简介：摘要目的通过高加速度离心加载装置建立高重力加载模型，探讨不同高重力加载环境对成骨细胞黏附及细胞骨架的影响，并且分析淫羊藿苷对高重力加载后细胞黏附和细胞骨架的影响。方法将MC3T3-E1细胞按2×105个/cm2的密度接种于细胞培养皿中。实验共分为6组：对照组、单纯给药组、10 G加载组、10 G给药组、40 G加载组、40 G给药组。加载组应用高加速度离心加载机对细胞施行加载，连续加载3 d，每天30 min。对照组和单纯给药组暴露于正常重力情况下，其余条件与实验组无差别。给药组淫羊藿苷均采用10-7 mol/L浓度，且按预防给药的方法实验。通过茜素红染色、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性测定、CCK-8细胞增殖实验、细胞骨架鬼笔环肽染色、qPCR和Western Blot等相关分子生物学技术检测淫羊藿苷对高重力环境下成骨细胞integrin α5、integrin β1和F-actin的影响。结果所有模型均成功制备。茜素红染色：淫羊藿苷可促进成骨细胞钙化结节形成，10 G加载可促进成骨细胞矿化，而40 G加载则抑制成骨细胞的矿化。ALP活性检测：单纯给药组、10 G加载组、40 G加载组的检测OD值分别为0.246、0.331、0.163，与对照组的0.207相比，差异均有统计学意义（P<0.05）；10 G给药组和40 G给药组分别为0.373和0.180，与各自加载组的差异有统计学意义（P<0.05）。CCK-8增殖实验：单纯给药组OD值为0.650，与对照组0.551的差异有统计学意义（P=0.031）；10 G加载组和40 G加载组OD值分别为1.193和0.245，与对照组的差异均有统计学意义（P<0.05）；且10 G给药组和40 G给药组1.300和0.310，与各自加载组的差异有统计学意义（P<0.05）。鬼笔环肽染色：10 G加载细胞促进的数量增加，但细胞形态及骨架未见明显变化，40 G加载则抑制，淫羊藿苷对细胞形态无影响，但对加载损伤后的细胞有一定修复作用。QPCR和Western Blot实验结果一致证实，淫羊藿苷作用后，integrin α5、integrin β1和F-actin的mRNA和蛋白表达上调，10 G加载可促进integrin α5、integrin β1和F-actin mRNA和蛋白的表达，40 G加载则明显抑制其mRNA和蛋白的表达。结论10 G条件和淫羊藿苷干预均可促进成骨细胞的生长发育、细胞黏附及细胞骨架的稳定，而40 G则具有明显抑制作用。

简介：目的探讨体外培养的骨髓基质细胞与自体来源的生物衍生骨复合后的生长特性,为进一步研究骨髓基质细胞作为种子细胞,以及探索一种良好的支架材料提供实验依据.方法分离纯化兔骨髓基质细胞并诱导成成骨细胞后与同种异体来源的生物衍生骨复合后体外培养,并在相差显微镜和扫描电镜下观察其生长情况.结果骨髓基质细胞在生物衍生骨上贴附生长、增殖良好.结论骨髓基质细胞可作为骨组织工程的理想种子细胞,与生物衍生骨复合后可作为骨组织工程的载体.

简介：

简介：背景：研究发现,无敌丹能够抑制病变关节局部的炎症反应,保护关节软骨。目的：验证无敌丹对家兔软骨细胞活力和软骨细胞凋亡的影响及对家兔骨关节炎病变的治疗效果。方法：用含无敌丹的血清培养基培养大鼠软骨细胞,通过与溶剂对照组对比,观察无敌丹对软骨细胞活力及凋亡的影响;采用改良Hulth法构建兔膝骨关节炎模型,无敌丹给药组给予无敌丹;溶剂对照组给予生理盐水,2次/d,连续给药4周。观察无敌丹对兔膝骨关节炎的治疗作用;镜下观察关节局部的软骨细胞情况;用免疫组织化学的方法检测软骨中白细胞介素1、基质金属蛋白酶3的水平。结果与结论：无敌丹血清培养的软骨细胞凋亡率显著低于对照组;兔膝关节病理检查显示溶剂对照组软骨破坏程度较高,无敌丹组软骨破坏程度低;免疫组织化学染色显示无敌丹给药组胞质和胞外基质着色浅,阳性细胞数量少,白细胞介素1表达低;无敌丹给药组阳性表达的细胞数量少,着色浅,基质金属蛋白酶3表达被抑制。结果表明,无敌丹能够有效保护家兔骨关节炎病变部位关节软骨,减少炎症反应,对于骨关节炎有很好的治疗作用,其机制可能与抑制软骨细胞凋亡、减少细胞因子的生成及抑制基质金属蛋白酶的蛋白表达有关。

简介：

简介：目的探讨成骨细胞在细菌纤维素/聚乳酸/羟基磷灰石复合支架中的生长和增殖情况。方法将成骨细胞以5×104/ml的密度接种于细菌纤维素（BC）、细菌纤维素/聚乳酸（BC/PLA）、细菌纤维素/聚乳酸/羟基磷灰石（BC/PLA/HA）三种支架中,进行体外培养。采用MTT比色法测定1、3、5、7d的成骨细胞增殖情况;碱性磷酸酶活性测定法检测3、6、9d的碱性磷酸酶活性变化,并通过扫描电镜观察细胞在复合支架中的形态变化。结果实验组与对照组比较1、3、5、7d细胞的增殖量（OD值）有统计学差异（p〈0.05）,其中BC/PLA/HA组的OD值高于其他实验组;第3d至第9d三组细胞的ALP分泌量均呈上升趋势,各组间比较均有统计学差异（p〈0.05）;复合培养6dSEM观察可见三组材料中均有细胞的粘附,BC/PLA/HA组的细胞生长状态好于其他两组材料。结论BC/PLA/HA较BC/PLA和BC有利于成骨细胞的增殖和生长。

简介：目的观察瞢密钙片及马鹿角多肽对鼠胚成骨细胞MC3T3-E1的增殖分化作用及细胞内OPG、RANKLmRNA的表达。方法采用MEM（10％FBS）培养液培养细胞，细胞计数法描绘成骨细胞生长曲线；MTT法检测瞢密钙片（0、50、100、500、1000μg／m1）、马鹿角多肽（0、5、50、500μg／m1）和钙尔奇D对照组对鼠胚成骨细胞MC3T3-E1增殖的作用；瞢密钙片（0、50、100、500、1000μg／ml）、马鹿角多肽（0、5、50、500μg／ml）和钙尔奇D对照组干预鼠胚成骨细胞MC3T3-E172h后，比色法检测细胞内碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）的含量，RT—PCR法检测骨保护蛋白（osteoprotegerin，OPG）、核因子KB激活受体配体（receptoractivatorofNK-KBligand，RANKL）mRNA的表达。结果瞢密钙片及马鹿角多肽作用于MC3T3-El成骨细胞72h后，可促进其增殖，OD值增加（P〈0．05），增加ALP的含量，促进OPGmRNA表达，同时抑制RANKLmRNA表达。结论瞢密钙片及马鹿角多肽促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化，可能与促进成骨细胞OPGmRNA表达、抑制RANKLmRNA表达有关，从而促进骨形成，抑制骨吸收。

简介：目的探讨镉（cd）对大鼠骨组织及体外培养成骨细胞中金属硫蛋白mRNA表达的影响。方法应用皮下注射的方法对Sprague-Dawley雄性大鼠进行连续cd染毒（0—1．5mg／kgbw）12周，5d／w，收集血样、尿样及骨组织，分别测定体内镉负荷；应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨组织中金属硫蛋白（MT）基因表达；同时，应用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞，进行原代培养，并以不同浓度的ca（0～2μmol／L）作用24h以及1．0μmol／LCd作用不同时间（24～72h）后，应用RT-PCR，观察成骨细胞MTmRNA表达的变化。结果大鼠镉染毒后体内镉负荷显著增加，呈明显剂量一效应关系；镉染毒能够诱导大鼠骨组织MT基因表达，各剂量染毒大鼠骨组织MT基因表达均明显高于对照组，P〈0．05。体外实验结果同样表明，镉作用能诱导成骨细胞MT表达，并随着染镉剂量的增加，MT基因表达也明显增高，特别是在0．5μmol／L和2．0μmol／L组，和对照组相比差异有显著意义（P〈0．01）；1．0μmol／LCdCI2作用不同时间后均能诱导成骨细胞MT表达，但表达量并不随镉作用时间而出现明显改变。结论镉能诱导骨组织及体外培养成骨细胞MT表达，MT可能镉在致骨损伤中有一定保护作用。

简介：目的研究不同浓度的异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)联合应用对大鼠成骨细胞(osteoblast,OB)增殖、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性、I型胶原蛋白表达和成骨细胞成熟与矿化能力的影响。方法分离、培养新生SD大鼠乳鼠颅骨OB,分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性、免疫荧光染色法和茜素红染色法检测,观察不同浓度INH+RFP[(10+3)μg/mL、(20+6)μg/mL、(30+12)μg/mL、(40+24)μg/mL、(50+48)μg/mL]对成骨细胞增殖、ALP活性、Ⅰ型胶原蛋白表达以及矿化能力的影响。结果与对照组相比,当INH+RFP的浓度在(20+6)μg/mL及以上时,抑制大鼠OB增殖、I型胶原合成、使ALP活性及矿化能力显著下降(P<0.05),且均随着浓度增加而加强抑制作用。结论INH、RFP联合用药较低浓度对成骨细胞有抑制作用,因此,骨关节结核病灶清除术后,局部用药应该严格控制药物浓度。

简介：目的研究不同强度的磁性附着体静磁场对成骨细胞矿化能力的影响。方法对体外培养的SD大鼠成骨细胞分别进行12.5、125、250mT的静磁场加载1、3、5、7d,考马斯亮篮法测定碱性磷酸酶（ALP）活性;静磁场加载21d后,茜素红S钙染法检测矿化结节并计数。结果静磁场加载1d后,各磁场处理组和对照组相比,ALP活性无明显差异（P〉0.05）。静磁场加载3d后,125mT和250mT磁场组ALP活性和对照组差异有统计学意义（P〈0.05）;静磁场加载5、7d后,各磁场组ALP活性与对照组差异有统计学意义（P〈0.01）,而且125mT和250mT磁场组ALP活性高于12.5mT磁场组。静磁场加载21d后,各磁场组矿化结节计数高于对照组。结论在本实验条件下,磁性附着体静磁场可以促进成骨细胞的ALP活性和矿化能力。

简介：摘要目的研究大豆异黄酮对体外培养成骨细胞增值及分化等。方法大豆异黄酮加入新生SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中。用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、用放免法测定OB骨钙素(BGP)含量,以反映OB的分化状况。结果用大豆异黄酮体外培养大鼠成骨细胞MTT吸光值明显增加,成骨细胞ALP活性显著升高,成骨细胞BGP分泌显著增加(p＜0.05)。结论大豆异黄酮具有促进成骨细胞增殖分化的作用,其作用程度低于雌激素。大豆异黄酮的弱雌激素作用可能是其防治绝经后骨质疏松的重要机制。

简介：摘要目的探讨慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬水平及对细胞凋亡的影响。方法雄性4周龄Sprague-Dawley（SD）幼鼠40只，按照随机数字表法分为正常对照组（蒸馏水灌胃）和CRF组（腺嘌呤150 mg·kg-1·d-1灌胃），连续灌胃6周后处死幼鼠，X线测量胫骨长度，组织学切片测量比较胫骨生长板宽度，应用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测生长板软骨细胞凋亡率；体外培养正常对照组和CRF组幼鼠胫骨生长板软骨细胞至第3代，应用TUNEL技术检测软骨细胞凋亡率，应用荧光双染技术观测软骨细胞线粒体与自噬溶酶体共定位情况，应用Western印迹法检测线粒体标志蛋白线粒体外膜转位酶（translocase of the outer mitochondrial membrane-20，Tom-20）和自噬标志轻链蛋白-3（light chain-3，LC-3）表达情况，应用透射电镜观察软骨细胞线粒体自噬情况。结果与正常对照组相比，CRF组幼鼠胫骨长度较短[（27.32±5.81）mm比（35.43±3.61）mm，t=5.226，P<0.001]，生长板相对宽度较窄（0.56±0.19比1.00±0.21，t=6.744，P<0.001），软骨细胞凋亡率较高（17.2%±4.8%比5.1%±3.4%，t=6.505，P<0.001）。CRF组体外培养生长板软骨细胞凋亡率高于正常对照组（11.8%±6.2%比3.1%±1.2%，t=4.357，P<0.001），荧光双染技术结果显示CRF组软骨细胞线粒体与自噬溶酶体出现明显的共定位现象，CRF组软骨细胞LC-3蛋白（t=8.944，P<0.001）及Tom-20蛋白（t=6.708，P<0.001）表达均少于正常对照组，电镜结果显示CRF组软骨细胞内出现较多的自噬囊泡吞噬线粒体并降解的现象。结论CRF幼鼠胫骨生长板软骨细胞线粒体自噬水平出现增高现象，导致线粒体减少，引起软骨细胞凋亡、数量减少，最终导致胫骨发育不良。

简介：目的：探讨补肾健脾中药复方对细胞凋亡过程中非折叠蛋白反应的作用机制。方法：将新西兰大白兔9只随机分为中药组、西药组、空白组,每组3只。中药组、西药组分别用中药复方提取液、雌二醇混悬液灌胃,空白组以同等量的蒸馏水灌胃,1个月后制备含药血浆。选用1d龄SD大鼠获取原代的成骨细胞体外培养,中药组、西药组分别给予对应的含药血浆培养,正常空白组以及凋亡空白组给予空白组血浆培养。24h后分别检测GADD34、ERO1、IRE-1等凋亡蛋白的光密度值（OD）。结果：与凋亡空白组相比,中药组、西药组GADD34、ERO1蛋白表达降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。西药组比中药组更能显著降低ERO1蛋白的表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：补肾健脾中药复方有可能通过非折叠蛋白反应介导的细胞凋亡途径对成骨细胞进行调控,并能在一定程度上抑制细胞的凋亡。

简介：背景：酒精性股骨头坏死的病理过程主要是酒精中毒引起的骨细胞脂肪变性、坏死、沉积及骨髓间充质干细胞分化成骨细胞、破骨细胞过程异常导致的骨代谢紊乱引起骨质疏松,进而造成股骨头软骨下骨小梁塌陷,最终导致股骨头缺血性坏死。目的：就成骨细胞、破骨细胞与酒精性股骨头坏死的关联性做系统性综述。方法：第一作者应用计算机检索2016年5月前PubMed数据库、中国期刊全文数据库的相关文章,英文检索词＂osteoblast,osteoclast,alcohol-inducedONFH,bonemetabolism＂;中文检索词＂成骨细胞,破骨细胞,酒精性股骨头坏死,骨代谢＂。共检索到133篇相关文献,38篇文献符合纳入标准。结果与结论：在骨代谢过程中,成骨细胞的数量与活性影响、调控破骨细胞的数量与活性,而破骨细胞的数量与活性也会反作用于成骨细胞。不断深入了解探索成骨细胞、破骨细胞及其之间的作用机制,不仅能够对酒精性股骨头坏死的发病及修复机制有更为详尽的认识,更能够对其他相关骨代谢疾病的预防与靶向治疗提供新的思路与策略。

简介：背景：细胞共培养技术是在体外条件下将细胞与另一种细胞共同培养。对于成骨细胞和脂肪细胞横向分化研究多采用体外条件下成脂诱导液诱导成骨细胞发生横向分化，而忽略了体内环境中细胞互相作用的因素。目的：探讨在Transwell间接共培养条件下成熟脂肪细胞诱导成骨细胞成脂横向分化的能力。方法：①选取小鼠成纤维样3t3-l1前体脂肪细胞进行成脂诱导为成熟脂肪细胞；②实验分组：A组接种成熟脂肪细胞(Transwell间接共培养体系下室)，B组接种小鼠成骨样细胞mc3t3-e1(以1∶4比例接种到Transwell间接共培养体系上室)，C组单独培养的小鼠成骨样细胞mc3t3-e1；③检测指标：分别在7，14，21d倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，检测各组细胞三酰甘油相对含量、成脂目的蛋白PPARγ2表达，并进行油红O染色以及茜素红染色观察；以0，24，36h为截点检测B组与C组细胞增殖抑制率的变化。结果与结论：①培养2周时，3t3-l1细胞由长梭形变为圆形，胞质内脂滴增多呈亮圆形，油红O染色鉴定后备用；②细胞形态：B组共培养7d时呈长梭形，未见透明脂滴；14d时胞质内出现黑色颗粒及小圆形脂滴；21d细胞形态由长梭形变为椭圆形或圆形，脂滴变大；③茜素红染色：7，14，21d时B组细胞呈染色区减少的趋势，C组细胞无明显变化均呈大片着色区；④油红O染色：7，14，21d时，B组细胞染色区呈递增趋势且与时间成正比，C组细胞染色阴性且无明显变化；⑤三酰甘油：B组细胞三酰甘油聚集量呈递增趋势且与时间成正比，B组组间及与A组相比差异有显著性意义(P<0.05)，C组无明显变化(P>0.05)；⑥MTT抑制率：B组细胞增殖抑制率与时间成正比，与C组差异有显著性意义(P<0.05)；⑦Westernblot实验：B组细胞PPARAγ2蛋白表达量呈递增趋势且与时间成正比，与A、C组相比，差异均有�

简介：目的：研究成年大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平的跨膜转运，为人工种植体给药系统以及牙根管给药系统的设计提供实验依据。方法：将大鼠牙槽骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞与含有药物（20ug／ml、100ug／ml的硝苯地平）的磷酸盐缓冲液（PBS）共同孵育1、3、5、10、15、20min后，收集各时间点细胞，用高效液相色谱法测定细胞内药物含量，考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。用细胞内药物含量与细胞蛋白的比值作为观察药物转运量的检测指标。结果：硝苯地平可以被成骨细胞及MC3T3-E1细胞转运至细胞内。（1）转运量与细胞种类有关。浓度相同时，成骨细胞在各时间点的转运量明显均大于MC3T3-E1细胞的转运量（P〈0．01）。（2）转运量与药物浓度有关。药物浓度增高，转运量越大（P〈0．05）。（3）转运量与时间有关。结论：大鼠牙槽骨来源成骨细胞及MC3T3-E1细胞可以跨膜转运硝苯地平。转运量与药物浓度、细胞种类、孵育时间有关。从而初步验证了人工种植牙全身给药系统的可行性。

简介：目的：探讨葛根素对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白的影响。方法：采用血清药理学方法制备葛根素含药血清,分为葛根素组、阳性对照组和阴性对照组。从SD大鼠乳鼠颅骨获取成骨细胞,分别用含药血清培养分离得到的成骨细胞。采用CCK-8检测成骨细胞增殖、酶联免疫吸附试验检测骨形态发生蛋白2（BMP-2）的表达;采用微量酶标法检测碱性磷酸酶的活性。结果药物作用24、48和72h后,葛根素组D值显著高于阴性对照组（P〈0.05）,且显著低于阳性对照组（P〈0.05）。随着时间的增加,葛根素组和阳性对照组D值在药物作用48h达到最高,至72h后有下降趋势。药物作用3d和7d后,葛根素组BMP-2表达水平均显著高于阴性对照组（P〈0.05）,且显著低于阳性对照组（P〈0.05）。药物作用3d和7d后,葛根素组BMP-2表达水平均显著高于阴性对照组（P〈0.05）,且显著低于阳性对照组（P〈0.05）。药物作用3d和7d后,葛根素组碱性磷酸酶活性均显著高于阴性对照组（P〈0.05）,且显著低于阳性对照组（P〈0.05）。结论葛根素可能通过诱导BMP-2表达促进增殖,活化碱性磷酸酶活性促进生物矿化。

简介：目的：研究不同强度的静磁场加载对成骨细胞ALP活性的影响，探索磁力正畸的最佳磁场强度，为临床合理应用静磁场提供试验依据。方法：采用静磁场加载装置，对体外培养的成骨细胞分别在0mT、8mT、50mT和160mT的磁场强度下给予24h、48h和72h的静磁场加载，利用IFCC法检测静磁场加载后成骨细胞ALP活性的变化。结果：8mT、50mT和160mT的静磁场作用24小时、48小时和72小时后，与对照组相比，成骨细胞碱性磷酸酶活性增加，其中以50mT组的碱性磷酸酶活性增加最多。结论：静磁场可以增加成骨细胞的碱性磷酸酶活性，促进成骨细胞成骨；不同强度的静磁场的促成骨作用不同，50mT的静磁场有更好的促成骨作用，在临床应用时应注意选择静磁场的强度。

简介：目的：本研究旨在观察雌激素对绝经妇女牙槽成骨细胞细胞增殖和活性、成骨分化、骨保护素（osteoprotegerin）和核因子κB受体（receptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKL）的影响,为绝经妇女的牙周和种植治疗提供参考。方法：经患者知情同意,收集女性志愿者（年龄63-72岁）的牙槽骨,进行体外培养,获得牙槽成骨细胞。用不同剂量的17β-雌二醇（0.01nM、0.1nM和1nM）处理后,通过MTT和细胞计数、碱性磷酸酶活性、实时定量聚合酶链反应、vonKossa实验和酶联免疫吸附实验分别检测绝经妇女牙槽成骨细胞的增殖和活性、成骨分化、OPG和RANKL表达水平。结果：17β-雌二醇处理后,绝经妇女牙槽成骨细胞的细胞增殖和活性、碱性磷酸酶活性、骨钙素水平和矿化能力都明显增高,且具有17β-雌二醇浓度依赖性。同时,随17β-雌二醇剂量的增加,OPG表达升高,而RANKL的水平下降,OPG/RANKL比值明显升高。结论：17β-雌二醇可以增强绝经妇女牙槽成骨细胞的增殖和活性、促进成骨、改善牙槽骨再生的微环境,为绝经妇女的牙周骨再生治疗提供了重要参考。

简介：目的：应用SD大鼠下颔骨来源的原代成骨细胞，观察成骨细胞对甲硝唑和替硝唑的转运，探讨人工种植牙给药的影响及可行性。方法：将原代培养的新生鼠成骨细胞（newbornrat’sosteoblast，N）和成年鼠成骨细胞（adultrat’sosteoblast，A）与溶于PBS的药物共同孵育，分别于1，3，5，10min后，弃去细胞外液，收集各时间点细胞悬液，用高效液相色谱法测定细胞内药物量，用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。结果：（1）高效液相色谱法可以准确测定2种药物的量。（2）2种成骨细胞均可将甲硝唑和替硝唑转运至细胞内。结论：成骨细胞具有转运硝基眯唑类药物的能力，证实了人工种植牙给药的可行性。