简介：目的：构建含解耦联蛋白2（UCP2）-3’非翻译区（UTR）序列的野生型和突变型质粒的双荧光素酶报告基因载体．探讨微小RNA（miR）-15b对UCP2基因表达的调控作用。方法：应用生物信息软件预测miR-15b的靶基因，分别将预测靶基因UCP2的3’UTR及其突变体克隆到荧光素酶载体DsiCHECK-2骨架中，构建UCP2野生型和突变型质粒。并采用测序方法鉴定DsiCHECK-2-UCP2载体是否构建成功。将UCP2野生型和突变型质粒分别与miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照在293T细胞中共转染。通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-15b对UCP2基因表达的调控作用。结果：测序鉴定证实psiCHECK-2-UCP2双荧光素酶报告基因载体构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示转染UCP2野生型和UCP2突变型报告基因的293T细胞过表达miR-15b后，UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显下降．下调31％（P=0．003），过表达miR-15b抑制剂后，UCP2野生型报告基因的荧光素酶活性明显增加，上调46％（P=0．01）。而miR-15b模拟物、miR-15b模拟物正常对照、miR-15b抑制剂、miR-15b抑制剂正常对照对UCP2突变型的表达均无明显影响（P〉0．05）。结论：UCP2是miR-15b直接作用的靶基因，且miR-15b结合于UCP2基因3’UTR区域．转录后水平对UCP2有直接的抑制作用。

简介：目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc＋亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL（fluc）SN在脂质体介导下＂乒乓＂转染GP＋E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性。结果经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP＋E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶。结论成功构建了重组质粒pL（fluc）SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法和平台。

简介：生物发光标记以其可视化,便捷,快速,灵敏,可用于活体研究等诸多优点越来越多地应用于科学研究中。本研究通过CaCl2方法将实验室构建的带有青海弧菌荧光素酶基因luxAB的重组质粒导入大肠杆菌Top10中,利用酶切和核酸电泳检测荧光素酶基因的存在,利用SDS-PAGE检测荧光素酶表达的情况,然后对其表达条件进行优化。单因素试验结果表明：在培养基初始pH值6.0,癸醛体积分数1.25‰,接种量1%,IPTG浓度0.1mmol/L,装液量50mL/150mL,温度37℃条件下,重组菌的发光度最大,即表达量最高。正交试验结果表明：当pH6,IPTG浓度0.08mmol/L,接种量1.2%,温度36℃时重组大肠杆菌表达情况最好,发光度达1262.7。本研究中的重组大肠杆菌为在益生菌等食品微生物中的应用提供技术依据。

简介：目的：对炎症细胞因子TNF-α及IFN-γ刺激下，人NOX1基因的表达调控进行初步分析。方法：将NOX1基因5′-端上游序列连接到无启动子的PGL3-BASIC质粒，构建了PGL3-BASIC／NOX1报告质粒。PGL3-BASIC／NOX1质粒转染A549细胞，用TNF-α、IFN-γ刺激12h，双荧光素酶报告基因系统检测基因表达情况。结果：克隆的NOX1片段具有较强的启动子活性，在TNF-α和IFN-γ共同刺激下，转染报告基因的A549细胞萤光素酶活性与对照相比有明显的增高（约4．3倍）。分析显示NOX1基因5′端上游序列片段含有NF-KB结合位点，提示细胞因子刺激的荧光素酶表达增强可能与NF-KB位点激活相关。结论：NOX1基因表达水平明显受到炎症细胞因子的调控，提示该基因可能参与机体免疫防御（特别是上皮细胞免疫防御），值得进行深入研究。

简介：荧光素钠用于眼底荧光血管造影（FFA）是当代眼科诊断眼科疾病常用的、重要的检查方法之一。此项检查能直接反映活体视网膜大血管至毛细血管水平的生理与病理情况，对眼底病变的诊断、鉴别诊断、治疗选择、预后的推断、指导光凝治疗及预测视力等方面均有很大的帮助。现将我院2004—01／2008—06以来所做的2620例眼底荧光血管造影出现的9例不良反应报告如下。

简介：摘要本实验通过设计AQP-1启动子引物，提取乳腺癌细胞的基因组，利用PCR技术扩增出AQP-1基因的启动子序列，通过酶切、连接到荧光素酶报告基因载体--pGL-3basic上，通过荧光素酶活性检测（Luciferase活性分析）分析AQP-1启动子的活性。

简介：摘要目的构建稳定表达荧光素酶基因（lux）的产酸克雷伯菌，旨在更直观地观察产酸克雷伯菌（K. oxytoca）在宿主体内的分布以及评估不同杀菌方法的效果。方法扩增pBAV1k-T5-Lux质粒的荧光素酶基因簇（Lux A/B/C/D/E），构建含有Lux A/B/C/D/E基因簇的pBBR1质粒（pBBR1-lux），并获得能够表达荧光素基因基团的大肠埃希菌（E. coli-pBBR1-lux）。将pBBR1-lux质粒电转化至产酸克雷伯菌感受态细胞，经荧光强度鉴定及菌株的3次传代，筛选能够稳定表达lux基因的产酸克雷伯菌（K. oxytoca-pBBR1-lux）。结果连接成功的环状质粒产物命名为pBBR1-lux。与大肠埃希菌对照株相比，含E. coli-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值显著升高[15 345（14 676，18 654） vs. 63（60，82）]，差异具有统计学意义（t = 21.14、P = 0.035）。K. oxytoca-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值[399 303（265 245，617 192）]显著高于产酸克雷伯菌对照菌株[83（63.5，86.75）]，差异具有统计学意义（t = 7.07、P = 0.014）。E. coli-pBBR1-lux和K. oxytoca-pBBR1-lux均能够在Veritas微孔板光度计和小动物成像仪上检测到Luminesence荧光信号。将所得菌株按照1︰10稀释6个梯度，荧光值检测结果显示，Luminesence值随菌落浓度降低而下降。多次传代后pBBR1-lux能够在产酸克雷伯菌中稳定表达荧光素酶，不同理化杀菌方法对产酸克雷伯菌杀菌效果不同，紫外线和84消毒液（10%）是最有效的杀灭产酸克雷伯菌方法。结论本研究获得了可被微孔板光度计和小动物成像仪检测到的稳定表达荧光素酶的K. oxytoca-pBBR1-lux。

简介：摘要目的探讨糖尿病虹膜病变在荧光素虹膜血管造影(IFA)联合荧光素眼底血管造影(FFA)影像中的特征。方法采用横断面研究，纳入2013年5月至2020年5月在河南省立眼科医院接受IFA联合FFA检查的增生型糖尿病视网膜病变(PDR)合并糖尿病虹膜病变(DI)患者44例65眼，包括非增生性糖尿病虹膜病变(NPDI)组和虹膜红变组。所有患者均行视力、眼压、裂隙灯显微镜、IFA联合FFA检查。应用IFA检查观察2个组虹膜影像特征和前房内荧光素消退时间，应用FFA检查观察2个组视网膜影像特征和视盘新生血管发生率。为避免患者对侧眼IFA检查时间存在统计误差，仅对双眼患者的单眼数据进行分析。结果IFA影像显示30例50眼为NPDI，14例15眼为虹膜红变。NPDI组前房内荧光素消退时间为(3.37±0.11)min，明显短于虹膜红变组的(6.02±0.29)min，差异有统计学意义(t＝8.541，P<0.001)。NPDI组和虹膜红变组FFA检查均见视网膜新生血管性强荧光。NPDI组视盘新生血管发生率为20%(6/30)，明显低于虹膜红变组的50%(7/14)，差异有统计学意义(P＝0.04)。结论糖尿病虹膜红变可以通过IFA动态的影像特征和前房内荧光素消退时间来确诊，PDR合并视盘新生血管需IFA联合FFA检查来评估。

简介：摘要目的构建一种能够验证内部核糖体进入位点的双荧光素酶报告载体，为验证内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site, IRES)活性提供了方法。方法以双荧光素酶报告基因载体psiCHECK-2为基础，将发卡结构插入到海肾荧光素酶(R-Luc)基因与萤火虫荧光素酶(F-Luc)基因之间，构建载体psiCHECK-IRES。为了验证载体是否有效，通过同源重组技术将Encephalomyocarditis virus(EMCV)的IRES序列插入到psiCHECK-IRES载体的发卡结构与F-Luc之间，形成载体psiCHECK-IRES-EMCV。以psiCHECK-2质粒做模板建立F-Luc与R-Luc的扩增标准曲线。将psiCHECK-IRES与psiCHECK-IRES-EMCV质粒转染BHK-21细胞，利用RT-qPCR检测F-Luc与R-Luc的拷贝数；将psiCHECK-IRES与psiCHECK-IRES-EMCV质粒分别转染BHK-21细胞，24 h后利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果经过测序证实带有发卡样结构的双荧光素酶表达载体psiCHECK-IRES的载体序列。RT-qPCR结果显示F-Luc与R-Luc mRNA的拷贝数大致相同，证明未出现异常的单顺反子转录本，避免F-Luc读数出现假阳性；插入EMCV IRES的psiCHECK-IRES-EMCV载体表达的F-Luc/R-Luc比值是空载体的53.35倍，证明EMCV的IRES序列能够在构建的载体上起始F-Luc基因的表达。结论本研究构建了可用于验证病毒或者细胞依赖IRES表达的双荧光素酶报告载体psiCHECK-IRES。

简介：文章综述了荧光素类衍生物及罗丹明类衍生物荧光探针及其应用.

简介：

简介：摘要目的探讨儿童眼底血管造影荧光素静脉注射的最佳剂量。方法回顾性病例研究。分析郑州大学附属儿童医院2019年10月至2020年5月行全麻下荧光素眼底血管造影的2月龄~9岁儿童68例的临床资料。患儿分为3组：低剂量组，12例检查荧光素钠剂量为0.025 ml/kg、中剂量组35例检查剂量0.05 ml/kg及高剂量组21例检查剂量0.1 ml/kg。观察检查结果照片清晰度、亮度及有无前房及结膜囊荧光素钠渗漏。结果低剂量组中无前房及结膜囊渗漏，中剂量组中前房及结膜囊渗漏者7例，占20.0%，高剂量组中全部出现前房及结膜囊渗漏，3组间差异有统计学意义(χ2＝17.672，P<0.001)；同一时间点眼底照片亮度，低剂量组明显偏暗，中剂量组与高剂量组相比无明显差别。结论中剂量组(0.05 mg/kg)为儿童眼底荧光血管造影最佳剂量。

简介：摘要目的探讨荧光素钠眼底血管造影前、中、后的护理干预，提高护理质量，预防不良反应。方法选择在我科住院治疗做荧光素眼底血管造影患者48例，通过造影前心理干预、饮食干预和常规准备，造影中耐心倾听患者的主诉和观察不良反应发生情况，造影后促进造影剂的排泄和潜在风险的干预,及时采取有效的措施。结果48例患者均顺利完成检查，造影效果良好，仅3例发生轻度不良反应。结论造影前充分的准备，造影中密切的观察，造影后有效的指导，可促进检查的顺利进行，提高安全性，减少不良反应的发生，提高患者的依从性。

简介：1纤维素酶及其作用机制纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖一组酶的总称.的纤维素酶分为CI酶、CX酶和纤维二糖酶.CI酶主要作用于天然纤维素,使之转变为非结晶的纤维素.CX酶又分为CX1酶和CX2酶两种.

简介：摘要目的分析超广角荧光素眼底血管造影(UWFA)下眼底正常眼周边视网膜的荧光特征。方法采用横断面研究方法，纳入2016年7月至2019年1月于武汉大学人民医院行常规UWFA检查的受试者95例190眼，其中男94眼，占49.47%，女96眼，占50.53%；轻微白内障72眼，占37.89%，中低度近视60眼，占31.58%，主观性视物困扰58眼，占30.53%。根据UWFA检查周围视网膜荧光特征是否涉及视网膜血管将其分为血管相关特征和非血管相关特征2类。根据年龄将受试者分为≤40岁组和>40岁组，比较2个组各种特征的差异。结果周边视网膜荧光非血管特征包括均匀高荧光158眼，高低荧光混杂边界82眼，椒盐状高荧光24眼，局部斑驳高荧光21眼，分别占83.16%、43.16%、12.63%和11.05%。周边视网膜荧光血管相关特征包括周边无血管区92眼，血管跨过锯齿缘66眼，微血管瘤60眼，晚期荧光素轻微渗漏56眼，微血管扩张30眼，分别占48.42%、34.74%、31.58%、29.47%和15.79%。>40岁组周边视网膜血管跨过锯齿缘眼数百分比为19.61%(20/102)，明显低于≤40岁组的52.27%(46/88)，微血管瘤及微血管扩张眼数百分比分别为43.10%(44/102)和19.61%(20/102)，明显高于≤40岁组的18.23%(16/88)和11.36%(10/88)，差异均有统计学意义(χ2＝22.235、10.451、9.259，均P<0.01)。结论UWFA揭示眼底正常眼周边部视网膜4个非血管荧光特征和5个血管荧光特征。年龄可能对周边视网膜血管跨过锯齿缘、微血管瘤及微血管扩张荧光特征产生影响。

简介：采用UV光谱法、荧光光谱法、双倒数法,在pH=7.40的缓冲溶液中系统研究小分子荧光素与β-环糊精的包合作用.摩尔比法确定小分子荧光素与β-环糊精的包合比n_（β-CD）：n_（FL）=1∶1,表观摩尔吸光系数ε=6.30×10~4L/（mol·cm）.双倒数法确定结合常数K~Θ18℃=7.21×10~5L/mol.热力学分析方法计算得到：（1）Δ_rH_m~Θ=7.93×10~4J/mol,Δ_rH_m~Θ为正值,说明包合作用吸热;（2）Δ_rG_m~Θ291.15K=-3.27×10~4J/mol,推测β-环糊精与荧光素的包合作用有自发进行的可能;（3）Δ_rS_m~Θ291.15K=384.68J/（mol·K）,由此可知,β-环糊精与荧光素的相互作用为熵所驱动.并用傅里叶变换红外光谱仪和X射线衍射仪对包合物进行了表征.

简介：综述了仿酶在木素降解中的应用,包括铁卟啉、锰卟啉、金属酞菁、GIF体系、系夫碱、铜-胺配合物以及双核金属络合物。研究表明,这些仿酶化合物和仿酶体系能有效地降解木素。

简介：摘要目的探讨血清血管紧张素转换酶异常在疾病诊断中的临床意义。方法收集血清血管紧张素转换酶异常的患者资料进行分析处理，ACE测定方法为酶法。结果1053例血管紧张素转换酶异常的患者，其中升高的1020例ACE为122.4±21.5U/L,血管紧张素转换酶降低的33例ACE为2.3±1.1U/L。结论血清血管紧张素转换酶异常，对一些疾病的诊断、治疗、监测具有重要的临床价值。

简介：摘要目的对聚合酶链反应（FQ-PCR）检测乙型肝炎病毒进行分析，了解其临床应用价值。方法用中山医科大学达安基因诊断中心设计的HBV-FQ-PCR试剂盒对101份临床血清标本同时进行PCR荧光定量和ELISA肝炎标志物检测，对检测结果进行分析。结果经过FQ-PCR检测，24份HbsAgHbeAgHbcAb都阳性的标本，其血清HBV-DNA也全部阳性，HBV-DNA拷贝数范围在1.4×105-7.0×109/ml之间；32份HbsAgHbeAbHbcAb都阳性的标本，阳性率为46.9%，HBV-DNA拷贝数范围在0-8.1×107/ml之间；14份HbsAb阳性的标本，阳性率为7.1%，HBV-DNA拷贝数范围在0-5.0×104/ml之间；18份全阴性的标本，阳性率为5.6%,HBV-DNA拷贝数范围在0-4.9×105/ml之间。结论FQ-PCR定量检测HBV-DNA灵敏度，特异性较高，能基本反映乙肝病毒在体内的真实复制情况，具有较高的临床应用价值。

简介：摘要目的在pMDT-18克隆质粒载体的基础上，构建实用型的能够稳定转染甲型流感病毒RNPs并且可体外定量检测的RNA聚合酶I荧光报告系统。方法设计并人工合成人RNA聚合酶I启动子、小鼠终止子序列及毒株A/Puerto Rico/8/34的NP基因的UTR，利用嵌合PCR方法将绿色荧光蛋白（eGFP）基因与上述元件体外连接，形成小鼠终止子-3’UTR-eGFP-5’UTR-人RNA聚合酶I启动子报告元件，将报告元件克隆至不携带任何启动子的pMDT-18质粒载体中，构建实用型RNA聚合酶I荧光报告质粒，转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞，观察荧光表达及测定相对荧光度。结果该系统在转染HeLa细胞后，无任何荧光产生，而转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞后24 h、36 h、48 h和60 h均有荧光产生，强度随时间逐渐增强。结论成功构建了实用型RNA聚合酶I荧光报告系统，有助于提高流感病毒反向遗传系统的拯救效率、研究流感病毒聚合酶功能以及探索UTR多态性对特定基因的复制或转录的影响机制，为流感工作者在病毒分子机制领域的研究搭建了可靠的技术平台。