简介：百草枯（paraquat，PQ），化学名称为1，1＇-二甲基-4，4＇-联吡啶阳离子盐，是一种有机杂环类脱叶剂。由于其成本低廉，除草高效，且具有遇土分解，对环境无害等特点，PQ被广泛应用于农业生产中。

简介：目的观察自发性2型糖尿病OLETF（OtsukaLong—EvansTokushimaFatty）大鼠肺泡上皮细胞基板的超微结构改变。方法用透射电镜观察、图像分析仪及形态计量学方法计算OLETF及对照的LETO（Long—EvansTokushimaOtsuka）大鼠肺泡上皮细胞基板的超微结构及厚度。结果与LETO组大鼠相比，OLETF组大鼠肺泡毛细血管内皮细胞基板与I型肺泡上皮细胞基板融合部及Ⅱ型肺泡上皮细胞基板均增厚（分别为110．6±14．14US．57．3±11．08和116．4±10．22vs．71．89±7．68，P〈0．01）。结论OLETF大鼠肺泡上皮细胞基板增厚，提示可能与糖尿病高血糖环境引起毛细血管基板成分发生改变有关。

简介：肺泡Ⅱ型上皮细胞是一种多功能细胞，能分泌表面活性物质维持肺泡表面张力，增殖分化成肺泡Ⅰ型上皮细胞对损伤和疾病时的肺进行修复等，对维持肺泡的正常结构和功能有重要意义，在肺纤维化和肺癌的发生发展过程中扮演着重要角色。本文对肺泡Ⅱ型上皮细胞的形态结构、转分化及与肺纤维化和肺肿瘤关系研究现状分别加以阐述。

简介：

简介：目的:探讨EC液低温灌注犬肺离体保存组织结构随保存时间变化的特点及规律,评价EC液低温灌注对犬肺的保存效果.方法:4℃EC液灌注6只健康成年杂种犬肺并离体低温保存,灌注结束后,分别保存30、60、120、180、240min,取材制作组织标本,测试、观察不同时点肺组织湿干重与肺泡上皮细胞核的体积密度(Vv)、表面积密度(Sv)、表面积与体积比(Rsv),以灌注前为对照组.结果:肺组织湿干重比、肺泡上皮细胞核的Vv、Sv、Rsv随低温保存时间变化无显著性差异(P＞0.05).结论:保存4h内肺组织结构的特点没有变化,肺泡上皮细胞核的Vv、Sv、Rsv变化不明显,改进后的EC保存液可以用于供体肺保存.

简介：摘要目的探讨微小RNA-21-5p（miR-21-5p）是否具有抗人Ⅱ型肺泡上皮细胞（ATⅡ）凋亡的作用。方法体外培养人ATⅡ细胞，待细胞生长至光镜下可见层状体和微绒毛时用于实验。将细胞分为空白对照组（直接培养，不予任何处理）、过氧化氢（H2O2）损伤组（加入0.5 mmol/L H2O2）、miR-21-5p过表达组〔加入感染复数（MOI）为100的miR-21-5p慢病毒过表达载体与0.5 mmol/L H2O2共培养〕和空病毒对照组（加入miR-21-5p慢病毒空白载体与0.5 mmol/L H2O2共培养）。各组分别于细胞培养0、12、24、36、48 h采用细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖情况；于培养24 h采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果①细胞增殖活性检测结果：随着细胞培养时间的延长，空白对照组细胞增殖活性逐渐增强，而加入0.5 mmol/L H2O2处理后细胞增殖活性则逐渐下降；但miR-21-5p过表达组细胞增殖活性较H2O2损伤组和空病毒对照组下降缓慢，48 h时细胞增殖活性明显高于H2O2损伤组和miR-21-5p空病毒对照组〔吸光度（A）值：0.295±0.005比0.184±0.005、0.169±0.002，均P<0.05〕。说明H2O2及慢病毒均加快了细胞损伤，而miR-21-5p可抑制细胞凋亡。②细胞凋亡检测结果：与空白对照组比较，加入0.5 mmol/L H2O2处理后细胞凋亡率明显升高；而miR-21-5p过表达组细胞凋亡率较H2O2损伤组和空病毒对照组均明显降低〔早期细胞凋亡率：（14.31±0.12）%比（24.50±0.12）%、（23.41±0.13）%，晚期细胞凋亡率：（8.12±0.13）%比（9.71±0.11）%、（10.41±0.15）%，总体细胞凋亡率：（22.33±0.12）%比（34.21±0.10）%、（33.82±0.14）%，均P<0.05〕，进一步证明miR-21-5p具有抗细胞凋亡作用。结论miR-21-5p具有抗人ATⅡ凋亡的作用。

简介：摘要目的探究大气颗粒物(PM)能否诱导肺泡上皮细胞的衰老以及硫化氢(H2S)能否拮抗PM诱导的肺泡上皮细胞衰老。方法本研究为实验研究。用不同浓度的PM刺激MLE-12细胞，通过β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老率；用蛋白质印迹法测定细胞衰老标志蛋白p21；用流式细胞术测定细胞周期反映细胞衰老情况。加入不同浓度的硫氢化钠(NaHS)，通过检测细胞衰老逆转情况，测定细胞衰老标志蛋白p21和细胞周期，研究H2S对PM诱导的肺泡上皮细胞衰老的影响；并通过检测细胞内活性氧(ROS)的产生，研究氧化应激在PM诱导的细胞衰老中的作用，以及H2S对氧化应激的影响。结果不同浓度的PM刺激24、48、72 h后，用50 mg/L PM刺激细胞24 h后β-半乳糖苷酶阳性细胞率最高，占比接近40%，p21表达水平最高。随着PM浓度的增加，更多的细胞周期停滞在G0-G1期，S期细胞逐渐减少。经不同浓度的NaHS刺激，100 μmol/L的NaHS刺激细胞后，对细胞衰老逆转效果最明显。与单纯PM刺激相比，β-半乳糖苷酶阳性细胞率、p21的表达水平下降明显，细胞周期逐渐恢复。采用PM(50 mg/L)和NaHS(100 μmol/L)刺激肺泡上皮细胞，与对照组相比，单纯刺激PM组的ROS的产生增加，而加入NaHS后，使得PM刺激导致的ROS表达水平降低。结论PM可以诱导肺泡上皮细胞衰老，而H2S可以拮抗这种改变。

简介：摘要目的通过研究脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）与单羧酸转运蛋白-1（monocarboxylate transporter 1, MCT1）表达的关系及对肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation, EMT）的影响，探究LPS诱导的肺纤维化过程中肺泡上皮细胞EMT的潜在机制。方法① 24只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为对照组（Con1组）和脂多糖刺激组（LPS1组），每组12只。LPS1组小鼠连续3 d腹腔注射LPS 5 mg·kg−1·d−1，Con1组小鼠注射等体积生理盐水，造模7 d后取材。Western blot法和免疫荧光检测肺组织MCT1以及EMT相关标志蛋白[E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]的表达情况，ELISA法检测血清中乳酸含量，马松（Masson）染色评估肺组织纤维化程度。②将MLE-12细胞按照随机数字表法分为4组（每组3个孔）：PBS对照组（Con2组）、乳酸组（Lac2组）、脂多糖组（LPS2组）及乳酸+脂多糖组（Lac+LPS2组），分别用PBS、10 mmol/L乳酸、1 mg/L LPS和10 mmol/L乳酸+1 mg/L LPS刺激48 h。使用Western blot法及免疫荧光检测各组细胞MCT1、E-cadherin、Vimentin水平，同时检测各组细胞上清液pH值。结果①与Con1组比较，LPS1组小鼠肺组织MCT1蛋白水平降低（P< 0.05），E-cadherin水平降低（P<0.05），Vimentin水平升高（P<0.05）；肺组织E-cadherin荧光强度降低，Vimentin荧光强度增强，MCT1荧光强度降低；肺组织出现纤维化表现；同时伴有血清乳酸含量升高（P<0.05）。②与Con2组比较，Lac2组MCT1蛋白水平明显升高（P<0.05），E-cadherin、Vimentin水平及pH值差异无统计学意义（P>0.05）；LPS2组与Lac+LPS2组MCT1蛋白水平明显降低（P<0.05），E-cadherin水平降低（P<0.05），Vimentin水平升高（P<0.05），pH值降低（P<0.05）。与Lac2组比较，Lac+LPS2组细胞MCT1蛋白水平和E-cadherin水平明显降低（P<0.05），Vimentin水平明显升高（P<0.05），pH值降低（P<0.05）。与Con2组比较，Lac2组MCT1荧光强度增强，E-cadherin、Vimentin荧光强度无明显变化；LPS2组与Lac+LPS2组MCT1和E-cadherin荧光强度减弱，Vimentin荧光强度增强。与Lac2组比较，Lac+LPS2组MCT1、E-cadherin荧光强度明显减弱，Vimentin荧光强度明显增强。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中，LPS可抑制小鼠肺泡上皮细胞MCT1的表达，导致乳酸清除障碍和细胞外液酸化，从而促进EMT和组织纤维化过程。

简介：目的探讨腺病毒E1A基因对细菌脂多糖(LPS)所致肺泡上皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法通过脂质体转染的方法将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞)，经G418筛选、Westemblot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆，不同浓度的LPS活化，测定不同时间细胞ICAM-1表达。结果与未转染和空质粒转染A549细胞相比较，经LPS活化后E1A阳性表达A549细胞ICAM-1表达显著增加，且呈浓度和时间依赖性。结论腺病毒E1A基因显著增加LPS所致的气道上皮细胞ICAM-1表达，提示腺病毒潜伏感染可能通过放大外界刺激因素所致的气道炎症反应在COPD的发病中发挥重要作用。

简介：摘要目的探讨虎杖苷对脂多糖（LPS）诱导的肺泡上皮细胞氧化应激的影响及其可能机制。方法A549细胞随机分为5组：对照组细胞不接受任何刺激；溶剂组细胞只接受DMSO处理；模型组细胞接受5 μg/ml LPS刺激6 h；治疗组细胞接受5 μg/ml LPS及50 μmol/L虎杖苷刺激6 h；抑制剂组细胞接受5 μg/ml LPS、50 μmol/L虎杖苷及50 μmol/L 3-TYP刺激6 h。采用试剂盒分别检测细胞SIRT3活性、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、总抗氧化能力（T-AOC）、细胞毒性及活力。结果与对照组比较，模型组MDA含量及细胞毒性分别显著增加为（5.35±0.53）nmol/(mg·pr)及（264±25.9）U/L，SIRT3活性、T-AOC、SOD活性及细胞活力显著下降为（69±6.5）%、（25.8±3.5）μmol/(mg·pr)、（0.49±0.19）U/(mg·pr)及（74±5.7）%（均P<0.05）。与模型组比较，治疗组MDA含量及细胞毒性分别显著下降为（3.51±0.39）nmol/(mg·pr)及（171±19.5）U/L，SIRT3活性、T-AOC、SOD活性及细胞活力显著增加为（87±6.0）%、（0.91±0.21）μmol/(mg·pr)、（18.5±6.4）U/(mg·pr)及（89±5.5）% （均P<0.05）。与治疗组比较，抑制剂组MDA含量及细胞毒性分别显著增加为（5.27±0.5）nmol/(mg·pr)及（244±24.6）U/L，SIRT3活性、T-AOC、SOD活性及细胞活力显著下降为（74±5.4）%、（0.53±0.18）μmol/(mg·pr)、（18.5±6.4）U/(mg·pr)及（77±5.9）%（均P<0.05）。结论虎杖苷显著减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞氧化应激，其机制可能与激活SIRT3有关。

简介：摘要目的探讨牙龈间充质干细胞(GMSCs)移植能否抑制辐射诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)衰老，及其在预防放射性肺纤维化(RIPF)中的作用。方法采用6 Gy照射小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(MLE12)诱导细胞衰老，照后即刻与GMSCs共培养，通过细胞形态、β半乳糖苷酶(β-Gal)染色、衰老分泌相关表型(SASP)检测以评估细胞衰老程度；C57BL/6小鼠单侧右肺17 Gy照射构建RIPF模型，照后1 d移植GMSCs，照后180 d取材，期间记录小鼠生存率，采用肺脏器比、HE染色、Masson染色评估肺内结构及肺间质胶原沉积状况，应用β-Gal免疫组织化学法与AECⅡ免疫荧光共定位评估肺内细胞衰老程度，qRT-PCR检测肺组织SASP表达变化；采用Western blot检测P53-P21、P16通路关键蛋白表达水平，免疫荧光共定位检测AECⅡ中P21表达情况。结果GMSCs共培养能够有效抑制辐射诱导的MLE12细胞衰老，使照射后升高的β-Gal阳染率降低11.8%(t＝6.72，P<0.05)，并使SASP(IL-6、IL-8、IL-1β)的表达有效降低(t＝28.43、28.43、4.82，P<0.05)；GMSCs移植提高了受照小鼠的生存率，改善了照射诱导的肺泡结构塌陷增厚及胶原蛋白沉积情况，照射后肺组织中衰老细胞数目降低23.9%(t＝21.83，P<0.05)，SASP的表达水平下降(t＝8.86、20.63，P<0.05)；抑制照射后MLE12及RIPF小鼠肺组织中P53-P21、P16相关蛋白的上调。结论GMSCs通过下调衰老相关的P53-P21及P16通路蛋白，从而抑制辐射诱导的AECⅡ衰老，达到预防放射性肺纤维化发生发展的目的。

简介：无

简介：摘要目的评价LPS攻击大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)时血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)信号通路与线粒体分裂的关系。方法大鼠AECⅡ进行传代培养，待其分裂至合适浓度(约2×105个/ml)时接种于96孔板。采用随机数字表法将细胞分为7组(n＝12)：空白对照组(C组)继续培养，不做任何处理；LPS组(L组)采用10 μg/ml LPS孵育；一氧化碳释放分子-2(CORM-2)＋LPS组(CL组)、HO-1诱导剂Hemin＋LPS组(HL组)、HO-1抑制剂ZnPP-Ⅸ＋LPS组(ZL组)分别采用100 μmol/L CORM-2孵育1 h、20 μmol/L Hemin孵育1 h以及10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h，而后用10 μg/ml LPS孵育；CORM-2＋ZnPP-Ⅸ＋LPS组(CZL组)：采用100 μmol/L CORM-2孵育1 h，而后用10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h，最后用10 μg/ml LPS孵育；Hemin＋ ZnPP-Ⅸ＋LPS组(HZL组)采用20 μmol/L Hemin孵育1 h，而后用10 μmol/L ZnPP-Ⅸ孵育0.5 h，最后用10 μg/ml LPS孵育。各组于培养或LPS孵育48 h时采用MTT检测细胞活力，采用Western bolt法检测HO-1、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达。结果与C组比较，其余6组细胞活力降低，HO-1、Drp1及Fis1表达上调(P<0.05)。与L组比较，CL组和HL组细胞活力升高，HO-1表达上调，Drp1及Fis1表达下调，ZL组细胞活力降低，HO-1表达下调，Drp1及Fis1表达上调(P<0.05)，CZL组和HZL组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与CL组和HL组比较，ZL组细胞活力降低，HO-1表达下调，Drp1及Fis1表达上调(P<0.05)。结论HO-1/CO信号通路可抑制线粒体分裂，在LPS诱导大鼠AECⅡ损伤时发挥内源性保护作用。

简介：摘要目的研究多瘤促活化因子3(PEA3)在高氧诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC Ⅱ)损伤中的作用及其机制。方法体外培养AEC Ⅱ，分为高氧组和常氧组。给予高氧或空气后24 h、48 h及72 h，收取各组细胞，选取最佳造模时间为48 h。将AEC Ⅱ分3大组：空白组、阴性对照组(转染空载)、过表达质粒组(转染PEA3)，每大组均分为高氧亚组和常氧亚组。给予高氧或空气后48 h，收取各组细胞。检测活性氧(ROS)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-18、表面活性物质蛋白C(SP-C)、水通道蛋白5(AQP5)、PEA3及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)等。采用SPSS 20.0统计软件，数据比较采用t检验和重复测量方差分析。结果分组与时间的交互作用对AEC Ⅱ内ROS、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18、SP-C和AQP5均有显著影响(F＝19.857、20.132、23.133、18.673、28.341、27.333和34.217，均P<0.05)。在24 h、48 h和72 h，高氧组ROS分别是同时间常氧组的1.78倍、1.94倍和2.26倍(t＝18.649、17.486和19.385，均P<0.05)；NLRP3、MCP-1均明显增加；IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18分别是同时间常氧组的1.33倍、1.69倍和1.65倍，1.26倍、1.56倍和2.12倍，1.13倍、1.47倍和2.34倍，1.46倍、1.72倍和1.95倍(均P<0.05)；SP-C蛋白表达明显减少，AQP5蛋白表达明显增加；SP-C核酸相对含量分别比同时间常氧组减少了22%、63%和72%，差异均有统计学意义(t＝3.982、16.328和20.259，均P<0.05)，AQP5核酸相对含量分别是同时间常氧组的1.92倍、5.23倍和7.36倍，差异均有统计学意义(t＝14.631、18.945和19.521，均P<0.05)。在24 h、48 h和72 h 3个时间点，高氧组ROS、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18、SP-C和AQP5比较差异均有显著差异(F＝22.343、20.566、23.701、19.222、32.146、40.278和37.107，均P<0.05)。在PEA3过表达48 h，与高氧阴性对照组相比，高氧过表达质粒组AEC Ⅱ内ROS降低了34%(t＝14.635，P<0.05); NLRP3、MCP-1均减少；IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18分别降低了29%、22%、27%和18%(t＝15.895、17.872、18.749和15.274，均P<0.05)；SP-C增加，AQP5减少；PEA3和MnSOD均明显增加。结论PEA3过表达可能通过上调MnSOD蛋白表达，缓解高氧刺激后AEC Ⅱ内ROS增多和多种炎症通路激活，减少AEC Ⅱ向AEC Ⅰ转化，减轻高氧诱导的AEC Ⅱ损伤。

简介：目的：明确腺病毒E1A基因对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致肺泡上皮细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）／基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）失衡是否存在影响。方法：将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒组（E1A＋组）和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组（EIA一组），分别以不同浓度的LPS刺激．刺激后12、24h用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞MMP-9mRNA和TIMP．1mRNA的表达，用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测MMP．9和TIMP-1蛋白的表达。结果：在LPS刺激12h后E1A＋组的MMP-9／TIMP-1mRNA比值高于其他2组（P=0．045）：在刺激24h后3组之间的差别更加显著（P=0．032）。MMP-9/TIMP-1蛋白比值在LPS刺激12h后E1A＋组高于其他2组．但无统计学意义（P=0．069），在刺激24h后3组蛋白比值的差别比较显著（P=0．039）。结论：腺病毒EIA基因可导致Ⅱ型肺泡上皮细胞在LPS刺激下大量释放MMP-9．使MMP-9／TIMP-1的失衡进一步加重。

简介：摘要目的评价褪黑素受体与线粒体分裂蛋白的关系，明确褪黑素减轻LPS致大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的机制。方法将大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞以密度2×105个/ml接种于6孔板，采用随机数字表法分为5组(n＝10)：对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS＋褪黑素组(LM组)、LPS＋褪黑素受体阻断剂组(LL组)和LPS＋褪黑素＋褪黑素受体阻断剂组(LML组)。采用10 μg/ml LPS孵育24 h的方法制备LPS致细胞损伤模型；于LPS孵育前12 h时，分别向LM组、LL组和LML组加入褪黑素0.1 mmol/L和/或褪黑素受体阻断剂luzindole 0.2 μmol/L。细胞孵育结束后，采用ELISA法测定培养液TNF-α和IL-6浓度。采用GENMED纯化线粒体呼吸控制率(RCR)定量检测试剂盒测定各组RCR。采用Western blot法测定细胞线粒体动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体分裂相关蛋白1(Fis1)的表达。结果与C组比较，L组、LM组、LL组和LML组细胞培养液TNF-α和IL-6浓度升高，RCR降低，线粒体Drp1和Fis1表达上调(P<0.05)；与L组比较，LM组细胞培养液TNF-α和IL-6浓度降低，RCR升高，线粒体Drp1和Fis1表达下调(P<0.05)，LL组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)；与LM组比较，LML组细胞培养液TNF-α和IL-6浓度升高，RCR降低，线粒体Drp1和Fis1表达上调(P<0.05)。结论褪黑素减轻LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的机制与激活褪黑素受体，抑制线粒体分裂蛋白表达有关。

简介：摘要目的结合生物信息学分析结果研究头蛋白基因(NOG)在博来霉素诱导的A549细胞衰老模型中的作用及分子机制。方法从GEO数据库下载IPF数据集GSE28042和GSE135893。在GSE28042中，运用R软件进行衰老相关基因的差异表达分析，通过单因素Cox回归初步筛选出与预后相关的基因，利用随机森林和LASSO回归2种算法，筛选出关键基因。采用Kaplan-Meier法绘制NOG高、低表达组患者的生存曲线。应用统一流形逼近与投影算法对GSE135893数据集中的单细胞测序数据降维，分析NOG在Ⅱ型肺泡上皮细胞的差异表达。采用随机数字表法将12只6~8周龄的C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组，每组6只，实验组小鼠气管内滴注博来霉素构建肺纤维化模型，取小鼠肺组织进行免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测NOG的蛋白和mRNA表达水平。将A549细胞分为空白对照组、博来霉素组(5 mg/L)、阴性对照组(博来霉素5 mg/L+空载体慢病毒)以及NOG过表达组(博来霉素5 mg/L+NOG过表达慢病毒)，应用蛋白质印迹法检测各组衰老相关蛋白P16、P21，Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白以及Ⅰα型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达，并应用SA-β-Gal染色检测各组细胞衰老细胞所占的比例。结果GSE28042数据集中筛选出95个差异表达的衰老相关基因，其中35个上调，60个下调。结合单因素Cox回归、LASSO回归和随机森林算法，筛选出关键衰老相关基因NOG。高表达NOG的IPF患者总体生存时间较低表达NOG的IPF患者更长(P<0.05)。单细胞测序显示NOG在IPF患者Ⅱ型肺泡上皮细胞的表达量低于正常肺组织(P<0.05)。RT-qPCR及免疫组织化学染色结果提示NOG在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织中为低表达(P值均<0.05)。博来霉素组A549细胞中的NOG蛋白表达低于空白对照组和NOG过表达组(P值均<0.05)。博来霉素组A549细胞的衰老相关蛋白、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白以及Ⅰα型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达水平高于空白对照组和NOG过表达组(P值均<0.05)。SA-β-Gal染色结果提示博来霉素组A549细胞株中衰老细胞的比例明显高于空白对照组和NOG过表达组(P值均<0.05)。结论NOG在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化组织内呈低表达，过表达NOG可以通过Wnt/β-catenin信号通路减轻博来霉素诱导的A549细胞衰老，从而抑制肺纤维化的进展。

简介：摘要目的观察小干扰RNA(siRNA)靶向沉默干扰素调节因子-8(IRF-8)对缺氧复氧后肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法将IRF-8 siRNA、Negative control(NC)siRNA通过脂质转染试剂转染至肺泡上皮细胞株[L2(购自中国上海拜利生物科技有限公司)]，将细胞分为4组，si-IRF-8组，转染含有IRF-8 si-RNA的细胞组；质粒对照组，转染Negative control(NC) siRNA的细胞组；正常对照组，无转染质粒，完全正常培养；阴性对照组，无质粒转染，给与缺氧复氧干预。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测肺泡上皮细胞L2细胞株转染后凋亡相关分子标志物：活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)；聚合酶链反应(PCR)检测Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的转录水平变化。组间比较采用独立样本t检验。结果转染IRF-8 siRNA后，L2细胞内IRF-8相对表达水平明显下调，差异有统计学意义[si-RNA组(0.146±0.009)对比si-NC组(1.001±0.055)，t＝15.566，P<0.01]。经过缺氧复氧干预后L2细胞株si-IRF-8组Caspase-3、bax水平(1.877±0.250、1.989±0.145)较si-NC组(3.681±0.292、4.636±1.261)明显降低，差异有统计学意义(t＝－4.686、－5.110，P<0.01)，bcl-2水平在L2细胞的si-IRF-8组(0.837±0.858)较si-NC(0.179±0.533)组显著升高，差异有统计学意义(t＝15.955，P<0.01)；Western blot检测cleaved Caspase-3蛋白的表达水平(0.257±0.051)较质粒对照组(0.485±0.751)明显下调，差异有统计学意义(t＝6.205，P<0.01)。结论IRF-8 si-RNA能特异性下调肺泡上皮细胞L2细胞株中IRF-8的表达，并显著降低缺氧复氧干预后细胞的凋亡水平，其机制可能与下调促凋亡相关蛋白bax、Caspase-3及上调抗凋亡相关蛋白bcl-2的转录过程相关。

简介：摘要目的探讨百草枯（PQ）染毒肺泡上皮细胞内KCa3.1对NLRP3炎症小体的调控作用。方法体外培养A549细胞，分为对照组、TRAM-34（KCa3.1的特异性抑制剂）组、PQ组及PQ+TRAM-34组。免疫荧光检测细胞中KCa3.1的变化。Western Blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白及NIMA相关激酶7（NEK7）蛋白的表达。细胞钾离子浓度变化比色法定量检测试剂盒检测钾离子的变化。结果免疫荧光结果提示A549细胞染毒后，KCa3.1表达明显增加。Western Blot结果提示PQ处理后，A549细胞内NLRP3炎症小体（相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1）及NEK7蛋白表达明显升高；抑制KCa3.1后，NLRP3炎症小体及NEK7表达减少；且差异具有统计学意义[NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.02±0.00)vs (0.03±0.00)vs （0.74±0.00） vs （0.32±0.01）]；ASC蛋白（ASC/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）: [（0.12±0.01）vs（0.11±0.03）vs（0.46±0.02）vs（0.17±0.03）]；Caspase-1蛋白（Caspase-1/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）:[(0.05±0.00)vs 0.04±0.00) vs （0.34±0.03）vs（0.15±0.01）];NEK7蛋白（NEK7/ β-actin，对照组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.38±0.03)vs （0.83±0.02) vs (0.51±0.01)，均P<0.01]。比色法检测结果提示PQ处理后细胞内钾离子明显下降，抑制KCa3.1后细胞内钾离子下降明显减少；且差异有统计学意义（对照组比染毒组比染毒+抑制剂组：[(1.00±0.00)vs （0.60±0.05）vs（0.86±0.02），均P<0.01]。结论PQ中毒后，可能激活KCa3.1促使细胞内钾离子外流，上调NEK7表达，从而激活NLRP3炎症小体，促进肺纤维化的发生。

简介：摘要目的探讨在肺泡上皮细胞模型中甲型H1N1流感病毒（H1N1病毒）诱导低氧诱导因子-1α（HIF-1α）核转位的分子机制。方法体外培养人肺腺癌上皮细胞（A549细胞），选取对数生长期细胞用于实验。①实验1：采用感染复数（MOI）1.0的H1N1病毒感染细胞24 h，建立H1N1病毒感染的A549细胞模型（H1N1病毒感染组）；并设立空白对照组。采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞中核转运受体蛋白（Importin 4、Importin 7）表达，探讨HIF-1α核转位是否依赖Importin 4、Importin 7。②实验2：采用不同MOI（0、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0）的H1N1病毒感染细胞24 h；采用MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞0、3、6、12、18、24、36 h。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中胞裂蛋白9基因变异剪接体1（SEPT9_i1）mRNA表达，探讨不同MOI和感染时间对SEPT9_i1表达的影响。③实验3：采用小干扰RNA（siRNA）转染细胞24 h抑制SEPT9_i1，建立沉默SEPT9_i1的A549细胞模型（siRNA-SEPT9_i1组）；并设立空白对照组和空白载体对照组（siControl组）。3组细胞转染24 h后均给予MOI 1.0的H1N1病毒感染24 h，采用实时荧光定量RT-PCR检测细胞中SEPT9_i1 mRNA表达，以探讨siRNA对SEPT9_i1的干扰效率。④实验4：将细胞分为siControl组和siRNA-SEPT9_i1组，两组细胞转染方法同实验3。转染24 h后，两组均以MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞，于24 h采用免疫荧光法观察细胞中HIF-1α核内外分布情况；于6、12、24、36、48 h采用实时荧光定量RT-PCR检测病毒M基因表达，以明确SEPT9_i1对HIF-1α核转位和病毒复制的影响。⑤实验5：将细胞分为空白对照组（完全培养基）、SP600125组〔100 μmol/L的c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路抑制剂SP600125处理细胞2 h〕、H1N1病毒感染组（MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞24 h）和H1N1病毒+ SP600125组（100 μmol/L的SP600125预处理2 h后，再加入MOI 1.0的H1N1病毒感染细胞24 h）。采用实时荧光定量RT-PCR检测细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达，探讨JNK信号通路对SEPT9_i1表达及病毒复制的影响。结果①实验1：与空白对照组相比，H1N1病毒感染组A549细胞中Importin 4和Importin 7蛋白表达差异均无统计学意义〔Importin 4蛋白（Importin 4/GAPDH）：1.08±0.03比1.05±0.03，Importin 7蛋白（Importin 7/GAPDH）：0.87±0.11比0.78±0.03，均P>0.05〕。说明H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位可能不依赖Importin 4和Importin 7。②实验2：A549细胞中SEPT9_i1 mRNA表达随H1N1病毒MOI增加及感染时间延长呈升高趋势，分别于MOI 2.0和感染18 h达峰值，与MOI为0或感染0 h比较差异均有统计学意义（2-ΔΔCT：MOI 2.0为1.39±0.05比1.00±0.00，18 h为1.47±0.04比1.00±0.00，均P<0.01）。说明H1N1病毒感染A549细胞中SEPT9_i1表达与病毒MOI及感染时间相关。③实验3：与空白对照组比较，siRNA-SEPT9_i1组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA表达明显下调（2-ΔΔCT：0.38±0.11比1.00±0.00，P<0.01），而siControl组与空白对照组比较差异无统计学意义（2-ΔΔCT：1.03±0.16比1.00±0.00，P>0.05）。说明沉默SEPT9_i1可抑制H1N1病毒感染A549细胞中SEPT9_i1表达。④实验4：siRNA-SEPT9_i1组H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位较siControl组明显减少。siControl组感染H1N1病毒后细胞中病毒M基因表达逐渐升高，48 h达峰值；siRNA-SEPT9_i1组A549细胞中病毒M基因表达明显下调，48 h与siControl组比较差异有统计学意义（2-ΔΔCT：3.47±0.66比8.17±0.38，P<0.05）。说明沉默SEPT9_i1后可以抑制H1N1病毒感染A549细胞中HIF-1α核转位和病毒复制。⑤实验5：H1N1病毒感染组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达较空白对照组明显升高；而H1N1病毒+ SP600125组A549细胞中SEPT9_i1 mRNA和病毒M基因表达均明显低于H1N1病毒感染组（2-ΔΔCT：SEPT9_i1 mRNA为0.12±0.10比1.53±0.14，病毒M基因为2.13±0.10比4.66±0.14，均P<0.05）；SP600125组上述指标与空白对照组比较差异均无统计学意义。说明H1N1病毒感染A549细胞中JNK信号通路可以调控SEPT9_i1的表达，而抑制JNK信号通路可以下调SEPT9_i1的表达及抑制病毒复制。结论H1N1病毒通过激活JNK信号通路调控SEPT9_i1的表达，从而提高HIF-1α转运效率以及促进病毒复制。