简介：摘要：骨组织工程研究的深入发展下，脂肪干细胞等多类型种子细胞出现在医学视野中。脂肪干细胞作为脂肪组织中的细胞，具有诸多优势，是骨组织工程研究的核心内容之一。为发挥脂肪干细胞优势及促进骨组织工程发展，本研究对脂肪干细胞成骨分化进行综述。

简介：骨髓间充质干细胞是多能干细胞，通过诱导可分化成为骨、软骨、脂肪、肌腱等，其中影响其向成骨与成脂肪分化的因素很多。机体老化会使整体内环境发生巨大改变，也使骨髓内微环境与复杂的细胞内、外信号调控发生改变。控制相关的影响因素有助于诱导成骨分化而抑制成脂肪分化，进而提高骨质疏松、骨缺损和骨量丢失等相关疾病的治疗。

简介：目的研究从人脂肪组织中提取的血管周干细胞（humanperivascularstemcells,hPSCs）的特点,并探讨其成骨、成脂及成软骨分化的能力。方法采用流式荧光细胞分选技术（FACS）在12例行吸脂手术患者的脂肪标本中分选出人基质血管成分（humanstromalvascularfraction,hSVF）和由周皮细胞（CD34^-、CD146^＋、CD45^-）与外膜细胞（CD34^＋、CD146^-、CD45^-）组成的hPSCs进行培养,比较其克隆增殖能力,然后将2种细胞进行成骨、成脂和成软骨诱导,诱导结束后分别进行茜素红染色、油红O染色和阿尔新蓝染色,并检测成骨诱导后的成骨相关基因mRNA表达。结果hSVF和hPSCs均以纺锤形成纤维样细胞生长,hPSCs呈现出更快的融合趋势,且细胞形态更均一。hPSCs细胞相比于hSVF具有更强的克隆增殖能力（P〈0.05）。hPSCs细胞在成骨及成软骨方向比hSVF具有更强优势,而hSVF在成脂方向比hPSCs具有更强优势。成骨诱导后,hPSCs的成骨基因碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）和骨钙素（osteocalcin,OCN）的相对表达量要明显高于hSVF（P〈0.05）。结论hPSCs细胞具有干细胞的多项分化潜能,且其在成骨方向具有很强优势,可成为骨组织工程学中理想的种子细胞来源。

简介：摘要目的观察成骨分化后的去分化骨髓间质干细胞（differentiation osteogenic bone marrow mesenchymal stem cells，De-BMSCs）移植对前十字韧带（anterior cruciate ligament，ACL）重建术后腱骨界面骨形成的促进作用，并探索De-BMSCs成骨分化效应增强的分子机制。方法从家兔胫骨和股骨中提取BMSCs，经成骨诱导分化后用普通培养基进行去分化培养制备De-BMSCs，鉴定De-BMSCs的干细胞特性。建立家兔ACL重建模型，分为3组：腱骨界面注射海藻酸钠凝胶（对照组）；腱骨界面注射复合BMSCs海藻酸钠凝胶（BMSCs组）；腱骨界面注射复合De-BMSCs海藻酸钠凝胶（De-BMSCs组）。术后4周和12周取膝关节标本，进行组织学、影像学、生物力学检测，评估腱骨界面骨形成情况。De-BMSCs体外成骨诱导分化，给予活化T细胞核转录因子1（nuclear factor of activated T cells 1，NFATc1）RNA干扰处理，检测成骨分化标志基因及Nanog/NFATc1/Osterix信号通路的表达，明确De-BMSCs成骨分化效应增强的分子机制。结果De-BMSCs可向成骨、成脂、成软骨分化，具有干细胞特性（均P<0.05）。术后4周De-BMSCs组BV/TV值为0.36±0.01，较对照组0.24±0.03和BMSCs组0.30±0.02明显增加（P<0.05），最大负荷（40.34±1.19）N和刚度（20.67±2.14）N/mm较对照组[（14.88±2.74）N，（8.67±2.19）N/mm]和BMSCs组[（26.31±1.76）N，（13.81±2.14）N/mm]明显升高（均P<0.05）；术后12周De-BMSCs组BV/TV值0.47±0.02较对照组0.30 ± 0.02和BMSCs组0.35 ± 0.03明显增加（均P<0.05），最大负荷（64.46±6.69）N和刚度（25.18±3.11）N/mm较对照组[（41.01±6.12）N，（11.59±2.54）N/mm]和BMSCs组[（48.21±4.12）N，（15.89±2.94）N/mm]明显升高（均P<0.05）；De-BMSCs成骨分化过程中，Nanog的表达增加（P<0.05），NFATc1的表达上升且其与Osterix的相互作用增强（P<0.05），成骨分化标志基因COL1A、OCN、OPN的表达增加（均P<0.05）。结论De-BMSCs移植可促进ACL重建后的腱骨界面骨形成，其作用机制可能是Nanog/NFATc1/Osterix信号通路介导了De-BMSCs成骨分化效应增强。

简介：的:探讨高血糖大鼠牙髓干细胞(DPSCs)增殖及成牙/成骨分化能力。方法:选取3个月龄糖尿病模型动物GK大鼠及正常对照Wistar大鼠,测定尾静脉血糖值,待血糖稳定1周后,通过酶消化法分离培养两组大鼠DPSCs,通过MTT法测定两组大鼠DPSCs生长曲线,实时定量RT-PCR及Westernblot检测两组大鼠DPSCs牙本质基质蛋白1(DMP1)、Osterix(Osx)、骨钙素(OCN)等成牙/成骨向分化指标的表达。结果:GK大鼠餐后2小时尾静脉血糖值稳定在20.1~22.3mmol/L,Wistar大鼠为5.8~6.3mmol/L。MTT结果显示,GK大鼠DPSCs增殖能力从培养第3天到第7天均较Wistar大鼠DPSCs低(P<0.05)。实时定量RT-PCR及Westernblot检测结果显示GK大鼠DPSCs成牙/成骨向分化指标的表达明显较正常对照Wistar大鼠低。结论:高血糖大鼠DPSCs增殖能力及成牙/成骨向分化能力均较正常大鼠低。

简介：背景：以往在体外采用地塞米松、生长因子或用成骨样细胞与骨髓间充质干细胞按1∶1混合培养诱导成骨均存在种种局限。目的：观察在Transwell小室环境下成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养及成骨样细胞定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的可行性。方法：取第3代乳兔成骨样细胞与第3代兔骨髓基质干细胞接种共培养于Transwell小室内，成骨样细胞接种于培养板底层，骨髓基质干细胞接种于Transwell膜内膜上作为实验组。以骨髓基质干细胞单独接种于Transwell小室内，下层为基础培养液作为对照组。结果与结论：实验组共培养骨髓基质干细胞明显向成骨细胞分化，细胞碱性磷酸酶活性显著高于对照组（P〈0.05）。实验组骨髓基质干细胞茜素红染色强阳性，可见呈红色结节，经PT-PCR扩增后，可见成骨启动基因核心结合因子α1的表达；对照组未见矿化结节。说明应用Transwell小室可实现成骨样细胞与骨髓基质干细胞体外共培养，并能定向诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化。

简介：目的：探讨中药黄芩苷对牙髓干细胞的增殖、成牙/成骨分化能力的影响。方法：酶消化法原代培养人牙髓干细胞,采用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测黄芩苷对人牙髓干细胞增殖的影响,碱性磷酸酶活性检测及Westernblot等方法检测黄芩苷作用于人牙髓干细胞后,其成牙/成骨分化指标,包括核心结合因子（runt-relatedtranscriptionfactor2,RUNX2）、牙本质涎蛋白（dentinsialoprotein,DSP）、Osterix（OSX）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、骨钙素（osteocalcin,OCN）的变化。结果：MTT检测结果显示,0~20μmol/L黄芩苷作用于牙髓干细胞后其增殖能力与对照组相比无明显差异（P〉0.05）;而碱性磷酸酶活性检测显示：0~20μmol/L黄芩苷各浓度组细胞ALP活性比对照组明显增加（P〈0.01）;Westernblot结果表明：与对照组相比,20μmol/L黄芩苷可增强牙髓干细胞RUNX2、DSP、OSX、OPN、OCN等成牙/成骨相关蛋白的表达。结论：黄芩苷对牙髓干细胞的增殖无明显影响,但可促进其成牙/成骨分化能力。

简介：目的：体外观察不同葡萄糖浓度对大鼠颌骨骨髓基质细胞（BMSCs）向成骨细胞分化能力的影响。方法：无菌条件下从4周龄SD大鼠下颌骨获取BMSCs,采用全骨髓贴壁培养法对细胞进行纯化及培养,流式细胞仪检测干细胞表型及进行成骨分化检测,随后选取第4代细胞在不同糖浓度（5.5,16.5,25,35mM）干预下向成骨细胞定向诱导分化,其后对各组进行茜素红染色,碱性磷酸酶染色和活性测定,培养基钙、磷含量测定,并采用Westernblot测定骨形成蛋白2（BMP-2）水平以及real-timePCR测定Runx2基因表达变化。组间比较采用单因素方差分析法（SPSS11.0）。结果：随着葡萄糖浓度的升高,茜素红染色钙结节形成逐渐减少,碱性磷酸酶（ALP）活性下降,细胞钙、磷分泌显著降低,差异有统计学意（P〈0.05）;BMP-2水平以及Runx2mRNA表达也明显降低（P〈0.05）。结论：在高糖条件下,大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨分化能力减弱,而BMP信号通路可能参与其中。

简介：摘要目的探讨磁场在大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化中的作用。方法在恒定磁场和无恒定磁场的条件下，分别在培养皿对大鼠骨髓基质干细胞进行成骨诱导，在实验的1、3、5、7天进行细胞增值，碱性磷酸酶，VonKossa染色检测。比较恒定磁场对大鼠骨髓基质干细胞成骨作用的影响。结果3天时，MTT显示细胞增值有差异。在5、7天时，所有检测均有差异。在第7天时，碱性磷酸酶染色结果显示磁场组的阳性率要高于非磁场组。结论恒定磁场增强骨髓基质干细的成骨细胞分化，改变细胞形态。

简介：摘要目的探究氟暴露与低营养对大鼠成骨、破骨分化的联合作用及作用方式。方法将SD大鼠按2 × 2析因实验设计采用随机数字表法分为单独正常营养处理组、单独低营养处理组、单独氟暴露组、氟与低营养联合作用组，每组8只，雌雄各半。实验5个月后，免疫组织化学法检测股骨碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录因子2（Runx2）、骨保护素（OPG）、核因子κB受体激活因子配体（RANKL）表达水平；2 × 2析因设计方差分析判断氟暴露与低营养因素对成骨、破骨分化的交互作用。结果骨组织免疫组织化学法检测结果显示，组间成骨分化标志物ALP和Runx2表达水平比较，差异均有统计学意义（F = 25.98、17.77，P均< 0.001）。与单独正常营养处理组（0.005 2 ± 0.002 7、0.003 1 ± 0.001 4）相比，单独氟暴露组ALP和Runx2表达水平均较高（0.019 5 ± 0.005 0、0.014 4 ± 0.004 4，P均< 0.05）；单独低营养处理组（0.002 6 ± 0.001 8、0.004 4 ± 0.003 2）和氟与低营养联合作用组（0.003 6 ± 0.000 7、0.002 9 ± 0.000 8）比较，差异均无统计学意义（P均> 0.05）；而氟与低营养联合作用组均低于单独氟暴露组（P均< 0.05）。组间破骨分化标志物RANKL表达水平和RANKL/OPG比值比较，差异均有统计学意义（F = 10.50、31.05，P均< 0.001）。其中，与单独正常营养处理组相比，单独氟暴露组RANKL/OPG比值较低（0.115 3 ± 0.039 5比1.426 3 ± 0.777 2），氟与低营养联合作用组RANKL表达水平和RANKL/OPG比值均较高（0.019 5 ± 0.007 7比0.004 4 ± 0.002 5、7.258 7 ± 3.674 3比1.426 3 ± 0.777 2），差异均有统计学意义（P均< 0.05），而单独低营养处理组RANKL表达水平和RANKL/OPG比值（0.004 0 ± 0.001 9、2.022 3 ± 0.753 7）差异均无统计学意义（P均> 0.05）；氟与低营养联合作用组RANKL表达水平及RANKL/OPG比值均高于单独低营养处理组和单独氟暴露组（P均< 0.05）。2 × 2析因设计方差分析结果显示，氟暴露与低营养因素对ALP、Runx2、RANKL表达水平和RANKL/OPG比值均有交互作用（F = 4.38、19.39、22.12、108.00，P均< 0.05），且对ALP、Runx2表达水平为拮抗作用，对RANKL表达水平和RANKL/OPG比值为协同作用。结论在大鼠骨组织中，单独氟暴露促进成骨分化，抑制以成骨功能活跃为主的破骨分化，氟与低营养联合对成骨、破骨分化的交互作用表现为拮抗成骨分化和协同促进破骨分化；正常营养条件是成骨分化的物质基础，低营养是破骨分化增强的诱因。

简介：目的:研究miR-34a对人颌骨骨髓间充质干细胞(hOBMSCs)成骨分化的影响。方法:实时定量RT-PCR检测miR-34家族在hOBMSCs成骨诱导过程中的表达情况;采用碱性磷酸酶及茜素红染色检测miR-34a对于hOBMSCs成骨分化能力的影响;Westernblot检测hOBMSCs成骨分化过程中miR-34a对于成骨相关蛋白的影响,同时检测hOBMSCs在正常培养条件下miR-34a对于DKK1蛋白表达的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-34a与DKK1的靶向关系;通过裸鼠皮下成骨实验检测miR-34a对于hOBMSCs体内成骨的影响。结果:在hOBMSCs成骨诱导过程中,miR-34家族的miRNA表达量均显著上升(P<0.05),其中miR-34a最为明显;过表达miR-34a可显著提高hBMSCs的体外成骨能力;miR-34a可以负向调节DKK1,同时双荧光素酶报告基因实验证实DKK1为miR-34a的靶基因;体内实验同样证实miR-34a可以促进hOBMSCs的成骨分化。结论:miR-34a可能通过抑制DKK1的表达,促进hOBMSCs的成骨分化。

简介：摘要目的研究不同正畸力值对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells, PDLSCs)分化的作用及机制。方法分别用50 g、150 g力值建立大鼠牙齿移动模型，加力7 d后分离培养PDLSCs，检测其生物学功能和分子信号通路。结果相比对照组，加力7 d后，50 g力值组大鼠第一磨牙近中移动，150 g力值组移动距离大于50 g力值组。分离培养不同组PDLSCs，50 g力值组PDLSCs成骨和成脂分化能力均高于对照组；150 g力值组PDLSCs成骨分化能力小于对照组，而成脂分化能力大于对照组。机制研究显示50 g力值组PDLSCs的active-β-catenin表达水平高于对照组，而150 g力值组PDLSCs的active-β-catenin表达水平低于对照组。结论不同正畸力值对PDLSCs作用不同，50 g力值促进PDLSCs成骨和成脂分化，而150 g力值抑制其成骨分化。

简介：

简介：目的分析毛囊区神经嵴干细胞（neuralcreststemcells,NCSCs）体外成骨分化能力及相关分子调控机制,探讨其用于骨再生修复的可行性。方法与成骨前体细胞MC3T3-E1比较分析,在DMEM/F12培养基中加入成骨诱导液,进行成骨分化诱导,通过免疫细胞化学、碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）及茜素红染色,观察NCSCs成骨分化能力;在成骨诱导1、2、4、7周不同时段,RT-PCR方法分别检测Runx2、Osterix、转录活化因子4（activatingtranscriptionfactor4,Atf4）、骨桥素（os-teopontin,OPN）、骨钙素（osteocalcin,OCN）等相关成骨分化调控基因的表达特点。结果免疫细胞化学检测显示,成骨特异性标记物Runx2、OPN、OCN均为阳性,但成骨分化能力低于MC3T3-E1细胞。RT-PCR结果发现,不同诱导时段,OPN、OCN及Atf4mRNA均表达,但Runx2早期高表达,晚期低表达,Osterix早、晚期表达,中期未见表达;而MC3T3-E1细胞在各期未见明显差异。NCSCs成骨诱导7周后,ALP和钙结节茜素红染色呈阳性。结论NCSCs具有成骨分化的能力,初步探讨其分化机制,为体内实验进行颌骨或颅骨缺损的修复奠定基础。

简介：的:探究Notch信号通路抑制剂DAPT在体外对人牙周膜间充质干细胞(hPDLSCs)增殖及成骨分化能力的影响。方法:体外培养扩增hPDLSCs,流式细胞术检测间充质干细胞特异性标记物CD73、CD90和造血干细胞特异性标记物CD34、CD45的表达。选取第二代生长良好的hPDLSCs,随机分为3组:空白组使用人间充质干细胞培养基,对照组使用人间充质干细胞成骨诱导培养基,实验组使用含1μmol/LDAPT的人间充质干细胞成骨诱导培养基进行体外培养。CCK8检测hPDLSCs增殖能力,绘制增殖曲线;实时定量RT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)等成骨相关基因及Notch信号通路下游基因(Hes-1、Hey-1)和Notch信号通路配体JAG1的表达;茜素红染色显示矿化结节形成情况。结果:原代培养hPDLSCs表面标记物表达CD73(94.49%)、CD90(98.74%)、CD34(2.07%)、CD45(0.62%);实验组在各检测点的细胞增殖能力与对照组之间无明显差别,两组结果无统计学差异(P>0.05);实验组成骨分化相关基因的表达水平升高(P<0.05),Notch信号通路下游基因表达降低,配体表达升高(P<0.05),细胞染色见实验组矿化结节增多增大。结论:DAPT可提高hPDLSCs体外成骨分化能力,但对增殖无明显影响。

简介：摘要目的研究冬凌甲草素对成骨细胞分化和破骨细胞形成的作用及分子机制。方法从SD大鼠股骨和胫骨中分离出骨髓间充质干细胞和骨髓单核细胞，培养于含10%胎牛血清的α-MEM培养基，细胞80%~90%汇合后采用不同浓度的冬凌甲草素（0、1、2、3、4 μM）进行分组干预，CCK-8法及活死染色检测不同浓度的冬凌甲草素对间充质干细胞及骨髓单核细胞活力的影响；通过碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红染色、ALP活性的测定以及TRAP染色检测冬凌甲草素对成骨和破骨分化的影响；qRT-PCR检测wnt1、β-catenin、Runx2、ALP、collage-1(col-1)、骨钙蛋白(OCN)、TRAP、c-Fos、NFATc1和CTSK的表达；Western-blot及免疫荧光检测wnt1、β-catenin、ALP、col-1、OCN、Runx2、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）、GSK-3β、p-GSK-3β的表达。结果（1）与对照组比较，冬凌甲草素（2 μM）具有促进间充质干细胞向成骨细胞分化和提高ALP活性的作用；（2）冬凌甲草素可以促进wnt1、β-catenin、Runx2的表达，在加入Wnt/β-catenin/TCF通路选择性拮抗剂ICG-001后，成骨相关标志物表达下降。（3）冬凌甲草素可以促进OPG而抑制RANKL的表达。（4）冬凌甲草素可以直接或间接抑制破骨相关基因TRAP，NFATc1和c-Fos的表达。结论冬凌甲草素可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干向成骨细胞分化，同时，它还可能抑制RANKL介导的破骨细胞的形成。

简介：目的：研究小鼠诱导性多能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPSCs）向成骨细胞分化的能力,并观察Osterix对iPSCs成骨分化能力的影响。方法：利用体外细胞培养和病毒转染的方法,结合定量RT-PCR以及组织化学的方法检测在成骨诱导的条件下,iPSCs中成骨相关基因、蛋白的表达变化。结果：小鼠iPSCs经悬滴培养可以形成拟胚体,在成骨诱导条件下可以向成骨细胞分化。病毒转染并不影响iPSCs的多向分化潜能;与对照组相比,转染Osterix的iPSCs形成的矿化结节、碱性磷酸酶活性、成骨相关基因的表达均有明显增加（P〈0.05）。结论：在成骨诱导液培养条件下,小鼠iPSCs可以作为种子细胞向成骨细胞分化,并且过表达转录因子Osterix可以进一步促进iPSCs的成骨分化。

简介：目的观察糖尿病兔骨髓间充质干细胞（bonearrow-derivedmesenchymalstemcells,BMSCs）以成骨分化为主的生物学特性。方法通过静脉注射水合四氧嘧啶,建立糖尿病模型,以注射等量生理盐水作为对照组。在无菌条件下,局麻后抽取兔髂骨骨髓,获取BMSCs。采用全骨髓贴壁培养法对细胞进行纯化及培养,分别对2组细胞行MTT检测、实时定量PCR检测、碱性磷酸酶（ALP）活性检测,以及ERK、AKT信号通路表达检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行单因素方差分析（ANOVA）和SNKposthoc分析。结果与正常组比较,实验组糖尿病兔BMSCs细胞增殖活性、成骨基因表达、ALP活性及成血管基因表达均显著下降（P〈0.05）。结论糖尿病兔BMSCs的增殖活性、成骨分化能力及成血管基因表达能力均受到损害。

简介：摘要背景骨髓间充质干细胞为骨缺损的治疗提供一种新的研究方法，是近年来研究的热点。目的回顾近年来骨髓间充质干细胞经不同途径及物质诱导成骨分化及效果的研究进展。方法检索中国知网数据库和PubMed数据库2010年至2018年文献，共检索到1076篇文章，按纳入和排除标准文献进行筛选，共纳入18篇文章进行分析。结果与结论骨髓间质干细胞具有较高的成骨活性。在体内经不同的方式及诱导剂的诱导，可分化成成骨细胞而修复骨缺损区。目前尚无理想的诱导方法，需要进一步的研究及探讨。

简介：目前临床上修复骨缺损常用的治疗方法均存在不同程度的缺陷,骨组织工程学的兴起与快速发展为解决大面积骨缺损提供了一种全新的思路。它通过将支架材料、种子细胞和生物活性因子结合起来,构建一种可促进骨组织再生和功能恢复的复合物,从而达到修复或重建骨缺损的目的。文章对骨组织工程支架材料研究现状、种子细胞的研究现状、生长因子、血管化进行综述,并就其发展趋势进行论述。