简介:目的探讨法舒地尔对于HK-2细胞氧化应激和内质网应激的影响。方法体外培养人肾近曲小管细胞,分为对照组、高糖组和法舒地尔组。对照组细胞采用正常浓度葡萄糖培养,高糖组采用高浓度葡萄糖培养,法舒地尔组细胞同时采用高糖和不同浓度法舒地尔处理。细胞活性和凋亡水平分别采用噻唑蓝(MTT)和DNA断端末端标记(TUNEL)试剂盒检测。采用活性氧(ROS)试剂盒,RealtimePCR和Westernblot检测ROS含量和基因表达水平。结果与对照组相比,高浓度葡萄糖可以引起HK-2细胞活力降低,凋亡率升高,而法舒地尔则可以促进细胞活力,降低凋亡率,呈现浓度梯度依赖性(P<0.05)。高浓度葡萄糖显著提升ROS含量,法舒地尔的浓度则与ROS的产量呈负相关(P<0.05)。高糖处理促进p47phox和Nox4表达水平升高,法舒地尔则能够逆转这一过程,且呈现浓度依赖性(P<0.05)。高糖组GRP78和Chop的表达水平均显著上升,而Bcl-2的表达水平显著下降(P<0.05)。法舒地尔能够抑制GRP78和Chop表达,并促进Bcl-2的表达水平,且有浓度依赖性(P<0.05)。结论法舒地尔可能通过参与调控细胞氧化应激和内质网应激发挥细胞保护作用。
简介:摘要目的探讨紫檀芪在草酸诱导人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生内质网应激和凋亡的作用。方法2019年1月至2020年1月,取HK-2细胞分为对照组(基础培养基培养)、草酸组(含4 mmol/L草酸的基础培养基培养)、紫檀芪干预组(含草酸4 mmol/L+紫檀芪5、10、20 μmol/L的混合培养基共同培养),3组细胞培养12 h后进行如下实验。CCK-8实验检测细胞活力,检测乳酸脱氢酶及抗氧化能力相关指标(还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶、总抗氧能力);蛋白质印迹法检测细胞内ATF6、GRP78、DDIT3、caspase12和裂解的caspase3/9的蛋白表达情况。3组在进行下述实验时,紫檀芪干预组中仅用紫檀芪浓度10 μmol/L:检测线粒体膜电位、caspase3酶活性、细胞凋亡率、活性氧水平,实时荧光定量PCR检测细胞内ATF6、GRP78、DDIT3的mRNA表达情况。结果CCK-8实验和及乳酸脱氢酶检测结果显示,草酸组较对照组的细胞活力[(45.6±3.1)%与100.0%,P<0.001]明显下降,乳酸脱氢酶[(330.2±11.1)U/L与(92.6±6.7)U/L,P<0.001]明显上升;紫檀芪干预组(5、10、20 μmol/L)的细胞活力[(57.2±1.7)%、(67.2±3.4)%、(78.9±1.8)%]较草酸组均明显上升(均P<0.05),乳酸脱氢酶[(288.1±4.3)U/L、(260.9±5.5)U/L、(202.6±10.2)U/L]较草酸组均明显下降(均P<0.05)。丙二醛、还原型谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、总抗氧能力五项生化指标检测结果显示的细胞损伤状态与CCK-8和乳酸脱氢酶实验结果一致。活性氧检测结果显示,草酸组较对照组的活性氧水平(76.3±4.9与6.2±1.7,P<0.01)明显上升;紫檀芪干预组(10 μmol/L)的活性氧水平(39.5±5.4)较草酸组明显下降(P<0.01),流式细胞术和caspase3酶活性检测结果显示3组细胞凋亡率和caspase3活性的上升趋势与活性氧水平变化趋势一致。线粒体膜电位结果显示,草酸组较对照组的线粒体膜电位(0.76±0.15与7.84±0.26,P<0.01)明显下降,紫檀芪干预组(10 μmol/L)的线粒体膜电位(2.26±0.27)较草酸组明显上升(P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,草酸组较对照组的ATF6、DDIT3、GRP78、caspase12和裂解的caspase3/9的蛋白相对表达量显著上升(均P<0.05);紫檀芪干预组(5、10、20 μmol/L)较草酸组的ATF6、DDIT3、GRP78、caspase12、裂解的caspase3/9的蛋白相对表达量显著下降(均P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示3组ATF6、DDIT3和GRP78的mRNA表达趋势与蛋白质印迹法结果一致。结论紫檀芪可以有效抑制草酸诱导的HK-2细胞发生内质网应激和凋亡。
简介:目的:探讨三七总皂苷(PNS)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响.方法:采用流式细胞仪(FCM)结合免疫荧光法(IF)检测PNS对TGF-β1诱导的HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞百分率的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PNS对TGF-β1诱导的HK-2细胞α-SMA信使核糖核酸(mRNA)表达.结果:流式细胞仪(FCM)结合免疫荧光法(IF)示:PNS200~800mg/L可使TGF-β1诱导的HK-2细胞增加的α-SMA阳性细胞百分率回降;RT-PCR示:PNS200~800mg/L剂量和时间依赖性地使TGF-β1诱导的HK-2细胞增加的α-SMAmRNA的基因表达回降.结论:PNS可通过抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞表型转分化,从而参与延缓肾间质纤维化的进程.
简介:目的:通过建立亚细胞组分药物浓度测定方法,探讨阿德福韦(adefovir,ADV)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)损伤的机制,以及线粒体分裂相关蛋白drp1抑制剂对损伤的保护作用。方法:利用免疫磁选分离法分离亚细胞组分;利用液质联用仪(LC-MS/MS)测定亚细胞组分中的ADV的浓度;利用realtimePCR测定线粒体DNA(mtDNA)的相对含量。结果:ADV处理组HK-2细胞线粒体组分中ADV含量为(9.16±2.78)amol/cell,显著高于细胞核组分中ADV含量(1.68±1.25)amol/cell,经Mdivi-1预处理的线粒体组分中ADV含量显著降低,而细胞核中组分无影响(P〈0.05)。ADV干预后mtDNA相对含量显著低于空白对照组,而Mdivi-1可逆转这一变化。结论:ADV主要分布在HK-2细胞线粒体中;ADV对mtDNA明显抑制作用;Mdivi-1可逆转ADV对HK-2细胞mtDNA的抑制作用。
简介:HK-2井位于哈萨克斯坦西部阿特劳州阿特劳市西北约320km处。该井钻遇的中石炭统岩石类型包括白云岩、石灰岩、硅岩、砂岩和黏土岩,但以硅岩和黏土岩为主,而且成分混杂,交互频繁,富含有机质和深水相的浮游、游泳类微体生物化石。根据岩石中硅质放射虫化石含量高,硅质海绵骨针个体保存完整,有机质含量高,颜色暗,组分细小,泥质、硅质成分为主及生物组合单一等特征,认为该地区中石炭统为深水沉积环境。目前正在勘探的HK-2井所在的乌拉尔区块也已发现深水类型油气藏存在的苗头,建议对该地区深水相油气藏进行调研,同时对该区块和相邻区块能够获得的地震剖面进行追踪分析研究。
简介:摘要目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)能否通过SIRT1/p53途径抑制炎症反应,从而延缓脓毒性肾损伤的发生。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)体外培养,随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、STS组(LPS+STS)、SIRT1抑制剂(EX-527)组(EX-527+STS+LPS)。对照组加入等量PBS;LPS组给予1 mg/L LPS干预12 h;STS组给予30 μmol/L STS预处理2 h后,加入1.0 mg/L LPS干预12 h;EX-527组在25 μmol/L EX-527预处理2 h后,加入LPS 1.0 mg/L和STS 30 μmol/L干预12 h。采用CCK-8检测细胞的增殖活性;采用酶联免疫吸附法检测HK-2细胞上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、内二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达量;采用免疫印迹法(Western-blot)检测SIRT1、p-p53蛋白表达量;采用实时荧光定量PCR检测SIRT1、p-p53 mRNA表达量。结果与对照组相比,LPS组的HK-2细胞增殖活性显著下降(P<0.01)。LPS组的TNF-α、IL-6水平高于对照组,STS组的TNF-α、IL-6水平低于LPS组,EX-527组的TNF-α、IL-6水平高于STS组,但低于LPS组,差异均有统计学意义(均P<0.01);LPS组的MDA水平高于对照组,STS组的MDA水平低于LPS组,EX-527组的MDA水平高于STS组,低于LPS组,差异均有统计学意义(均P<0.01);LPS组的SOD水平低于对照组,STS组的SOD水平高于LPS组,EX-527组的SOD水平高于STS组和LPS组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。LPS组的SIRT1蛋白表达量低于对照组,p-p53蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);STS组的SIRT1蛋白表达量高于LPS组,而p-p53蛋白表达量低于LPS组,差异均有统计学意义(均P<0.05); EX-527组的SIRT1蛋白表达量低于STS组,p-p53表达量高于STS组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。LPS组的SIRT1 mRNA表达量低于对照组,p-p53 mRNA表达量高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05); STS组的SIRT1 mRNA表达量高于LPS组,而p-p53 mRNA表达量低于LPS组,差异均有统计学意义(均P<0.05);EX-527组的SIRT1 mRNA表达量低于STS组,p-p53 mRNA表达量高于STS组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论STS可通过上调SIRT1表达而抑制p-p53生成,进而抑制HK-2细胞的炎症反应及抗氧化作用,延缓肾小管损伤发生,具有一定肾脏保护作用。
简介:摘要目的探讨circ_0001879对高糖作用的肾小管上皮细胞HK-2凋亡和氧化应激的影响及作用机制。方法体外培养HK-2细胞,转染后用30 mmol/L葡萄糖干预24 h。未转染的HK-2细胞分为对照组(NG组)和高糖组(HG组);转染后的HK-2细胞分为HG+si-NC组、HG+si-circ_0001879组、HG+miR-136组、HG+miR-NC组、HG+si-circ_0001879+anti-miR-NC组和HG+si-circ_0001879+anti-miR-136组。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测兔抗人B淋巴细胞瘤-2(B lymphocytoma-2,Bcl-2)和兔抗人Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)表达,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription-real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测circ_0001879和miR-136表达,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0001879与miR-136靶向关系。结果HK-2细胞经高糖处理后,与NG组相比,HG组、HG+si-NC组和HG+si-circ_0001879组circ_0001879含量、HK-2细胞凋亡率、Bax表达及MDA含量明显升高,而miR-136含量、相关蛋白Bcl-2表达及SOD活性明显降低,差异具有统计学意义(F值分别为1036.48、181.50、191.80、380.29、1396.44、195.18、108.17,P值均<0.001);敲减circ_0001879后,与HG组、HG+si-NC组比较,HG+si-circ_0001879组circ_0001879含量、HK-2细胞凋亡率、Bax表达、MDA含量明显降低,而miR-136含量、Bcl-2表达、SOD活性明显升高,差异具有统计学意义{ [(4.40±0.12)、(4.48±0.14)]比(1.44±0.08),[(24.89±1.43) %、(24.93±1.56)%]比(12.53±0.61)%,[(0.76±0.05)、(0.76±0.06)]比(0.27±0.02),[(621.27±23.75) nmol/mL、(626.98±15.24)nmol/mL]比(309.48±15.24) nmol/mL,[ (0.12±0.01)、(0.12±0.01)]比(0.80±0.04),[(0.12±0.01)、(0.13±0.01)]比(0.54±0.05),[(94.00±5.59) U/L、(92.64±7.92)U/L]比(215.69±10.88)U/L,P<0.05 }。Circular RNA Interactome靶基因在线预测软件显示,miR-136的核苷酸序列与circ_0001879存在结合位点。双荧光素酶报告基因研究结果表明,miR-136可明显降低WT-circ_0001879的荧光素酶活性(t=8.23,P<0.05)。过表达miR-136后,与HG+miR-NC组相比,HG+miR-136组MDA含量、HK-2细胞凋亡率、Bax表达明显降低,而SOD活性、miR-136含量、Bcl-2表达明显升高,差异有统计学意义[(630.89±23.31)nmol/mL比(266.84±10.39)nmol/mL ,(25.04±1.51)%比(9.67±0.57)%,(0.76±0.06)比(0.19±0.02),(95.23±4.60) U/L比(225.20±11.36)U/L,(0.12±0.01)比(0.89±0.05),(0.12±0.01)比(0.60±0.06),t值分别为24.71、16.50、15.61、18.37、26.16、13.67,P值均<0.001]。敲减miR-136后,与HG+si-circ_0001879+anti-miR-NC组比较,HG+si-circ_0001879+anti -miR-136组MDA含量、HK-2细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著升高,而SOD活性、miR-136含量、Bcl-2表达显著降低,差异具有统计学学意义[(310.14±9.31)nmol/mL比(591.46±20.22)nmol/mL,(12.63±0.65)%比(21.57±1.15%)%,(0.26±0.02)比(0.62±0.07),(221.22±13.28) U/L比(118.10±6.88)U/L,(0.80±0.05)比(0.23±0.02),(0.55±0.05)比(0.21±0.02),t值分别为21.89、11.72、8.57、11.94、18.33、10.94,P值均<0.001]。结论敲减circ_0001879可通过负调控miR-136来抑制高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2凋亡和氧化应激。
简介:摘要目的通过分析不同病理类型尿蛋白对肾小管上皮细胞(renaltubularepithelialcells,RTECs)凋亡及肾间质纤维化的影响,探讨不同病理类型的肾小球疾病与小管-间质的病变程度差异之间的关系,以进一步明确蛋白尿致肾小管-间质损害的机制。方法用硫酸铵沉淀法提取三种不同病理类型为微小病变(minimalchangedisease)、膜性肾病(membranousnephropathy)、局灶节段性肾小球硬化症(focalsegmentalglomerularsclerosis)并排除继发性因素的肾病综合征患者尿液中的总蛋白成分,以不同浓度尿蛋白刺激HK-2细胞,四甲基偶氮哇盐(MTT)比色法检测不同病理类型肾病综合征患者尿蛋白刺激HK-2细胞后的细胞凋亡率;
简介: BankofChina,themainland'ssecond-largestlender,saiditsimminentHongKonglistingwillhelpenhanceitsefficiencyandtransparencyandimproveitsprofitmargin.……
简介:摘要目的探讨急性骨髓细胞M2亚型细胞临床特征。方法对20例急性骨髓细胞M2亚型白血病患者病例资料回顾性分析,总结其细胞形态特点。结果利用血细胞化学染色法染色分析发现20例患M2亚型细胞白血病中M2a型9例(45%)男骨髓细胞中原始粒细胞>30%,单核细胞<20%,早幼粒细胞以下阶段>10%,5例(25%)女,M2b6例(30%)男患者白血病细胞内可见Auer小体,骨髓中异常的原始及早幼粒细胞明显增多,以异常的中性中幼粒增生为主,此类细胞>30%。染色体和分子学检查t(8;21)(q22;q22)易位是M2b的一种常见非随机染色体重排,其其检出率达90%。结论急性骨髓细胞M2亚型细胞白血病血细胞形态学有独特的特征,对临床分型有重要意义。