简介：

简介：摘要目的构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒。方法选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,EcoRI和ApaI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液，Westernblotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平。结果双酶切证实shRNA正确插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功;Westernblotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调。结论成功构建人FasL基因RNA质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体。

简介：目的构建表达Nogo受体（NgR）特异性siRNA199的重组质粒。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA表达载体的要求，在合成、筛选出基因沉默效率较高的siRNA199基础上，设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA，并将其克隆入载体pRNAT-1／6．1／Neo，构建成NgR特异siRNA199重组质粒，然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pRNAT-1／6．1／Neo，构建成NgR特异siRNA199重组质粒，酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符，目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功，为构建病毒载体及观察重组质粒抑制大鼠NgR基因的表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。

简介：RNA干扰（RNAinterferenceRNAi）是由小干涉RNAs介导的转录后基因沉默,能引起序列特异性的mRNA降解,广泛存在于生物体中.本文介绍了RNAi的作用机制,小干涉RNA（smallinterferenceRNAsiRNA）的制备以及RNAi技术在哺乳动物中的应用,在基因功能研究、基因治疗方面显示出巨大的前景.但作为一种新型的基因阻断方法,由于我们对RNAi的机制尚不完全明了,RNAi技术的应用在方法学等方面尚有许多亟待改进之处.

简介：摘要Inclisiran是一种小干扰RNA(siRNA)，以干扰前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶Kexin-9(PCSK9)信使RNA表达为主要作用，从而持续降低PCSK9和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平，具有良好的有效性及安全性。现对inclisiran的适应证、作用机制、药代动力学、临床疗效、不良反应、特殊人群进行综述。

简介：RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术是一种双链州double-strandedRNA，dsRNA）触发的。在进化上高度保守的序列特异性转录后基因沉默机制（Post-Transcrip-tiolalGeneS]lendng．PTGS）。自1998年Fire等发现并明确提出“dsRNA介导的RNA干扰”概念后，由此衍生而来的RNA干扰技术得到广泛重视并不断发展成熟,在基因功能。

简介：表遗传学修饰的DNA甲基化与基因转录有关，在肿瘤的发生发展中起着十分重要的作用，一些肿瘤抑制基因启动子区域CpG岛甲基化与肿瘤的形成密切相关。今年来逐渐发展的RNA干扰技术可以在细胞内抑制特定基因表达，它由双链RNA介导产生，可以降解与之同源的RNA序列，具有高度的特异性。RNA干扰技术在基因甲基化的研究中得到了广泛的应用，在肿瘤的生物治疗方面有着良好的发展前景。

简介：摘要RNA干扰技术已经迅速的被发展成为一种治疗手段，用于特异的下调基因从而减轻病痛。这一技术特别适用于由于病毒感染的疾病。现在大量的研究已经表明无论在体内还是在体外，RNA干扰都可以抑制病毒。这里有一个基本原则每一个的病原物RNA干扰治疗都必须量身定做，其中包括1.发挥干扰的RNA的导入方法途径，2.给药途径，3.目的基因，4.RNA干扰作用的持续时间。尽管对于每种病毒都可以制定有效的策略但是他们都面临着同样的挑战。重要的是，治疗策略必须考虑到在病毒基因组可能出现的极快速进行，以及利用计算和生物信息学方法来辅助治疗策略以防止病毒逃逸。此外，所有的RNA干扰治疗策略都需将发挥干扰作用的核酸序列导入到靶细胞中，这将受益于基因设计和导入方法的发展。这里我们总结了在抗病毒RNA干扰方面取得的重要进展，讨论如何将这些发现有效的应用到诊断治疗中。

简介：摘要RNA干扰(RNAinterference,RNAi)作为一种技术手段，已被广泛用于探索基因功能和基因治疗领域。肝星状细胞是肝纤维化发生发展过程中的关键细胞。以肝星状细胞为靶标,应用RNA干扰技术沉默某些目的基因表达，是肝纤维化治疗手段之一。

简介：近年来由小干扰RNA（siRNA）所介导的RNA干扰（RNAi）技术发展迅速，如何高效、安全地将siRNA转运至靶组织是决定这一技术应用前景的关键问题。本文重点围绕构建siRNA的非病毒靶向载体递送系统的研究进展进行综述。

简介：【摘要】：临床研究发现， sFRP3蛋白在小鼠牙乳头间质中呈高表达水平，且通过外源性 sFRP3蛋白能够影响小鼠磨牙发育状况，使小鼠牙齿发育规格低于平均水平，由此可见 sFRP3蛋白在小鼠牙齿发育中具有重要作用。文章主要针对这一结论展开分析。

简介：目的初步探讨Bmi－1基因对胶质瘤细胞增殖状况的影响。方法采用RNA干扰技术沉默U251胶质瘤细胞中Bmi－1基因，RT—PCR检测干扰效果，CCK8观察U251细胞的增殖状况。结果RNA干扰Bmi－1后，Bmi－1基因表达降低，U251细胞增殖减慢。结论Bmi－1基因可以促进胶质瘤细胞的增殖，有可能促进了胶质细胞瘤的发生、发展。

简介：摘要外泌体(exosomes)是细胞内源性的小囊泡，大多数哺乳动物细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体已成为细胞间通讯的重要介质，用于传递膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA的载体。近年来，小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)已经成为病理生理疾病治疗的潜在选择，但是不良的生物利用度限制了其治疗潜力。为了实现RNA药物的治疗潜力，必须开发有效的、组织特异性的和非免疫原性的递送技术。目前已经研究了几种载体，其中外泌体被认为是有效递送siRNA的可行的载体，这里将主要对外泌体及外泌体能作为siRNA递送的天然载体进行概述。

简介：目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(shRNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和EcoRⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNAoligo并退火合成双链DNAoligo。将合成好的双链DNAoligo与GV115载体重组,形成GV115-shRNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2mRNA表达分别为0.991±0.087vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2mRNA的表达。

简介：目的构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因，观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法根据BC047440基因序列，设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1，转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表达的效果，并通过MTr法和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化。结果酶切和序列测定提示成功构建了特异表达BC047440基因的shRNA1和shRNA2两个质粒。shRNA1和shRNA2对BC047440mRNA的抑制率分别为80．22％和58．63％。干扰BC047440基因后，肝癌HepG2细胞增殖受到明显抑制，主要停滞在s期。结论构建的shRNA能有效干扰肝癌HepG2细胞BC047440基因的表达，并抑制肝癌HepG2细胞的增殖，提示BC047440基因和肝癌HepG2细胞增殖有关。

简介：RNA干扰（RNAinterference。RNAi）是双链RNA（double—strandedRNA，dsRNA）降解特异性靶基因转录出的mRNA。从而抑制靶蛋白表达的现象。自从二十世纪九十年代发现RNAi这一现象以来，RNAi已被广泛应用于研究基因功能、信号转导通路和基因治疗等方面。随着分子生物学、分子遗传学等学科的发展．发现了许多与肿瘤发生、发展和预后密切相关的基因。经过大量临床前期试验表明，针对特异性靶基因的小干扰RNA（short／smallinterferingRNA．siRNA）治疗胶质瘤是行之有效的。为基因治疗胶质瘤提供了新的思路。

简介：摘要目的探讨RNA干扰Twist基因表达对肝细胞癌细胞（HCC9402）转移的抑制作用。方法用脂质体转染法将表达siRNA-Twist的真核表达载体pGenesil-1-Twist-siRNA(pTwist-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入HCC9402细胞，G418筛选阳性细胞，获得稳定转染的阳性克隆。观察siRNA-Twist对Twist表达的沉默及对肝细胞癌细胞体外侵袭转移的抑制作用，采用RT-PCR技术检测不同处理组细胞中TwistmRNA的表达水平，Western-blot测定蛋白表达水平。建立不同组裸鼠原位肝细胞肝癌模型，观察Twist沉默对裸鼠原位肝细胞肝癌转移的抑制作用。结果pTwist-siRNA组细胞内TwistmRNA及Twist蛋白的表达被有效沉默。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,pTwist-siRNA组、空白对照组、pNeg-siRNA组穿透基底膜细胞数分别为(35±10)、(219±72)、(228±71)个/高倍镜(×200)，前组明显低于后两组，差异分别有统计学意义(P<0.05)。裸鼠体内实验表明，pTwist-siRNA组的肿瘤转移结节、肝脏转移结节、腹水明显减少。结论RNA干扰Twist基因表达对肝细胞肝癌细胞侵袭转移有抑制作用,Twist可能成为肝细胞肝癌基因治疗的新靶点。

简介：目的探讨将小干扰RNA经鼓室注射导入小鼠内耳的可行性。方法选取三月龄健康小鼠，经鼓室注射荧光标记的小干扰RNA探针以及热休克蛋白70（HSP70）小干扰RNA，三日后经耳蜗冰冻切片及基底膜铺片，检测小干扰RNA进入内耳情况及外毛细胞中HSP70蛋白表达。结果鼓室注射荧光标记的小干扰RNA探针三Et即可被成功导入耳蜗组织，鼓室注射HSP70siRNA可抑制毛细胞内HSP70表达，与对照组相比有显著差异（p〈0．01）。结论小鼠鼓室注射小干扰RNA是一种有效的将小干扰RNA导人内耳尤其是毛细胞的方法，在毛细胞损伤机制研究中有一定应用价值。

简介：目的：探讨转录水平基因沉默（TGS）技术和转录后水平基因沉默（PTGS）技术对肝素酶（HPA）基因干扰效果及其对肝癌SMCC-7721细胞侵袭能力的影响。方法从HPA基因启动子区和编码区分别设计并合成TGS和PTGS的小干扰RNA（siRNA），并转染肝癌细胞SMMC-7721；实时半定量PCR和Westernblotting检测TGS和PTGSsiRNA转染后48、72和96hHPA的表达，并设空白组作为对照；Transwell小室实验检测干扰后SMMC-7721细胞的侵袭能力。结果TGS和PTGS两种技术在转染48h后，从mRNA和蛋白水平上均能成功干扰HPA表达；转染后72h，PTGS组HPA恢复表达，而TGS组仍保持沉默；转染后96h，两组HPA均恢复表达。Transwell小室实验表明，TGS和PTGS组HPA基因均能使SMCC-7721的穿膜细胞数减少，TGS组效果更明显。结论TGS技术沉默肝癌SMMC-7721细胞中HPA基因的能力优于PTGS技术，并使肝癌细胞的侵袭能力显著降低。

简介：近年来对于增生性瘢痕形成机制的研究较多，TGF—β信号转导的中介分子Smad家族，位于TGF—β家族配体-受体信号转导系统的下游，通过调控核内靶基因的转录控制创面愈合和病理性瘢痕形成。本研究中，笔者利用小分子RNA干扰技术特异性抑制Smad3基因的表达，观察其对瘢痕增生和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成等的影响，为进一步临床应用基因治疗瘢痕提供理论依据和实验基础。