简介:目的利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术特定沉默胶质瘤U251细胞株的血小板源生长因子-B(PDGF-B)基因,观察其对U251细胞株细胞凋亡和增殖的影响。方法利用脂质体将针对PDGF-B基因的siRNA转染进入U251细胞,利用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RTPCR)检测PDGF-B基因表达;Westernblot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达,采用MTT法检测胶质瘤U251细胞的增殖,应用流式细胞计数观察抑制PDGF-B基因后胶质瘤U251细胞的凋亡情况。结果RT-PCR检测PDGF-B基因表达明显下降;Westernblot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达明显抑制(抑制率〉60%),MTT结果显示siRNA转染组U251细胞增殖较对照组明显降低;流式细胞学检测提示降低PDGF-B在胶质瘤细胞的表达能抑制胶质瘤细胞的有丝分裂,促进细胞的凋亡。结论构建针对胶质瘤细胞PDGF-B的RNA干扰质粒并转染人胶质瘤U251细胞株后,可明显抑制U251细胞株PDGF的表达,对人胶质瘤U251细胞株有明显的生长抑制和促进凋亡作用。
简介:目的本实验探讨靶向沉默CDCA5基因的表达对人乳腺癌细胞增殖的影响及其主要机制。方法采用Westernblot检测乳腺癌组织、癌旁正常组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、MDA—MB-231及MDA—MB-435s细胞中CDCA5蛋白的表达。针对CDCA5基因的siRNA,设阴性对照组siRNA—NC及空白对照组Blank。PCR检测各组对CDCA5基因的沉默效果。MTT法检测siRNA、siRNA-NC和Blank各组细胞增殖能力,流式细胞仪分别检测3组细胞周期的变化。Westernblot用于分析P1k1、SA2和pSA2蛋白表达情况。结果CDCA5在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。人乳腺癌细胞系MDA—MB-435s中CDCA5蛋白的表达明显高于MCF-7和MDA-MB-231细胞系。siRNA在各组中有最强的基因沉默效果,与siRNA—NC和Blank组相比,siRNA组细胞增殖能力明显降低(P〈0.05),处于细胞周期G2/M期的细胞数量明显增多(P〈0.05)。沉默CDCA5基因后Plk1和pSA2蛋白表达明显降低。结论沉默CDCA5基因可有效抑制乳腺癌细胞增殖,这可能与下调CDCA5/Plk1/SA2信号通路从而使细胞周期被阻滞在G2/M期有关。
简介:摘要目的分析Nogo-66受体特异性小干扰RNA对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经再生功能的影响。方法选取新生大鼠HIBD模型60只,分析大鼠的逃生时间等。结果假手术组和实验组的阳性细胞数明显高于其他两组,P〈0.05表示统计学有意义。而假手术组和实验组相比无差异,P〉0.05表示统计学无意义。HIBD组的大鼠逃生时间明显高于假手术组,实验组的大鼠逃生时间明显短于HIBD组和对照组,P〈0.05表示统计学有意义。结论合成特异性的siRNA能够对新生大鼠的脑组织NgR表达产生一定的影响,从而能够有效促进大鼠神经的再生,促进大鼠神经功能的恢复。
简介:Objective:ThepresentstudyaimedtoinvestigatecircularRNA(circRNA)expressioninuvealmelanoma(UM).Methods:First,weusedmicroarraytocomparetheexpressionprofilesofcircRNAinfiveUMsamplesandfivenormaluveatissues.Next,bioinformaticsanalyses,includinggeneontology(GO)analysisandpathwayanalysis,wereappliedtostudythesedifferentiallyexpressedcircRNAstopredictpathogenicpathwaysthatmaybeinvolved.Quantitativereal-timepolymerasechainreaction(qRT-PCR)in20UMsamplesand20normaluveasampleswasusedtoconfirmthecircRNAexpressionprofilesobtainedfromthemicroarraydata.Finally,weanalyzedtheinteractionbetweenvalidatedcircRNAsandtheirpotentialcancer-associatedmiRNAtargets.Results:Intotal,50,579circRNAs[foldchange(FC)≥2.0;P<0.05],including20,654up-regulatedand29,925down-regulatedcircRNAs,wereidentifiedasdifferentiallyexpressedbetweenUMtissuesandnormaluveatissues.WeusedqRT-PCRtoverifysevendysregulatedcircRNAsindicatedbythemicroarraydata,includinghsacirc0119873,hsacirc0128533,hsacirc0047924,hsacirc0103232,hsa-circRNA10628-6,hsacirc0032148andhsacirc0133460,whichmaybepromisingcandidatestostudyfuturemolecularmechanisms.Conclusions:Thisstudyexplored,forthefirsttime,theabnormalexpressionofcircRNAsinUManddescribedtheexpressionprofileofcircRNAs,providinganewpotentialtargetforthemechanismofUMandfuturetreatmentofUM.
简介:目的骨肉瘤是一类发生于骨间叶组织的恶性肿瘤,恶性程度高。当前其发病的具体分子机制尚不明确且受多种因素影响。环状RNA(circRNA)已被证实在多种疾病中发挥重要的调控作用,可以通过分子海绵机制吸附miRNA进而调控关键基因表达。本研究拟通过查找骨肉瘤circRNA表达谱芯片,并分析差异表达circRNA及其潜在调控机制,预测其在骨肉瘤发生发展过程中的作用。方法通过GEO数据库查找circRNA芯片表达谱,通过GEO2R对芯片进行差异表达分析,对筛选出的上调和下调表达最明显的circRNA各5个做内源竞争性RNA调控网络图,预测出潜在靶mRNA,并应用生物信息学分析方法分析了这些靶mRNA的功能富集情况。结果在骨肉瘤circRNA表达谱芯片(GSE96964)结果中,有110个明显差异表达的circRNA,包括8个明显上调和102个明显下调的circRNA,通过位点预测网站,在5个上调最明显的circRNA下游预测出127个mRNA,5个下调最明显circRNA下游预测出158个mRNA。OMICSbean分析结果显示,这些基因所富集的通路与骨肉瘤的发生发展有密切关系。结论本研究筛选出的110个明显差异表达circRNA不仅可以作为骨肉瘤诊断与治疗的分子标志物,而且在骨肉瘤的发生发展过程中有潜在的调控作用。
简介:摘要目的探讨微小RNA25在肺癌患者中的价值。方法选择我院明确诊断为肺癌的患者,定义为研究组。同时选择我院健康人群为对照组。研究组肺癌患者与对照组健康人群微小RNA25表达水平;不同病理类型、病理分期、淋巴结转移水平肺癌患者微小RNA25表达水平;微小RNA25与临床病理特征相关性。结果研究组肺癌患者与对照组健康人群微小RNA25表达水平比较有差异(P<0.05);不同病理类型、病理分期、淋巴结转移水平肺癌患者微小RNA25表达水平存在差异,比较有差异(P<0.05);微小RNA25与病理类型、TNM分期、淋巴结转移水平均呈正相关,相关系数分别为0.588、0.612、0.687,P<0.05。结论微小RNA25的测定与评价肺癌患者病理类型、TNM分期、淋巴结转移水平有一定价值,对筛查肺癌人群有重要意义。
简介:摘要目的比较干扰素联合羟基脲与单用干扰素治疗原发性血小板增多症(PT)的治疗效果。方法按随机数表法将我院治疗的71例PT患者分为两组,观察组(n=36)使用注射用重组人干扰素α2a+羟基脲片治疗;对照组(n=35)使用注射用重组人干扰素α2a治疗。统计并记录两组患者的临床疗效和出现的不良反应情况。结果观察组治疗有效率(91.67%)明显高于对照组(71.43%),差异均显著(P<0.05);观察组不良反应率(8.33%)与对照组(8.57%)相近,无统计学差异(P>0.05)。结论与单用干扰素治疗相比,联合羟基脲治疗PT具有更好的疗效,并且不良反应轻微,值得临床推广。