简介:目的分析巨噬细胞不同极化状态下14-3-3ηmRNA表达及其生物信息,并构建14-3-3η蛋白原核表达载体,为研究其在巨噬细胞活化中的作用提供实验基础。方法提取C57BL/6小鼠骨髓原代巨噬细胞mRNA,反转录后用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测14-3-3ηmRNA水平的改变。运用ProtParamtool、SOPMA等在线软件对14-3-3η氨基酸序列进行分析。以小鼠巨噬细胞cDNA为模板,采用PCR的方法扩增14-3-3η基因,插入pGEX-4T-3载体中,双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21菌株,用异丙基硫代半乳糖苷诱导其原核表达并纯化,SDS-PAGE法和Westernblotting法对融合蛋白进行鉴定。采用Graphpadprism5软件进行统计分析。样本比较均采用配对t检验。结果M1型巨噬细胞14-3-3η表达降低,M2型趋势相反。生物信息学表明14-3-3η蛋白其二级结构中主要为α-螺旋(占62.60%)且疏水性较差(疏水系数为-0.607)。酶切和测序结果提示重组质粒pGEX-4T-3-14-3-3η构建成功。SDS-PAGE和Westernblotting结果表明融合蛋白谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-14-3-3η成功表达和纯化。结论本实验对14-3-3η进行了初步的生物信息学分析,成功表达并纯化融合蛋白GST-14-3-3η,为14-3-3η在巨噬细胞极化上的功能研究奠定了实验基础。
简介:美国结核病发病率稳步下降已几个十年了,但从1985年到1993年,由于几个复杂的社会和医学因素,使结核病的发病率又上升了14%。结核病发病率近期的上升,对于州和地区,由于人员和经费不足,使已经减弱的结核病防治规划增添了需求。全国的结核病规划必须重新赋以生机。如果这些规划能作出有效反应,则此种向公共卫生的挑战,可提供最重要的结核病控制活动。本报告描述了结核病控制规划的一个模式,以及一项成功控制规划的基本内容,其中包括结核病预防和控制的三个主要策略:a)活动性结核病人的鉴定及治疗;b)发现和筛选与结核病人有过接触的人,以决定接触者是否感染了结核分枝杆菌,或具有活动性结核,并提供适当治疗;c)在结核感染及发生结核病的高危人群中、筛选发现结核感染者并提供治疗,以防止进展成活动性结核病。州和地区卫生部门,对结核病的预防和控制负有主要责任。为了成功地对付挑战,结核病控制规划应当有能力实施下列一系列核心工作:·制定全面的计划及策略;·确定临床活动性结核病人;·对确诊病人及可疑结核病人进行管理;·确定并管理感染结核菌的人员;·提供实验室及诊断服务;·收集及分析有关资料;·提供培训及宣传教育。除了详细说明结核病控制规划的基本内容外,本报告着重强调以下几个问题的重要性:a)结核病控制工作的重点;b)需与其他保健的提供者、设施、社区(译者注:美国社区相当于中国街道及居委会)和组织进行很好协调;c)选用其他方法控制结核病(如直接监视下治疗方法的扩大应用);d)对高危人群有目标地筛选与预防规划;e)对当前结核病治疗的一些建议。