简介:目的:建立李痘病毒(PPV)特异、灵敏、快速的实时荧光定量RT-PCR检测方法,用于核果类种苗的健康评测及李痘病毒疫情监测。方法:根据PPV-D株系和PPV-M株系的外被蛋白(CP)基因保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,扩增全长CP基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立PPV的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。结果:此荧光定量RT-PCR方法对PPV检测呈现高灵敏度和高特异性,与马铃薯Y病毒和马铃薯X病毒无交叉反应,最低检出限可达1.6×10^2拷贝/μL,标准曲线的相关系数为0.99918。结论:建立了李痘病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,可望应用于检验检疫部门对李痘病毒的快速检测
简介:为了进一步明确苹果茎痘病毒(Applestempittingvirus,ASPV)的分子变异及株系分化,制备相应特异性抗血清。本研究以库尔勒地区种植的感染ASPV的鸭梨(Y)枝条韧皮部为试材,采用RT-PCR技术扩增ASPVCP基因,克隆、测序,获得了鸭梨分离物外壳蛋白(ASVPCP-Y)基因,将该CP基因连接到表达载体PET-28a上,转化到大肠杆菌BL21(DE3),1mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析。研究结果表明,获得的鸭梨ASPVCP基因全长1194bp,推测编码397个氨基酸,与已报道的ASPV分离物的氨基酸序列同源性为70%左右。进化分析结果显示,ASPVCP基因的分离物可聚为三个类群:第一类群的寄主为苹果,第二类群的寄主为梨(除了NC_003462,苹果),ASPVCP-Y归入第三类群。CP基因在大肠杆菌中诱导表达,其融合蛋白分子量约为42kD。克隆的鸭梨ASPVCP基因及构建的原核表达载体为制备ASPV重组CP基因多克隆抗体及ASPV的分子生物学的进一步研究奠定了基础。
简介:摘要目的调查某学校9月一起感染性腹泻暴发疫情,分析和探讨其流行因素,评价控制措施效果,为今后感染性腹泻疫情的防控提供参考。方法对全校学生和教职员工进行快速症状筛查后,再对初筛病例逐一进行个案调查。对学校的基本情况、食堂卫生状况、饮用水供应、学生宿舍环境卫生进行调查,并开展病例对照研究。采集病例的粪便或肛拭子标本、管网末梢水、地面及物表涂抹样等样品。粪便和肛拭子样品进行诺如病毒、轮状病毒和腺病毒荧光PCR检测,生活饮用水进行卫生学指标和诺如病毒荧光PCR检测,涂抹样进行诺如病毒荧光PCR检测。结果79例病例,罹患率为11.60%,临床表现为腹泻(100%)、腹痛(81.01%)、头痛(29.11%)、食欲不振(13.92%)、发热(7.59%)、呕吐(7.59%);21例现患病例中的13例的粪便或肛拭子标本诺如病毒GII阳性;发病高峰在9月19日至9月24日,聚集在男生宿舍楼(78.48%),该校各学生宿舍楼内班级住宿学生罹患率无统计学差异;男生宿舍楼罹患率高于女生宿舍楼罹患率(Pearson?2=44.10,P<0.001);男生宿舍楼采光差、地面潮湿,学生在宿舍呕吐及通槽式公共卫生间可产生气溶胶。结论此次疫情为一起GII型诺如病毒腹泻暴发,结合疫情流行病学特征、饮食调查、卫生学和宿舍楼环境调查,认为此次疫情9月1日至9月18日主要传播途径可能为接触传播,9月19日-9月24日可能发生了男生宿舍楼内的气溶胶传播。