简介：摘要目的探讨2型固有淋巴样细胞（ILC2）在特应性皮炎（AD）中的作用。方法以C57BL/6J和Rag1-/-小鼠为研究对象。C57BL/6J小鼠分为模型组和对照组，模型组小鼠两侧耳部连续14 d每日涂抹卡泊三醇（MC903）以制备AD样小鼠模型，对照组仅涂抹无水乙醇，第15天时收集小鼠外周血血清，处死小鼠后，取耳部皮肤行组织病理检查，摘取脾脏，用实时荧光定量PCR检测皮肤和脾中炎症因子表达水平，同时采用流式细胞仪检测皮肤中ILC2比例。Rag1-/-小鼠分为模型组、对照组和实验组，模型组和对照组处理及评估同C57BL/6J小鼠，实验组小鼠在涂抹MC903前2 d开始腹腔注射单克隆抗体CD90.2拮抗ILC2功能，隔2 d 1次，共计7次，每次300 μg/150 μl，其他处理同模型组，第15天时收集小鼠外周血血清，处死小鼠后，取耳部皮肤行组织病理检查，用实时荧光定量PCR检测皮肤中炎症因子表达水平，同时采用流式细胞仪检测皮肤中ILC2比例。采用两独立样本t检验进行两组间比较，单因素方差分析进行多组间比较。结果模型组C57BL/6J小鼠耳部皮肤可见明显的红肿、干燥、结痂，HE染色可见表皮厚度增加，真皮嗜酸性粒细胞浸润，血清IgE水平[（6751.016 ± 282.324）μg/L]高于对照组[（6387.038 ± 267.853）μg/L，P = 0.007），且皮肤白细胞介素（IL）-4、IL-13和干扰素γ（IFN-γ）的表达水平较对照组明显增高（P值分别为0.005、0.012，< 0.001），而IL-5差异无统计学意义（P = 0.190），脾脏IL-4、IL-5和IL-13的表达较对照组明显增高（均P < 0.001），而IFN-γ差异无统计学意义（P = 0.278）；模型组ILC2比例（5.604 ± 2.105）%较对照组（1.750 ± 1.104）%明显增高（P = 0.003）。在Rag1-/-小鼠中，模型组耳部皮肤也可见明显红肿、干燥、结痂，HE染色可见表皮厚度增加，真皮嗜酸性粒细胞浸润，模型组皮肤IL-4、IL-5、胸腺基质淋巴生成素和IL-33的表达较对照组明显增高（P值分别为0.010、0.043、0.034、0.007），而IL-13和IFN-γ差异无统计学意义（P值分别为0.274，0.697）；模型组ILC2比例（5.165 ± 2.436）%高于对照组[（0.835 ± 0.578）%，P = 0.014]；抗体拮抗Rag1-/-小鼠ILC2后，实验组小鼠皮损较模型组明显减轻，HE染色可见表皮增厚减轻，真皮嗜酸性粒细胞浸润减少，而细胞因子表达分析显示，实验组IL-4、IL-5、IL-13、TSLP、IL-33水平与模型组差异均无统计学意义（均P > 0.05）。结论ILC2参与了MC903诱导的AD样小鼠炎症反应，且该反应不依赖于适应性免疫。

简介：

简介：目的为改善染料木素的治疗效果,对其进行结构修饰。方法通过成酯、硝基化反应,在染料木素的7-位,4’-位进行修饰,得到一个硝基酯类化合物;并考察得到的化合物对MC3T3-E1细胞的促增殖作用。结果得到的化合物经核磁、质谱等结构鉴定与设计目标一致。该化合物能够显著促进MC3T3-E1细胞的增殖,且呈一定的时间、剂量依赖关系。结论染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯较母体药物更好地促进成骨细胞的增殖,为骨质疏松症治疗药物的开发提供新的参考。

简介：摘要目的探讨柚皮苷（NG）对高糖环境下MC3T3-E1细胞活力的影响及可能的分子机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞，实验分5组：对照组（正常无血清培养基）、高糖组（含25 mmol/L葡萄糖）、0.1 μmol/L +高糖组（0.1 μmol/L NG + 25 mmol/L葡萄糖）、1 μmol/L +高糖组（1 μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖）、10 μmol/L +高糖组（10 μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖）。药物干预后，采用CCK-8法检测细胞活力；实时荧光定量PCR（qPCR）法检测细胞成骨特异性转录因子（Runx2）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、蛋白激酶（Akt1）mRNA的表达；蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞碱性磷酸酶（ALP）、Akt1、IGF-1蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果CCK8检测结果显示，与对照组比较，高糖组细胞OD值（12 h：0.90±0.01比0.80±0.01，24 h：1.00±0.05比0.84±0.01，48 h：1.09±0.03比0.90±0.01）均降低，差异有统计学意义（P < 0.01）；与高糖组比较，0.1 μmol/L+高糖组细胞OD值（24 h：0.84±0.01比0.93±0.05，48 h：0.90±0.01比0.99±0.01）、1 μmol/L +高糖组和10 μmol/L+高糖组OD值（12 h：0.80±0.01比0.92±0.01、1.01±0.32，24 h：0.84±0.01比1.01±0.04、1.16±0.03，48 h：0.90±0.01比1.12±0.02、1.20±0.02）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组比较，高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA的表达水平（24 h：1.00比0.34±0.02、1.00比0.34±0.01、1.00比0.15±0.02）、（48 h：1.00比0.72±0.03、1.00比1.09±0.07、1.00比0.38±0.04）降低，差异有统计学意义（P < 0.01）。与高糖组比较，1 μmol/L +高糖组和10 μmol/L+高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA表达水平（24 h：0.34±0.02比0.62±0.09、0.64±0.05，0.34±0.01比0.77±0.03、1.02±0.07，0.15±0.02比0.24±0.08、0.4±0.09）、（48 h：0.72±0.03比1.27±0.02、1.37±0.02，1.09±0.07比2.44±0.19、2.73±0.04，0.38±0.04比0.86±0.06、1.43±0.03）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组比较，高糖组细胞ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平（48 h：1.00比0.72±0.02、1.00比0.89±0.03、1.00比0.09±0.01）均降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；与高糖组比较，0.1 μmol/L+高糖组、1 μmol/L+高糖组和10 μmol/L+高糖组ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平（48 h：0.72±0.02比1.92±0.02、2.30±0.30、3.09±0.10，0.89±0.03比1.50 ± 0.03、1.43±0.04、1.40±0.13，0.09±0.01比1.75±0.01、2.30±0.31、2.07±0.07）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论NG逆转高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力减退；同时改善高糖的抑制作用，促进MC3T3-E1细胞IGF-1、AKt-1、Runx2 mRNA和IGF-1、AKt-1、ALP蛋白的表达。

简介：目的应用胰岛素（INSU）、阿仑膦酸钠（ALEN）干预体外高糖环境下培养的MC3T3-E1，探讨胰岛素、阿仑膦酸钠对MC3T3-E1增殖及凋亡的影响。方法用DMEM培养基培养MC3T3-E1细胞并以高糖（30mmol·L^-1）、INSU（10-mol·L^-1）、ALEN（10^-7mol·L^-1）进行干预，按①对照组（NG）；②高糖组（HG）；③高糖＋胰岛素组（HG＋INSU）；④高糖＋阿仑膦酸钠组（HG＋ALEN）；⑤高糖＋胰岛素＋阿仑膦酸钠组（HG＋INSU＋ALEN）进行分组，抽取24h样本，采用对5．溴-2-脱氧尿嘧啶的嵌入法检测增殖率，应用流式细胞仪检测凋亡率。结果胰岛素和阿仑膦酸钠均可促进MC3T3-E1细胞增殖，HG＋INSU＋ALEN组促增殖作用最显著（P〈0．05），在高糖环境下成骨细胞的凋亡率对于单-加用胰岛素和阿仑膦酸钠均有降低，与对照组相比有显著差异（P〈0．05），但HG＋INSU＋ALEN组较其他组显著降低（P〈0．01）。结论INSU、ALEN可以增加MC3T3-E1细胞数量，使其凋亡率降低，INSU、ALEN对高糖环境下MC3T3-E1细胞具有保护作用。

简介：

简介：目的鉴于骨形态发生蛋白（bonemorphogeneticprotein,BMP）异源二聚体较BMP同源二聚体有更高效的诱导成骨作用,比较研究纯化的重组人BMP2/7（rhBMP2/7）异源二聚体与rhBMP2和/或rhBMP7同源二聚体在诱导细胞成骨分化上相关基因的表达变化.方法以不同浓度的3种rhBMPs作用于成骨前体细胞MC3T3-E1,检测细胞碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活性变化,比较研究成骨分化相关基因ALP、骨钙素（osteocalcin,OCN）、Ⅰ型胶原蛋白（collagentypeⅠα1,Coll）以及核心结合因子（runt-relatedtranscriptionfactor2,Runx2/corebindingfactorαl,Cbfαl）的表达变化.结果RhBMP2/7异源二聚体上调细胞ALP活性的浓度效应呈钟形曲线;其诱导细胞成骨相关基因的表达也呈类似的钟形曲线;而相应的同源二聚体则呈现浓度依赖效应递增曲线.此外,rhBMP2/7异源二聚体与rhBMPs同源二聚体相比,诱导的Runx2的基因表达变化不同于ALP、OCN或Coll基因表达,提示后3种基因的表达并不完全依赖于Runx2基因的表达转录.结论RhBMP2/7异源二聚体在诱导细胞成骨分化基因表达上仅在早期以及较低浓度范围内与相应rhBMPs同源二聚体有显著性差异;基因表达转录后,成骨相关蛋白的合成、修饰及活化程度不同更可能是造成rhBMP2/7异源二聚体与相应同源二聚体生物学活性差异的主要原因.

简介：目的：在钛－6铝－4钒（Ti－6Al－4V）合金微粒环境下观察重组成骨蛋白－1（recombinantOP－1，rOP－1）对成骨细胞的影响，为防治关节假体无菌性松动提供新的治疗途径。方法根据小鼠颅顶骨前成骨细胞亚克隆14（MC3T3－E1）中是否加入Ti－6Al－4V微粒和rOP－1，分为微粒组（5、10、15μg／mLTi－6Al－4V）、处理组（微粒组加入200ng／mLrOP－1）、阳性组（加入200ng／mLrOP－1）和对照组，检测各组24、72、120hMC3T3－E1细胞增殖能力、72h碱性磷酸酶（akalinephosphatase，AKP）、骨钙素（osteocalcin，OCN）和骨桥蛋白（osteopontin，OPN）mRNA的表达，及120h成骨细胞的矿化能力。结果①rOP－1无促进Ti－6Al－4V微粒环境下成骨细胞增殖能力，与微粒组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）；②rOP－1可提高成骨细胞分化，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）；同时逆转Ti－6Al－4V微粒抑制成骨细胞分化，与微粒组比较差异有统计学意义（P＜0．05）；③茜素红S染色后Ti－6Al－4V微粒钙结节数量随着浓度增加逐渐降低，和微粒组比较，加入rOP－1后钙结节数量呈增多趋势。结论Ti－6Al－4V微粒环境下，rOP－1无提高成骨细胞增殖能力，能提高细胞分化矿化能力，rOP－1可以作为潜在治疗关节假体无菌性松动一种方法。

简介：摘要为降低光伏电站投资建设成本，对4mm2多股铜线和6mm2多股铝合金线连接MC4插头制作样品的导电性能、温升和拉力进行了对比试验，以确定6mm2多股铝合金线是否满足替代4mm2多股铜线要求。测试MC4插头连接铜、铝合金芯线的直流电阻、温升、强度，分析插头接铜、铝合金芯线时数据变化，此次比对分析试验铜芯线和铝合金芯线样品各5组。

简介：摘要目的探讨两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路在地塞米松(DEX)诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为3组，分别为对照组、DEX组、DEX+AG490组。对照组只加入正常培养基，DEX组加入200 μmol/L的DEX培养，DEX+AG490组预先给予50 μmol/L的AG490处理后加入200 μmol/L的DEX培养。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白印迹法检测通路蛋白及凋亡蛋白的表达。组间比较采用t检验。结果对照组、DEX组、DEX+12.5、25、50、75 μmol/L的AG490的细胞存活率分别为(97.74±1.45)%、(52.05±5.50)%、(54.98±3.77)%、(70.99±4.15)%、(81.53±6.43)%、(79.16±7.35)%。表明DEX明显使成骨细胞MC3T3-E1活力降低(t＝11.364，P<0.001)，50 μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂(AG490)明显抑制了DEX对成骨细胞MC3T3-E1活力的降低作用(t＝4.928，P<0.01)。对照组、DEX组、DEX+AG490组的细胞凋亡率分别为(6.067±0.545)%、(26.233±2.631)%和(8.463±1.179)%。表明DEX明显诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡(t＝12.999，P<0.001)，经AG490处理后，DEX诱导的成骨细胞MC3T3-E1凋亡明显受到抑制(t＝10.675，P<0.001)。蛋白质印迹法(Western blot)检测正常组、DEX组、DEX+AG490组p-JAK2蛋白表达分别为1.000±0.323、2.839±0.640、0.286±0.068，p-STAT3蛋白表达分别为1.000±0.245、3.471±0.157、0.618±0.078，bax蛋白表达分别为1.000±0.083、6.571±0.405、3.048±0.905，bcl-2蛋白表达分别为1.000±0.086、0.207±0.040、0.563±0.083，cleaved Caspase-3蛋白表达分别为1.000±0.192、5.685±0.699、3.411±0.247。DEX组较对照组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显增加，bcl-2的表达明显减少(t＝4.429、14.912、11.100、23.561、14.565，P<0.05)，AG490+DEX组较DEX组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显减少，bcl-2的表达明显增加(t＝6.860、28.404、5.262、6.185、6.721，P<0.01)。结论DEX通过JAK2/STAT3信号通路，调节cleaved Caspase-3、bax、bcl-2的表达，诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡。

简介：目的对杜仲抗骨质疏松的药效成分进行初步筛选。方法采用小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外培养模型,通过MTT法测定细胞增殖,ELISA方法测定碱性磷酸酶（ALP）活性,观察杜仲中槲皮素、京尼平苷及桃叶珊瑚苷对成骨细胞增殖和分化的影响。结果槲皮素促MC3T3-E1细胞增殖的有效浓度为10-6mmol/L,桃叶珊瑚苷则为10-5mmol/L;10-4μmol/L京尼平苷在干预后4d,才逐渐显现出促进MC3T3-E1增殖作用。槲皮素（10-5、10-3mmol/L）、京尼平苷（10-3mmol/L）和桃叶珊瑚苷（10-3mmol/L）可增加MC3T3-E1ALP活性。结论槲皮素、京尼平苷和桃叶珊瑚苷可促进成骨细胞的增殖和分化,且作用强度具有浓度相关性和时间相关性,可能为杜仲抗骨质疏松的药效物质基础。