简介:摘要目的针对猫对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的高度易感性,筛选猫主要组织相容性复合物I类(major histocompatibility complex class I,MHC I)分子FLA-K*00701呈递SARS-CoV-2来源的多肽,并探索复合物制备方法,为研究猫感染SARS-CoV-2的T细胞免疫特征打下基础。方法对可能与FLA-K*00701具有亲和力的SARS-CoV-2来源多肽进行预测并合成。采用稀释复性法,使猫白细胞抗原(feline leukocyte antigen,FLA)I类多肽复合物在体外合适环境下复性,纯化复合物后,用坐滴蒸汽扩散技术筛选晶体的生长条件,X射线衍射区分收集的蛋白结晶是否为晶体。结果成功筛选到一条与FLA-K*00701具有高度结合能力的SARS-CoV-2来源多肽,并得到高纯度FLA-K*00701蛋白,初步筛选得到FLA多肽复合物晶体,X射线衍射分辨率为2.7Å。结论首次在SARS-CoV-2易感动物猫中筛选到与其FLA I具有高度亲和力的多肽,并得到高分辨率的复合物蛋白晶体,本研究为进一步探索猫抵抗SARS-CoV-2的细胞免疫机制及SARS-CoV-2多肽疫苗的研发提供有价值的参考。
简介:摘要目的探讨他莫昔芬、来曲唑、甲地孕酮抑制子宫内膜癌RL95-2细胞生长的机制。方法体外培养人子宫内膜癌RL95-2细胞(购于中国科学院细胞库),用不同浓度的他莫昔芬、来曲唑、甲地孕酮处理细胞,并分别设置空白对照组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞的增殖活性,采用细胞周期及凋亡试剂盒流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测药物对细胞内磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达的影响。对比各组细胞的增殖活性、周期分布、细胞凋亡及p-AKT蛋白表达情况。结果CCK-8法检测结果显示,经不同浓度他莫昔芬、来曲唑、甲地孕酮作用后,各药物组的细胞增殖情况与阴性对照组比较均受到明显抑制,且随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(P<0.05)。流式细胞周期分析显示,与空白对照组比较,他莫昔芬组G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高(P<0.05);甲地孕酮组G0/G1期细胞比例下降,S期细胞及G2/M期比例升高(P<0.05);来曲唑组各期细胞比例与空白对照组比较,差异未见统计学意义(P>0.05)。凋亡实验结果显示,甲地孕酮组、来曲唑组及他莫昔芬组细胞凋亡率高于空白对照组(P<0.05),且甲地孕酮组凋亡率高于来曲唑组、他莫昔芬组(P<0.05)。以AKT的磷酸化程度作为衡量PI3K/AKT信号通路的活性指标,结果显示,他莫昔芬组、来曲唑组、甲地孕酮组的细胞内p-AKT蛋白表达水平均达到有效抑制,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论适宜浓度的他莫昔芬、来曲唑及甲地孕酮均可抑制人子宫内膜癌RL95-2细胞增殖,促进细胞凋亡,他莫昔芬及甲地孕酮能够改变细胞周期分布,且3种药物发挥上述作用可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路活化而实现。
简介:摘要目的探讨来那度胺(LEN)联合替莫唑胺(TMZ)对TMZ耐药性人脑胶质母细胞瘤系U251/TR细胞增殖、侵袭、耐药性及O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因表观遗传修饰的影响。方法将前期应用分步诱导法成功构建的U251/TR细胞分为二甲基亚砜(DMSO)组、LEN组、TMZ组及LEN+TMZ组,其中DMSO组不进行任何药物干预,LEN组、TMZ组、LEN+TMZ组分别按LEN 100 μmol/L、TMZ 200 μmol/L、LEN 100 μmol/L+TMZ 200 μmol/L浓度处理U251/TR细胞(给药1次/24 h)。处理后24、48、72、96 h时,采用磺酰罗丹明B比色分析法检测细胞增殖率;处理后96 h时,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞增殖周期,采用Western blotting实验、免疫组化染色、免疫荧光染色检测细胞中MGMT水平,采用RT-PCR法检测细胞中MGMT mRNA水平,采用甲基化特异性PCR检测细胞中MGMT基因启动子区甲基化情况。结果处理后24、48、72、96 h时,LEN+TMZ组的细胞增殖率较TMZ组、LEN组、DMSO组均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理后96 h时,LEN+TMZ组的穿膜细胞数较其他3组均明显减少,G0/G1期细胞比例较其他3组均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);TMZ组及LEN+TMZ组细胞中MGMT蛋白、mRNA水平较LEN组、DMSO组均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);TMZ组及LEN+TMZ组中胞浆内MGMT表达呈强阳性或中等阳性的细胞数量较LEN组、DMSO组明显更少,MGMT荧光强度(+)较LEN组(+++)、DMSO组(+++)明显减弱。各组细胞中MGMT基因启动子区均为未甲基化状态。结论LEN单药对U251/TR细胞的增殖、侵袭无明显抑制作用,而LEN联合TMZ能抑制该细胞的增殖、侵袭并逆转其耐药性,但其机制与MGMT基因启动子区甲基化状态改变无关。
简介:摘要:由于中国汉文字,历史十分悠久,发展过程中异体字、古今字繁多,讹变、省声、省形等现象层出不穷,各个时期有、又对客观事物的认识不同,导致有些汉字在造字法上争议颇多,本篇论文便捡取其中个别字简述其造字法。