简介：摘要目的建立猴支气管上皮细胞的原代培养方法，为进一步研究肺癌的发生机制奠定基础。方法体视显微镜下分离猴支气管粘膜层，用IV胶原酶消化粘膜层并培养猴原代支气管上皮细胞，采用鼠抗人角蛋白单克隆抗体(CK14)鉴定支气管上皮细胞。结果IV型胶原酶消化法成功培养猴原代支气管上皮细胞，使用鼠抗人角蛋白单克隆抗体成功鉴定所培养细胞为原代支气管上皮细胞。结论该方法是进行猴支气管上皮细胞原代培养的可行且有效的方法。

简介：人们最早采用整体动物实验研究化学物毒性及毒作用机制.随着细胞培养方法的建立和成熟,其在毒理学研究领域中的应用已越来越广泛.1967年Howard报道了用胶原酶和透明质酸酶灌流肝脏并分离肝细胞的新方法,使原代肝细胞的培养成为一种简便、快速、经济的毒理学体外实验系统.

简介：目的研究腰椎间盘细胞在微载体培养与单层培养中细胞表达蛋白多糖含量的差别。方法椎间盘疾病手术病例的术中切除组织采用酶消化法分别进行微载体三维细胞培养和单层细胞培养；取胎儿椎间盘组织，显微镜下区分髓核细胞和纤维环细胞，分别进行培养，同成入组对照。利用^35S放射标记渗入放免定量测定的方法进行蛋白多糖含量的检测。结果①椎间盘细胞胞内的蛋白多糖含量（cpm），细胞单层培养组为101．909±11．439，微载体立体培养组为136．607±10．792，P〈0．05；②椎间盘细胞表达的蛋白多糖含量（cpm），细胞单层培养组为105．119±13．040，微载体立体培养组为174．231±17．676，P〈0．05；③各组椎间盘细胞表达的蛋白多糖含量均高于细胞内的含量；④胎儿腰椎间盘细胞蛋白多糖的含量及表达量均高于成人退变椎间盘细胞，胎儿髓核细胞蛋白多糖的表达量高于纤维环细胞的表达量。结论椎间盘细胞的微载体三维立体培养相对单层培养具有较高细胞蛋白多糖的表达量，是一种较好的细胞培养方式。

简介：目的：研究层粘连蛋白（laminin，LN）对鼠颌下腺细胞（ratsubmandibularglandcells，RSGCs）生长及分泌功能的影响。方法：取对数生长期的第2代大鼠颌下腺细胞用于实验，按加入不同浓度LN分4组（0、5．0、25．0和50．0mg／L）进行培养，相差显微镜的观察，绘制生长曲线，MTT比色法、自动生化分析仪检测LN对细胞增殖及淀粉酶分泌功能的影响。结果：培养的RSGCs免疫组化鉴定CK8．13、S-100蛋白染色呈阳性，波形丝蛋白染色呈阴性。培养72h后MTT法检测5．0-50．0mg／LLN组细胞吸光度A值与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。培养96h后检测培养液中淀粉酶的含量，各浓度组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：LN能促进RSGCs的黏附和增殖并保持RSGCs的正常分泌功能。

简介：目的：建立和评价人牙龈成纤维细胞原代培养方法,并观察其生物学特性。方法：分别用组织块法、2种改良酶消组织块法培养人牙龈成纤维细胞（HGF）,用形态学、免疫荧光鉴定细胞来源。通过活细胞观察,MTT比色实验研究细胞体外生物特性。比较3种培养方法培养HGF的效果。结果：细胞抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,符合人牙龈成纤维细胞的形态学特征和生物学特性。组织块法、改良酶消组织块法（翻瓶法）、改良酶消组织块法（盖玻片法）的细胞培养成功率分别为26.7%、54%、60%。组织块法和2种改良酶消组织块法间的成功率差异有显著性（P〈0.01）,2种改良酶消组织块法间的成功率差异无显著性（P〉0.05）。结论：本实验建立的细胞系为人牙龈成纤维细胞。2种改良酶消化组织块法可显著提高人牙龈成纤维细胞原代培养成功率。

简介：体外组织块培养成年、老年哺乳动物室管膜下区(SVZ)神经干细胞的研究甚少.本研究的目的是探索体外培养神经干细胞的实用方法及扩充神经干细胞作为移植或基因转移的供体细胞来源.取8、14及24月龄SD大鼠(雌雄不拘)SVZ组织块作体外培养,在DMEM/F12+B27培养液中加入bFGF(20ng/ml),促进其组织块形成神经小球,刺激神经干细胞增殖,并用Nestin免疫组化鉴定.结果显示,培养7～10d产生的神经小球数量多,细胞生长状态佳,绝大多数细胞为Nestin阳性的神经干细胞,此期的神经干细胞较适宜于作细胞移植或基因转移.此法尚有取材方便、组织细胞损伤小、细胞易存活及经济等优点,不失为一种具有实用价值的通过体外培养扩增神经干细胞的方法.

简介：目的探讨树突状细胞（DCs）在慢性乙型肝炎发病过程中的功能特点，为进一步研究慢性乙型肝炎的发病机制提供科学依据。方法对10例慢性乙型肝炎患者、10例乙型肝炎病毒（HBV）携带者及10例正常对照者的外周血DCs进行体外培养，应用流式细胞技术检测DCs表面分子HLA-DR、CD80、CD86的表达，并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DCs上清液白细胞介素（IL）-12的水平，比较DCs在慢性乙型肝炎不同感染阶段的功能特点。结果培养7天的DCs在透射电镜下观察，DCs充满每个视野，细胞体积较大，细胞表面突起较丰富，胞浆内粗面内质网及溶酶体丰富，线粒体结构较清楚，核大而圆，核膜清晰，染色质分布较均匀。正常对照组的HLA-DR、CD80和CD86的表达率均〉54％，而慢性乙型肝炎及HBV携带者组上述DCs表面分子的表达率普遍降低，与正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01），慢性乙型肝炎与HBV携带者组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。培养第7天DCs上清IL-12的表达水平在慢性乙型肝炎、HBV携带者组明显低于正常对照组（P〈0．05），而慢性乙型肝炎与HBV携带者组之间无明显差异（P〉0．05）。结论慢性乙型肝炎患者及HBV携带者均存在DCs表型和功能的缺失。

简介：目的探讨体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的可行性,分析其部分表型特点,为细胞移植治疗中枢神经系统疾病奠定基础.方法采用贴壁筛选法分离纯化大鼠MSCs,进行培养,传代扩增,免疫组化鉴定细胞是否表达具有干细胞特性的标记抗原-神经巢蛋白(nestin),并用流式细胞仪进行荧光检测初步鉴定.结果分离后的MSCs出现增殖性生长,免疫组化显示巢蛋白(nestin)表达阳性,经流式细胞仪检测显示CD44,CD90阳性,CD45阴性.结论在体外可培养出较大丰度大鼠骨髓间充质干细胞,而且此方法简单易行.

简介：摘要方法本研究通过MTT法观察七叶亭对体外培养关节软骨细胞增殖的影响。设立A组阴性对照组（空白对照组),B组阳性对照组(40ug/ml),C组阳性对照组(80ug/ml)。结果40ug/ml组，80ug/ml组从48小时后测得的OD值比空白对照组的OD值均高，且差异有显著性(P<0.05)；其中以80ug/ml组的对关节软骨细胞增殖最为显著，尤其在第4d、第8d时尤为明显，OD值分别比空白对照组高26.38%和22.53%。结论本实验结果显示七叶亭能促进软骨细胞的增殖，以80ug/ml组最为明显。

简介：摘要：目的 分离培养经血来源间充质干细胞 (Menstrual Blood-Derived Mesenchymal Stem Cells， MenMSCs)，检测胚胎干细胞转录因子 (octamer-binding transcriptionfactor- 4， Oct4）的表达。方法 通过密度梯度离心和差速帖壁法分离间充质干细胞，体外传代培养，通过倒置相差显微镜观察细胞的粘附、生长情况。取对数生长期的细胞在酶标仪 450nm波长处检测吸光度值，绘制细胞生长曲线 ，有限稀释法观察克隆形成，免疫细胞化学方法检测干细胞表面标志的表达。结果 经血间充质干细胞在体外培养体系中增殖迅速，免疫细胞化学染色Oct4、 CD44阳性。结论 经血间充质干细胞增殖能力强，具有成体干细胞和胚胎干细胞的特性。

简介：

简介：背景：前期实验发现掺锶的聚磷酸钙材料对单独培养内皮细胞或成骨细胞的行为有显著促进作用。目的：观察掺锶聚磷酸钙对共培养下成骨细胞与脐静脉内皮细胞行为和功能蛋白表达的影响。方法：取第3代人脐静脉内皮细胞与人成骨肉瘤细胞MG63以2∶1的浓度比接种于24孔板中，然后再分别加入掺锶聚磷酸钙、聚磷酸钙与羟基磷灰石，共培养7d后。采用ELISA法检测细胞血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达，采用MTT法检测细胞活性。结果与结论：与聚磷酸钙与羟基磷灰石相比，在掺锶聚磷酸钙表面生长的细胞呈现更加良好的形态，细胞融合生长形成单层覆盖在材料表面，并且在材料表面有一定的跨度生长，说明掺锶聚磷酸钙材料能促进内皮细胞在其上黏附、伸展，有利于细胞的生长和增殖。掺锶聚磷酸钙组细胞分泌的血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子明显高于聚磷酸钙组和羟基磷灰石组（P〈0.05），说明掺锶聚磷酸钙可上调血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达

简介：目的研究将异体骨髓间充质干细胞（MSCs）和CD34＋单核细胞（MNCs）共培养体系种植于脱细胞海绵体支架上在兔体内构建阴茎海绵体组织的可行性。方法分别从兔骨髓与兔外周血中提取并鉴定MSCs与CD34＋MNCs,将两种细胞组分以107/mL的密度种植于制备好的兔阴茎海绵体脱细胞胶原支架上,同时将相同密度的MSCs、CD34＋MNCs分别种植于支架上,培养4天后植入一种兔阴茎海绵体缺损模型中。3个月后对工程化组织进行取材,行H＆E及Masson三色染色等组织学检测。结果MSCs和CD34＋MNCs共培养组近白膜处的海绵体保留了正常海绵体结构,而MSCs组、CD34＋单核细胞组及空白支架组以疤痕增生为主,尽管较之CD34＋单核细胞组及空白支架组,间充质干细胞组疤痕组织中的血管数目较多（P〈0.05）。结论我们的研究证明了将MSCs和CD34＋MNCs的共培养体系种植于脱细胞支架上植入兔体内可以构建出一段组织学上与原生海绵体相似的组织;CD34＋MNCs在体内主要通过协同MSCs而非单独发挥其促血管化的生物学效应。

简介：目的：研究3—甲基胆蒽(3—methylcholanthrene，3—MC)对原代培养大鼠肝细胞细胞色素P4501A1／2的诱导作用，并探讨其时间—效应和剂量—效应关系。方法：原位两步胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞，无血清条件下培养细胞，并用不同剂量的3—MC诱导肝细胞24h或48h。乙氧基试卤灵(ethoxyresomn，EOR)为CYP1A酶活性探针药，高效液相色谱法(HPLC)测定试卤灵(resomfin，RSF)浓度。TaqmanRT—PCR法测定CYP1A1基因表达，Westembolt法分析CYP1A酶蛋白表达。结果：实验条件下对照组和3—MC诱导组的CYP1A1基因和酶蛋白，CYP1A1／2酶活性均可被检测。3—MC对原代培养大鼠肝细胞CYP1A1／2基因及蛋白表达、酶活性的诱导作用呈明显的剂量依赖性。结论：3—MC对大鼠原代培养肝细胞的CYP1A1／2有明显的诱导作用。

简介：摘要目的利用条件性重编程细胞(CRC)技术培养人源性前列腺癌细胞，为前列腺癌体外实验研究建立个体化原代细胞库。方法2019年1—4月共获取3例新鲜的前列腺癌病理组织标本，将标本分为2份，一份经术中快速冰冻病理检查确定为癌组织；另一份用0.25% EDTA酶消化为分散的悬浮单个的癌细胞，利用CRC技术对癌细胞进行培养。培养方法：将原代细胞与经30 Gy照射的3T3-J2小鼠成纤维细胞共培养于条件性培养基中，观察癌细胞克隆团生长情况。使用差异性消化对原代细胞进行传代：先用0.25% EDTA胰酶消化1 min去除饲养层细胞，PBS清洗后再用0.25% EDTA胰酶消化原代细胞。待癌细胞稳定后，通过免疫荧光、免疫组化染色、免疫印迹和荧光原位杂交技术等实验，验证所培养的癌细胞性质。结果体外利用CRC技术建立3例前列腺癌原代细胞株，细胞培养约15 d建系成功，并可持续稳定传代。细胞鉴定结果显示，所培养的细胞均表达AR、CK5、CK18和P504s，同时也弱表达PSA。荧光原位杂交技术显示细胞出现≥1.6%的TMPRSS2/ERG基因融合，这些现象符合前列腺癌的细胞特征。结论利用CRC技术能稳定地体外持续培养前列腺癌原代细胞。

简介：摘要目的探讨应用细胞转移技术，解决细针穿刺细胞学涂片因数量有限无法进行多种免疫细胞化学染色等辅助检查的问题，为细胞学精准诊断提供可能性。方法收集2020年1至5月北京医院病理科行细针穿刺细胞学病例34例，将一张涂片上丰富的细胞分割到若干张载玻片上，进行细胞转移。转移片褪染后行EnVision法免疫细胞化学染色，比较细胞转移片及对应组织学标本免疫组织化学染色的一致性。结果34个病例共完成180张细胞转移片，其中174张转移片细胞形态、大小及结构与原始细胞涂片相一致，细胞转移成功率为96.7%（174/180）。对成功转移的细胞学涂片进行了174项次免疫细胞化学染色，其中153个免疫细胞化学染色有相应的组织学标本免疫组织化学染色，在这153个免疫细胞化学染色中有148个与组织学标本免疫组织化学染色结果相一致，其染色定位准确、清晰、背景干净，一致率为96.7%（148/153）。34例细针穿刺细胞学诊断与相应组织学标本病理诊断相对照，诊断均一致，一致率达100%。结论细胞转移技术简单易行，可对涂片中具有诊断价值的细胞进行有效利用，对细胞学精准诊断有重要意义。

简介：摘要目的探讨液基薄层细胞制片技术在脑脊液脱落细胞学检查中的应用。方法用传统涂片和TCT制片同时对172例脑脊液脱落细胞学检查送检标本进行制片，比较两种方法对癌细胞阳性的检出率，并观察其病理结果。结果TCT制片对脑脊液脱落细胞学癌细胞阳性检出率高于传统涂片，差异有统计学意义（P＜0.05）。传统涂片细胞量极少，核仁不明显，着色较深，存在细胞变形现象；TCT制片细胞形态饱满，细胞核呈圆形、椭圆形，核膜清晰且光滑，染色质均细，着色浅，可见细小的核仁。细胞质在两种涂片未见明显区别。结论TCT制片技术对脑脊液脱落细胞学癌细胞阳性检出率及诊断准确率高，漏诊率低。

简介：摘要目的分析细胞块技术在浆膜腔积液细胞学诊断的应用价值。方法选取2015年1月-2016年7月收集的60例浆膜腔积液作为研究对象，均进行涂片HE染色和免疫细胞化学染色检查，观察比较两组染色情况和检验结果。结果涂片组阳性检出率为70.01%，明显低于化学检测组检出率91.67%（P＜0.05）；其阴性检出率16.67%、不确定率13.32%均较化学检测组阴性率5.01%、不确定率3.32%低（P＜0.05）。结论细胞块技术应用于浆膜腔积液细胞学诊断效果优于涂片检验法。

简介：摘要目的探讨骨骼肌细胞Syncytin-1过表达对脊髓前角运动神经元-骨骼肌细胞-施万细胞共培养模型炎性因子、钠离子依赖性中性氨基酸转运体1(ASCT1)和神经保护因子的影响。方法(1)体外原代培养脊髓前角运动神经元、骨骼肌细胞、施万细胞，免疫荧光染色分别检测细胞胆碱乙酰转移酶(ChAT)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙结合蛋白B(S100B)的表达进行鉴定。(2)将Syncytin-1重组质粒及空载质粒分别转染骨骼肌细胞后24 h，与另外2种细胞混合，分别建立3种细胞的共培养模型(Syncytin-1重组质粒转染组：Syncytin-1重组质粒转染的骨骼肌细胞、脊髓前角运动神经元、施万细胞混合；空载质粒转染组：空载质粒转染的骨骼肌细胞、脊髓前角运动神经元、施万细胞混合)。于倒置显微镜下观察共培养细胞形态及连接的变化。共培养48 h后应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组共培养细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting分别检测2组共培养细胞Syncytin-1、ASCT1、TNF-α、iNOS、VEGF mRNA和蛋白的表达。结果(1)免疫荧光染色检测显示：脊髓前角运动神经元中ChAT阳性表达细胞、骨骼肌细胞中α-SMA阳性表达细胞、施万细胞中S100B阳性表达细胞均占95%以上，且定位在细胞质内。(2)Syncytin-1重组质粒转染组及空载质粒转染组共培养细胞的数量及形态未见明显差异。与空载质粒转染组比较，Syncytin-1重组质粒转染组共培养细胞上清液TNF-α、iNOS及VEGF的浓度均增高，细胞TNF-α、iNOS、Syncytin-1、VEGF mRNA和蛋白的表达均增高，ASCT1 mRNA和蛋白的表达均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨骼肌细胞Syncytin-1过表达可以引起共培养细胞炎性因子释放、ASCT1表达降低、神经保护因子VEGF表达增高。

简介：随着对侵袭性真菌感染认识的提高，早期经验性抗真菌治疗被越来越多的临床医师采用，但在非移植、非粒细胞缺乏领域经验治疗的作用尚未明确，早期诊断是提高治疗准确性、降低过度治疗以及由此产生的真菌耐药、医疗资源耗费及不良反应增加等的关键。由于组织病理和培养技术的灵敏度低、耗时长，难以满足临床需要，非培养技术成为近年研究热点，并已被批准用于血液系统恶性疾病、实体器官移植受者等免疫受损人群侵袭性真菌感染的诊断“，在非移植、非粒细胞缺乏的重症患者中也受到广泛重视。