HPLC同时测定复方芩兰口服液中黄芩苷、绿原酸、连翘苷的含量

尹祥玉 雷红 王丹丹

（黑龙江珍宝岛药业股份有限公司 163000 ）

摘要：目的：建立HPLC法同时测定复方芩兰口服液口服液中黄芩苷、绿原酸、连翘苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为AgilentC18分析色谱柱(4.6mm×250mmID,5μm)，流动相A为5%甲醇(含0.5%磷酸),流动相B为甲醇,进行梯度洗脱。结果：黄芩苷、绿原酸和连翘苷苷与各自相邻峰的分离度>1.5，黄芩苷、绿原酸、连翘线性范围分别为100.9～336.2μg·mL^-1,14.5～48.4μg·mL^-1,7.4～24.6μg·mL^-1。绿原酸、连翘苷和黄芩苷回收率分别为98.89%、99.27%和99.68%,RSD分别为1.5%、2.0%和2.0%。结论：该方法简便、准确，可同时测定复方芩兰口服液中的黄芩苷、绿原酸、连翘苷的含量。

关键词: 绿原酸;连翘苷;黄芩苷;HPLC;同时测定；复方芩兰口服液

复方芩兰口服液具有辛凉解表、清热解毒之功效,用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛^［1］。由金银花、连翘、黄芩、板蓝根4味中药组成，本品已收载于《中国药典》2015年版中^［2］，分别采用不同高效液相色谱条件测定绿原酸、连翘苷和黄芩苷的含量，其他相关文献^［3-6］均采用HPLC 法同时测定其中1至2种主要成分的含量。本试验通过优化色谱条件^［7-9］，采用高效液相色谱法梯度洗脱同时测定3组分的主要成分含量,具有简便可行、准确快速、全面整体的特点。

1 仪器与试药

赛默飞U3000型高效液相色谱仪、AgilentC18分析色谱柱(4.6mm×250mmID, 5μm )。黄芩苷、绿原酸、连翘苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:110715-201821、110753-201817、110821-201816);磷酸(国药集团);甲醇为色谱纯(欧姆尼);水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 系统适用性

2.1.1 色谱条件

AgilentC18分析色谱柱(4.6mm×250mmID, 5μm ),流动相B为甲醇，A相为5%甲醇的0.5%磷酸溶液;流速:1.0mL/min;洗脱程序:0～35min, A为95%～35% ,B为5%～65%;检测波长程序:0～16min为324nm;16～35min为278nm,柱温30℃；进样量10μl。

2.1.2 溶液的制备

（1）对照品溶液的制备

精密称取三种对照品适量，用50%甲醇作溶剂，制成含黄芩苷、绿原酸、连翘苷分别为134.48、19.38、9.83μg·ml^-1的对照品溶液。

（2）供试品溶液的制备

取本品1ml置50ml量瓶中,用50%甲醇溶液稀释至刻度,摇匀，作为供试品溶液。

2.2 专属性试验

精密吸取对照品、阴性溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。阴性溶液在相同位置无任何杂质峰，绿原酸、连翘苷和黄芩苷与相邻峰的分离度均>1.5,表明方法的专属性强。

2.3 稳定性试验

取供试品溶液,分别于0h、2h、4h、8h、12h注入液相色谱仪，黄芩苷、绿原酸、连翘苷RSD为1.6%、0.0%、1.0%。结果显示供试品溶液在12h内稳定。

2.4 线性关系考察

精密量取对照品储备液制备成6份不同浓度的对照品溶液,黄芩苷、绿原酸、连翘的回归方程分为:Y=0.6447X-0.1047,r=0.9994,Y=0.5451X+0.2474,r=0.9993, Y=0.0118X+0.0793,r=0.9975,线性范围分别为100.86～336.19μg·mL^-1,14.53～48.45μg·mL^-1,7.38～24.58μg·mL^-1。

2.5 重复性试验

取同一批次的样品,平行称定6份,测得黄芩苷、绿原酸、连翘苷RSD分别为0.6%、0.7%、1.1%（n=6）表明该方法的重复性良好。

2.6 加样回收率试验

精密称取同一批次样品9份,进行加样回收试验，按含量测定法测定得峰面积,并计算含量，结果见表1。

表1 样品加样回收试验

项目	取样量（ml）	样品中含量（mg）	加入量（mg）	测得量（mg）	回收率 （%）	平均值 （%）	RSD (%)
黄 芩 苷	0.5	8.52	8.41	16.96	101.67	99.68	2.0
				16.95	101.25
				16.89	100.59
			12.62	21.14	100.83
				20.96	99.52
				20.84	98.61
			4.16	12.64	100.48
				12.44	99.01
				12.28	95.20
绿 原 酸	0.5	0.71	0.71	1.41	97.89	98.89	1.5
				1.41	98.59
				1.41	98.59
			1.06	1.77	99.53
				1.77	99.06
				1.76	98.59
			0.36	1.08	102.82
				1.07	100.00
				1.06	98.59
连 翘 苷	0.5	0.26	0.22	0.45	97.78	99.27	2.0
				0.45	100.00
				0.45	100.00
			0.33	0.57	102.41
				0.55	97.89
				0.55	97.89
			0.11	0.34	100.92
				0.33	96.33
				0.34	100.92

2.7 耐用性试验

对波长、柱温、流速进行±2的调整，把调整参数后的峰面积与正常参数峰面积计算比较，所测三种含量的RSD%均小于2.0,该方法耐用性良好。

3 讨论

考虑各自最大吸收波长，兼顾绿原酸、连翘苷和黄芩苷的同时测定,在绿原酸出峰的时间窗内采用324nm波长测定,在连翘苷和黄芩苷出峰的时间窗内变换为278nm波长。

本法节省了连翘前处理需要过柱分离及蒸干的过程，既节省了时间又降低了检测成本。结果表明:方法简便、准确，专属性强。

参考文献

[1]国家中成药标准汇编.中成药地方标准上升国家标准部分, 内科肺系(一)分册〔S〕.2002 , 217.

[2] 中国药典.一部[ S] .2015, 142.

[3] 李延雪，杨立志，苏玉娟. 高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸含量［J］．中国药业，2013，22( 4) : 34

[4] 张成志. 高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸和黄芩苷的含量［J］．时珍国医国药，2008，19 ( 4): 939

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[6] 韩冰，于征帆，王博. HPLC 法测定复方芩兰口服液中连翘苷的含量［J］．黑龙江医药，2015，28( 4) : 705

[7] 杜英峰，张兰桐，靳怡然，等. 多波长RP－HPLC 法测定双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸、连翘苷[J]. 中成药，2009，31（9）：1368-1371.

[8] 刘刚，谭生健，张华，等. HPLC 法同时测定双黄连口服液中绿原酸连翘苷和黄芩苷的含量[J]. 解放军药学学报，2009，25（5）：461-463+471.

[9] 曹洪，祝业. HPLC 法测定同时测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J].中国药品标准，2007，8（2）：43.