简介:摘要目的构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒。方法选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,EcoRI和ApaI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液,Westernblotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平。结果双酶切证实shRNA正确插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功;Westernblotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调。结论成功构建人FasL基因RNA质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体。
简介:摘要目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制小鼠成骨细胞核激活因子受体配体(LigandofreceptoractivatorofNF-JB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/OPG比值的变化,探讨成骨细胞与结核因子诱导的破骨细胞生成的相关性。方法合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(siRNA),用Liopfectamin2000转染成骨细胞,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测RANKL的表达,筛选出最有效的干扰序列,并用Westernblot技术检测成骨细胞的RANKL、OPG的表达,观察RANKL/OPG比例的变化,采用成骨细胞破骨细胞共培养技术探讨转染后的成骨细胞对由结核因子诱导的破骨细胞生成的影响。结果合成的4对siRNA中有一对可使小鼠成骨细胞的RANKLmRNA水平下降80%,蛋白表达下降72%;同时OPG的蛋白表达无明显变化,RANKL/OPG比例明显下调,破骨细胞的生成明显受到抑制。结论RNAi沉默RANKL基因表达可显著下调成骨细胞RANKL/OPG的比值,抑制由结核因子所诱导的破骨细胞生成。
简介:摘要目的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是参与肿瘤细胞代谢的核心转录因子。本研究旨在于评估RNAi下调HIF-1a对肝癌细胞系HepG2生物学特性的影响。方法化学合成特异性HIF-1asiRNA,转染缺氧条件下培养的肝细胞肝癌细胞系HepG2,利用Westernblot技术检测转染后HIF-1a,血管生产因子,和基质金属蛋白酶2表达情况。MTT分析及裸鼠皮下接种肿瘤细胞明确细胞增殖率。结果乏氧条件培养,HIF-1α表达减少61.54%,VEGF表达减少64.71%;MMP-2表达减少53.33%。HepG2细胞增殖力下降50%,接种裸鼠肿瘤形成缓慢。结论HIF-1aSiRNA抑制HIF-1α表达,抑制肝癌细胞系生长。其机制可能与下调血管生成因子和基质金属蛋白酶表达有关。
简介:摘要目的研究分析高脂血症对生化检验项目的干扰,并提出有效的抗干扰对策。方法选取我院2014年6月到2014年12月间收治的高脂血症患者50例作为研究对象,将其随机分为A、B两组。每组25例,A组患者的血液标本行直接检测,B组患者的血液标本则在离心处理后进行检测,分别观察其生化指标的检测结果。同时,选取同期接受生化指标检测的健康志愿者30例作为对照,比较三组受检者检测结果的差异。结果B组高脂血症患者和健康志愿者各项指标的比较均无显著差异,P>0.05,而A组高脂血症患者的主要生化指标(除γ-谷氨酰基转移酶及肌酸激酶外),则与其余两组受检者存在显著差异,比较均有统计学差异(P<0.05)。结论高脂血症会对患者生化指标检测结果的准确性造成一定的影响,给临床诊断造成干扰,可以通过对血液样本实施高速离心、低温冷藏等方法来消除干扰。
简介:在优核质,有DExD/Hhelicase家庭,的至少60个成员许多哪个能察觉到病毒的nucleic酸。由屏蔽所有已知的家庭成员,我们在myeloid作为一个新奇双strandedRNA(dsRNA)传感器识别了helicaseDHX33树枝状的房间(mDCs)。用小heteroduplexRNA(shRNA)的DHX33击倒堵住了mDCs的能力生产类型我干扰素(IFN)响应poly我:C和reovirus。DHX33的HELICc领域被显示poly绑我:C。在DHX33和IPS-1之间的相互作用被DHX33和IPS-1的C终端领域的HELICc区域调停(也指了MAVS和维萨卡)。由RNA干扰的DHX33表示的抑制堵住了poly我:地图kinases的导致C的激活,NF-κ;B和IRF3。在helicaseDHX33和IPS-1之间的相互作用独立于RIG-I/MDA5并且可以是为poly察觉到的一条新奇小径我:在mDCs的C和RNA病毒。
简介:摘要目的探讨微小RNA25在肺癌患者中的价值。方法选择我院明确诊断为肺癌的患者,定义为研究组。同时选择我院健康人群为对照组。研究组肺癌患者与对照组健康人群微小RNA25表达水平;不同病理类型、病理分期、淋巴结转移水平肺癌患者微小RNA25表达水平;微小RNA25与临床病理特征相关性。结果研究组肺癌患者与对照组健康人群微小RNA25表达水平比较有差异(P<0.05);不同病理类型、病理分期、淋巴结转移水平肺癌患者微小RNA25表达水平存在差异,比较有差异(P<0.05);微小RNA25与病理类型、TNM分期、淋巴结转移水平均呈正相关,相关系数分别为0.588、0.612、0.687,P<0.05。结论微小RNA25的测定与评价肺癌患者病理类型、TNM分期、淋巴结转移水平有一定价值,对筛查肺癌人群有重要意义。
简介:摘要目的比较干扰素联合羟基脲与单用干扰素治疗原发性血小板增多症(PT)的治疗效果。方法按随机数表法将我院治疗的71例PT患者分为两组,观察组(n=36)使用注射用重组人干扰素α2a+羟基脲片治疗;对照组(n=35)使用注射用重组人干扰素α2a治疗。统计并记录两组患者的临床疗效和出现的不良反应情况。结果观察组治疗有效率(91.67%)明显高于对照组(71.43%),差异均显著(P<0.05);观察组不良反应率(8.33%)与对照组(8.57%)相近,无统计学差异(P>0.05)。结论与单用干扰素治疗相比,联合羟基脲治疗PT具有更好的疗效,并且不良反应轻微,值得临床推广。
简介:摘要目的探讨α-干扰素治疗丙肝患者采取优质护理干预的临床护理效果。方法本次研究的92例采取α-干扰素治疗的丙肝患者均为我院在2013年12月到2014年10月期间收治,将其按照护理措施的不同分为观察组46例和对照组46例,观察组实施优质护理干预,对照组患者只进行常规护理服务,对比两组患者的护理效果以及不良反应发生率。结果观察组不良反应发生率为4.35%,其治疗总有效率为97.83%;对照组不良反应发生率为19.57%,其治疗总有效率为67.39%。两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论α-干扰素治疗丙肝患者采取优质护理干预的临床护理效果明显,安全性高,值得在临床上推广使用。
简介:摘要目的观察聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)α-2a与普通干扰素(IFN)α-2b治疗慢性丙型肝炎(CHC)的临床疗效。方法106例CHC患者随机分为两组,分别采用IFNα-2b和PEG-IFNα-2a,联合应用利巴韦林治疗,疗程72周,随访24周。主要观察病毒学应答和生化学应答以及药物不良反应。结果PEG-IFNα-2a组治疗结束时病毒学应答(ETVR)和持续应答(SVR)高于IFNα-2b组,但差异无统计学意义(分别为73.68%、65.78%和65.74%、58.82%,P>0.05);IFNα-2b与PEG-IFNα-2a不良反应率无显著差异(P>0.05)。结论PEG-IFNα-2a对CHC患者的疗效优于IFNα-2b,但差异无统计学意义。