简介：RNAi是指通过双链RNA介导特异性降解靶mRNA，导致转录后水平基因沉默的现象。其作用途径有RdRP依赖的RNAi的途径与非RdRP依赖的RNAi途径2种。利用RNAi的基因敲除技术在dsRNA序列选择、质粒或病毒为载体的dsRNA体内合成、发夹样siRNA的转录、dsRNA的导入方法等方面取得了很大进展，在研究人类或其他生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景。

简介：RNA干扰是一种双链RNA介导的序列特异性mRNA降解过程。1998年，AndrewZ．Fire和CraigC．Mello首次发现RNA干扰现象，并初步推测了其机理，引起了科学家们极大的兴趣，众多的科学家投身其中。随着研究的深入，RNAi在众多领域展现了美好的前景，2001和2002年被誉为自然科学的重大突破之一。2006年AndrewZ．Fire和CraigC．Mello因在RNAi上的重大贡献，被授予诺贝尔生理学和医学奖。RNA干扰技术的发展必将影响整个世界。

简介：

简介：摘要目的构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒。方法选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,EcoRI和ApaI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液，Westernblotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平。结果双酶切证实shRNA正确插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功;Westernblotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调。结论成功构建人FasL基因RNA质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体。

简介：目的构建表达Nogo受体（NgR）特异性siRNA199的重组质粒。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA表达载体的要求，在合成、筛选出基因沉默效率较高的siRNA199基础上，设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA，并将其克隆入载体pRNAT-1／6．1／Neo，构建成NgR特异siRNA199重组质粒，然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pRNAT-1／6．1／Neo，构建成NgR特异siRNA199重组质粒，酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符，目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功，为构建病毒载体及观察重组质粒抑制大鼠NgR基因的表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。

简介：RNA干扰（RNAinterferenceRNAi）是由小干涉RNAs介导的转录后基因沉默,能引起序列特异性的mRNA降解,广泛存在于生物体中.本文介绍了RNAi的作用机制,小干涉RNA（smallinterferenceRNAsiRNA）的制备以及RNAi技术在哺乳动物中的应用,在基因功能研究、基因治疗方面显示出巨大的前景.但作为一种新型的基因阻断方法,由于我们对RNAi的机制尚不完全明了,RNAi技术的应用在方法学等方面尚有许多亟待改进之处.

简介：摘要Inclisiran是一种小干扰RNA(siRNA)，以干扰前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶Kexin-9(PCSK9)信使RNA表达为主要作用，从而持续降低PCSK9和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平，具有良好的有效性及安全性。现对inclisiran的适应证、作用机制、药代动力学、临床疗效、不良反应、特殊人群进行综述。

简介：RNA干扰（RNAi）是生物体内源基因发生转录后特异性降解的一种生理现象，作为抵抗病毒的免疫机制，广泛存在于生物体内。RNAi在秀丽隐杆线虫中的发生机制已明确，但昆虫的系统性RNAi不同于线虫，在昆虫中尚未发现线虫跨膜蛋白SID．2的同源蛋白，且果蝇中不存在依赖于RNA的RNA聚合酶（RdRP），但存在具有相似活性的物质。昆虫发生RNAi的效率不仅与靶标基因自身及双链RNA的选择有关，而且与虫体的发育状态及摄入双链RNA的剂量相关。随着RNAi在昆虫中作用特点的阐明，RNAi的应用价值也逐渐体现。近年来，通过RNAi沉默靶标基因，不但促进了昆虫基因功能研究的发展，而且被广泛用于重要农业害虫抗药性基因的研究。最新研究表明，RNAi结合第2代测序技术，针对非模式昆虫，能迅速找到具有致死效应的靶标序列，加快了利用RNAi技术生产生物农药的步伐。

简介：RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术是一种双链州double-strandedRNA，dsRNA）触发的。在进化上高度保守的序列特异性转录后基因沉默机制（Post-Transcrip-tiolalGeneS]lendng．PTGS）。自1998年Fire等发现并明确提出“dsRNA介导的RNA干扰”概念后，由此衍生而来的RNA干扰技术得到广泛重视并不断发展成熟,在基因功能。

简介：运用RNA干扰（RNAi）技术可以通过以下策略进行肿瘤的靶向治疗：抑制癌基因、生长因子及其受体的过表达，从而抑制细胞生长；干扰细胞周期蛋白及其相关基因的表达，从而抑制细胞增殖；抵抗致癌病毒的入侵；抑制抗凋亡基因的表达；上调和恢复抑癌基因的功能；抑制肿瘤发生过程中的关键酶；抑制与肿瘤转移有关的血管生成；靶向端粒酶；靶向耐药基因。尽管目前RNAi已经较为广泛地应用于基因功能研究和肿瘤疾病的基因治疗研究中，但其在应用过程中还有许多亟待解决的问题。我们就RNAi及其在肿瘤疾病基因治疗中的应用策略和存在的问题做一综述。

简介：表遗传学修饰的DNA甲基化与基因转录有关，在肿瘤的发生发展中起着十分重要的作用，一些肿瘤抑制基因启动子区域CpG岛甲基化与肿瘤的形成密切相关。今年来逐渐发展的RNA干扰技术可以在细胞内抑制特定基因表达，它由双链RNA介导产生，可以降解与之同源的RNA序列，具有高度的特异性。RNA干扰技术在基因甲基化的研究中得到了广泛的应用，在肿瘤的生物治疗方面有着良好的发展前景。

简介：摘要RNA干扰技术已经迅速的被发展成为一种治疗手段，用于特异的下调基因从而减轻病痛。这一技术特别适用于由于病毒感染的疾病。现在大量的研究已经表明无论在体内还是在体外，RNA干扰都可以抑制病毒。这里有一个基本原则每一个的病原物RNA干扰治疗都必须量身定做，其中包括1.发挥干扰的RNA的导入方法途径，2.给药途径，3.目的基因，4.RNA干扰作用的持续时间。尽管对于每种病毒都可以制定有效的策略但是他们都面临着同样的挑战。重要的是，治疗策略必须考虑到在病毒基因组可能出现的极快速进行，以及利用计算和生物信息学方法来辅助治疗策略以防止病毒逃逸。此外，所有的RNA干扰治疗策略都需将发挥干扰作用的核酸序列导入到靶细胞中，这将受益于基因设计和导入方法的发展。这里我们总结了在抗病毒RNA干扰方面取得的重要进展，讨论如何将这些发现有效的应用到诊断治疗中。

简介：摘要RNA干扰(RNAinterference,RNAi)作为一种技术手段，已被广泛用于探索基因功能和基因治疗领域。肝星状细胞是肝纤维化发生发展过程中的关键细胞。以肝星状细胞为靶标,应用RNA干扰技术沉默某些目的基因表达，是肝纤维化治疗手段之一。

简介：本研究以拟南芥DNA为模板，将罗勒烯合成酶AtTPS03基因的一个目的片段克隆到T-载体上。对克隆片段测序后，进行Blast比对，结果目的片段的序列与GenBank上报道的序列同源性达到100％。根据RNA干扰的基本原理，将目的片段正反向连到干扰载体pFGC5941查尔酮内含子的两侧，经限制性酶切和PCR扩增检测，证明已成功构建了干扰载体P-2AT03。利用农杆菌介导的浸花法转化拟南芥。收获的种子在含草丁膦的培养基上筛选抗性苗，通过对抗性苗的PCR检测，已成功获得了12株转基因苗。这些转基因苗为进一步研究罗勒烯和罗勒烯合成酶的功能奠定了良好基础。

简介：近年来由小干扰RNA（siRNA）所介导的RNA干扰（RNAi）技术发展迅速，如何高效、安全地将siRNA转运至靶组织是决定这一技术应用前景的关键问题。本文重点围绕构建siRNA的非病毒靶向载体递送系统的研究进展进行综述。

简介：【摘要】：临床研究发现， sFRP3蛋白在小鼠牙乳头间质中呈高表达水平，且通过外源性 sFRP3蛋白能够影响小鼠磨牙发育状况，使小鼠牙齿发育规格低于平均水平，由此可见 sFRP3蛋白在小鼠牙齿发育中具有重要作用。文章主要针对这一结论展开分析。

简介：目的初步探讨Bmi－1基因对胶质瘤细胞增殖状况的影响。方法采用RNA干扰技术沉默U251胶质瘤细胞中Bmi－1基因，RT—PCR检测干扰效果，CCK8观察U251细胞的增殖状况。结果RNA干扰Bmi－1后，Bmi－1基因表达降低，U251细胞增殖减慢。结论Bmi－1基因可以促进胶质瘤细胞的增殖，有可能促进了胶质细胞瘤的发生、发展。

简介：基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础，RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambda噬菌体特异位点重组特性的通用克隆技术，该技术可以将大批目的基因方便、快捷地连接到受体载体上。本文利用Gateway技术结合传统酶切、连接方法，构建了适用于单子叶植物基因枪和农杆菌转化的RNA干扰Gateway载体pAHC．PSK—RNAi、pClean—G185．RNAi和过表达Gateway载体pAHC．PSK—OE和pClean—G185一OE，为利用基因枪和农杆菌介导的遗传转化，在小麦和水稻等单子叶植物中进行规模化基因功能研究奠定了基础。

简介：摘要外泌体(exosomes)是细胞内源性的小囊泡，大多数哺乳动物细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体已成为细胞间通讯的重要介质，用于传递膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA的载体。近年来，小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)已经成为病理生理疾病治疗的潜在选择，但是不良的生物利用度限制了其治疗潜力。为了实现RNA药物的治疗潜力，必须开发有效的、组织特异性的和非免疫原性的递送技术。目前已经研究了几种载体，其中外泌体被认为是有效递送siRNA的可行的载体，这里将主要对外泌体及外泌体能作为siRNA递送的天然载体进行概述。

简介：目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。