d正畸力，观察破骨细胞变化；选取成人15只第一前磨牙，培养牙周膜干细胞并给予加压12h，观察加压后牙周膜干细胞mTOR信号通路表达。结果实验组大鼠在给予加压后，移动牙的压力侧牙周膜间隙变窄，牙槽骨破坏严重。可见破骨细胞数量较多。加压后牙周膜干细胞mTOR信号通路蛋白表达低于加压前，P＜0.05，差异有统计学意义。结论牙周膜干细胞与正畸牙移动存在明显的关系，其可能与mTOR信号通路表达有关。

简介：目的：观察不同浓度的内毒素（lipopolysaccharides,LPS）对牙周膜成纤维细胞增殖的影响及IL-8的分泌情况。方法：本实验共分为七组,牙周膜成纤维细胞（humanperiodontalligamentfibroblasts,hPDLFs）组、PDLFs＋10μg/ml碱性成纤维细胞生长因子（BasicFibroblastGrowthFactor,BFGF）组、1μg/mlLPS组、10μg/mlLPS组、100μg/mlLPS组、200μg/mlLPS组、500μg/mlLPS组。各组细胞进行培养,MTT法观察细胞增殖变化。取培养24h,96h的细胞上清液进行IL-8ELISA检测。结果：与空白组牙周膜成纤维细胞相比,24h：1μg/mlLPS、10μg/mlLPS、100μg/mlLPS组无统计学差异。200μg/mlLPS、500μg/mlLPS组促进IL-8分泌,有显著性统计学差异。96h：与牙周膜成纤维细胞相比,1μg/mlLPS、10μg/mlLPS组无统计学差异。100μg/mlLPS、200μg/mlLPS组促进IL-8分泌,100μg/mlLPS、200μg/mlLPS组之间无统计学差异。500μg/mlLPS组抑制IL-8分泌,有显著性统计学差异。细胞增殖变化：BFGF促进牙周膜成纤维细胞增殖。1μg/mlLPS、100μg/mlLPS组与正常牙周膜成纤维生长增殖无差异。10μg/mlLPS可以促进牙周膜成纤维细胞增殖。200μg/mlLPS、500μg/mlLPS明显抑制PDLFs增殖。结论：不同浓度的内毒素对牙周膜成纤维细胞增殖、IL-8分泌合成释放有调节作用。

简介：目的：探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,Pg）脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激人牙周膜成纤维细胞（humanperiodontalligamentcells,hPDLCs）后Notch信号通路的表达及其对RANKL/OPG表达的影响。方法：酶消化法结合组织块法原代培养hPDLCs,取第三代至第五代细胞给予0.1、1、10μg/mlPg-LPS刺激72h,Real-timePCR检测RANKL/OPGmRNA的表达,并选择最佳诱导浓度1μg/ml组,采用Real-timePCR检测Notch通路Notch1-2、Notch4、Jagged-1、Jagged-2、DLL-1以及Hey-1表达受体配体及目的基因表达。随后,以γ-分泌酶抑制剂DAPT预处理hPDLCs1h,予1μg/mlPg-LPS刺激72h后,Real-timePCR、Western-Bloting检测Notch通路目的基因Hey-1及RANKL/OPGmRNA、蛋白水平的表达。结果：1μg/mlPg-LPS可显著上调hPDLCsRANKL、Notch通路受体Notch4、配体DLL-1、Jagged-1及目的基因Hey-1的表达（P〈0.05）;而对OPG、Nocth1-2、Jagged-2mRNA水平表达无明显影响（P〉0.05）。此外,γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制Pg-LPS诱导RANKL及Hey-1mRNA及蛋白的表达上调,而仅对OPGmRNA表达有影响（P〈0.05）。结论：Notch信号通路参与调控Pg-LPS诱导的hPDLCsRANKL/OPG表达。

简介：摘要目的探讨粪肠球菌培养上清液诱导人牙周膜细胞（human periodontal ligament cell，hPDLC）的炎症反应及其在压力状态下的表达变化。方法噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测不同体积分数［0%（对照组）、1%、2%、5%、10%和20%］的粪肠球菌上清液对hPDLC增殖活性的影响，采用流式细胞术检测粪肠球菌上清液刺激24 h后hPDLC表面Toll样受体2（Toll-like receptor 2，TLR-2）表达的改变；依据MTT及流式细胞术结果，将hPDLC分为不含粪肠球菌上清液的非诱导组与含5%粪肠球菌上清液的诱导组，每组均分别加载0、49及196 Pa的静压力，非诱导组和诱导组均以未加力（0 Pa）状态为对照。24 h 后观察hPDLC的形态变化，通过反转录PCR（reverse transcription-PCR，RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测hPDLC肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的mRNA和蛋白表达水平。结果MTT法结果显示，培养48 h时，与对照组相比体积分数≥5%的粪肠球菌上清液能显著降低hPDLC的增殖活性（P<0.05）。流式细胞术结果显示，粪肠球菌上清液刺激hPDLC 24 h后其表面TLR-2阳性细胞率随上清液体积分数的增加而增加，0%、1%、2%、5%、10%和20%体积分数的上清液TLR-2阳性细胞率分别为（2.12±0.07）%、（2.41±0.32）%、（2.65±0.27）%、（4.76±0.46）%、（9.91±0.92）%、（12.01±1.35）%，体积分数≥5%时与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR结果显示，非诱导组施加49 Pa压力时，hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达与对照组相比差异均无统计学意义（P>0.05），施加196 Pa压力时，hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）；而诱导组施加49和196 Pa压力时，hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达均显著升高，与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。ELISA结果与PCR结果趋势一致。结论高浓度的粪肠球菌上清液能抑制hPDLC的增殖活性；粪肠球菌上清液可以促进hPDLC表面TLR-2的表达；过度的机械压力可引起hPDLC细胞的炎症反应，导致hPDLC对压力不耐受，引起炎症反应加重。