简介：1985年Cetus公司的Mullis发明的聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）是现代分子生物学研究中的一项非常重要的技术，它可在短时间内在试管中获得数百万特异DNA序列的拷贝，从而很容易地对目的基因进行分析、鉴定以及其它操作。这一技术现已广泛应用于生物学的各研究领域。PCR的定量实质是核酸的体外扩增，当人们利用技术扩增出大量的特异DNA序列后，还必须对这些PCR产物进行定性或定量检测，特别是临床检验中，定量分析PCR产物可以为临床诊断、疗效观察等提供更为准确的信息。另外，在研究基因的表达调控研究中，经常利用RT-PCR定量检测某一特定的转录mRNA，因此，建立灵敏、准确、重复性好的PCR产物定量检测法是目前PCR及其相关技术研究的特点，电是定量PCR技术的基础。本文将对这一技术近年来的研究进展状况作一简要综述。

简介：目的：用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）法准确地定是检验血清中乙型肝炎病毒（HBV）的数量和免疫指标，以指导临床。方法：采用HBV－DVAFQ－PCR诊断试剂盒，以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术组合所产生的实时检验定量PCR方法，检测了58例临床血清标本。结果：经FQ－PCR检测，9例HBV的HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBcAb都阳性标本，其HBV－DNA的阳性率为100％，平均HBV－DNA拷贝数为2．0×10^8/ml；16例HBsAg、HBeAb、HBcAb都阳性的标本，其阳性率为62．5％（10例），平均拷贝数为5．2×10^5/ml，而常规PCR只有33％的阳性率；7例HBsAb、HBeAb、HBcAb都阳性的标本，其阳性率为14．3％（1例），平均拷贝数为4．7×10^3ml。结论：HBV－DNA的FQ－PCR检测较常规PCR更具有较高的灵敏度和特异性，且定量准确，结果可靠，能够避免PCR后处理导致物假阳性污染，可以真实反映HBV的感染和低复制状态，对于乙型肝炎的临床诊断，治病方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。

简介：定量荧光检测技术(QFT)是近年来国外开发研制出来的一种先进的油层监测手段,并为许多国外公司广泛应用。本文讨论了常规荧光仪存在的不足,介绍了QFT的理论依据、工作原理及应用,特别是其在克服常规荧光仪局限性方面具有独到之处。

简介：目的探讨DNA含量与胃癌预后的关系.方法采用IMS-2000型癌细胞DNA分析系统测定163例胃癌患者的DNA指数、平均CV值、DNA主峰面积、DNA主峰质量（pg）、平均DNA质量（pg）、G0G1期细胞百分率、S期细胞百分率、G2M期细胞百分率以及5倍体超过率等9项指标,并进行Cox比例风险回归分析.结果Cox比例风险回归模型单因素和多因素分析结果显示,这9项指标与生存率之间的差别均无统计学意义（P＞0.05）.结论DNA含量与胃癌患者术后生存率无相关性.DNA含量不能作为预测胃癌预后的独立指标.

简介：脐血造血干细胞移植具有来源广泛、采集便利和移植后移植物抗宿主反应低等优点,目前国内已有单位在筹建脐血造血干细胞库.脐血中造血干细胞定量检测对于造血干细胞移植有重要的指导意义,由于各地的检测方法和实验条件不同,导致所得结果差异较大.本研究应用流式细胞仪(FCM),探讨3种检测方法的优缺点,并对收集的615份脐血进行造血干/祖细胞定量检测,现报告如下.

简介：目的研究丙型肝炎患者血清中的丙型肝炎病毒核糖核酸(HCVRNA)载量与抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)之间的相关性.方法用荧光定量(FQ-PCR)法检测208例疑诊丙型肝炎患者血清中的HCVRNA,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗-HCV.结果208例血清样本中HCVRNA阳性率为81.3%.HCVRNA平均载量为4.63×105Copies/ml.结论FQ-PCR法检测HCVRNA是判定HCV感染的直接证据,是反映病毒复制与传染性的直接指标,有确诊价值与抗病毒治疗疗效评估价值.HCVRNA与抗-HCV具有高度正相关.HCVRNA较抗-HCV检出率有显著性差异.

简介：目的：进一步了解乙肝产妇的母乳中HBVDNA含量及其传染性，更好地指导母乳喂养。方法：利用荧光定时定量PCR检测技术，对45例乙肝血清学阳性的产妇进行血浆及乳汁中HBVDNA的定量检测。结果：45例产妇血浆和乳汁中HBVDNA的检出率分别为73%（33、45）和67%（30、45），其HBVDNA含量的对数值具有良好的相关性，（r=0.837，n=45，P<0.01），HBeAg（+）与HBeAb(+）两组间比较血浆及乳汁HBVDNA的含量，两者存在显著性差异（P<0.01）。HBeAg(+）组含量高于HBeAb（+）组。结论：乳汁和血浆中HBVDNA含量具有较好的相关性，血浆中HBVDNA高拷贝的产妇最好不要进行母乳喂养。产妇血浆中HBeAg与乳汁及血浆中HBVDNA含量都具有明显关系，它的存在提示血浆及乳汁中的HBVDNA含量较高。

简介：目的研究丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（HCV-RNA）载量与抗-HCV含量以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平之间的相关性和符合性。方法用FO-PCR法检测146例高度怀疑丙肝感染的血清中的HCV-RNA，同时检测抗-HCV和ALT.结果146份标本中HCV-RNA阳性率为55．5％（81／146）;抗-HCV的阳性率为58．2％（85／146）;ALT异常率为54．8％（80／146）。HCV-RNA平均我量为6．98×10^5拷贝／ml血清。抗-HCV滴度和ALT异常率随着HCV-RNA载量升高而增加。结论用FQ-PCR法检测HCV-RNA可以确定：（1）高滴度抗-HCV血清具有传染性；（2）抗-HCV与HCV-RNA之间呈正相关关系r=0．980，P〈0．001，且有符合性和互补性：（3）对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性，若出现HCV-RNA阴性或阳性可以鉴别活动性、复制性程度；（4）评价抗病毒治疗效果的重要指标。

简介：目的研究ELISA法定量测定钙调素(CaM)的最优条件。方法用重组人CaM、免抗CaM，通过对聚苯乙烯反应板进行紫外辐照处理，改善抗原因相化条件；通过对抗原包被液、包被时间等条件优化，建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。结果以pH7．40．01mol/L的PB为包被液，包被及后续封闭时间为4℃静置72h，CaM包被浓度为5-8g/ml，抗原抗体反应时间为37℃60min，可获最佳CaM定量结果。结论建立的检测CaM的ELISA测定方法，敏感性、重复性均在临床检测可接受的范围内，标准曲线的线性也较好，可用于细胞内外CaM的定量研究。

简介：在医学基础研究和临床应用的诸多领域中,由单纯PCR技术提供的定性结果存在着较多的局限性,对核酸进行基因及其表达等的定量检测是分子生物学发展的一大方向.因此,在对目前常用的定量方法进行简述的基础上,对其中应用最为广泛的竞争性核酸定量检测技术的原理、方法、优缺点等的研究进展进行了综述.

简介：目的：用荧光定量RT－PCR（FQ－RT－PCR）法检测消化系统肿瘤患者mdr-1基因的表达，以了解该基因的表达水平。方法：用荧光定量RT－PCR（FQ－RT－PCR）方法。结果：75例本中mdr-1基因表达阳性率为37．3％（28／75），mdr-1基因平均表达量为10^4.88±1.15拷贝／ml。结论：FQ－PCR方法检测mdr-1基因表达具有简便，准确，特异性强，可定量等优点，对化疗方法的制定，疗效的预测及考察有重要指导作用。

简介：目的：建立一种灵敏度高、特异性好、精密度高、操作简便的荧光实时定量PCR技术，对临床标本中的TTVDNA进行定量检测。方法：设计针对TTV基因保守序列非转录区(UTR)的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段与PUCm—T载体连接并进行克隆，提取重组质粒以极限稀释法进行定量，作为定量检测的标准品。通过对重组质粒的测序来验证方法的特异性。通过与套式PCR—ELISA方法阳性检出率的比较，显示本方法学的高灵敏度。在临床研究中，通过对36例丙肝患者及123例不同血清标志物阳性的乙肝患者，166例健康体检者血清中TTVDNA的定量检测，评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。此外还观察了乙肝患者不同血清ALT水平组别TTVDNA阳性检出率的差别。结果：本方法检测TTV—DNA的灵敏度高于基于ORFl的普通套式PCR—ELISA方法，重组质粒测序结果显示方法有很好的特异性；通过重组质粒标本梯度稀释检测显示该方法的线性范围为10^2-7拷贝／ml；批间CV为13．2—16．0％，批内CV为6．5．0—11．3％。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群的血清TTVDNA定量结果分别为10^4.11±0.97、10^3.91±1.07、10^3.89±0.99拷贝／ml；三组人群TTVDNA阳性检出率无差异显著性；且乙肝患者(TTVDNA+)血清ALT水平与TTVDNA载量无相关显著性(P>0．1)；乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无差异显著性(P>0．1)。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化，适合于临床实验室进行临床标本的TTV—DNA定量检测。

简介：本文采用荧光定量PCR法对49例慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA作定量检测,分析血清HBVDNA水平与疾病程度和HBV血清标志物(HBVM)的关系,探讨血清HBVDNA定量检测的临床意义。资料与方法一、检测对象参照1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。慢性乙型肝炎49例,均存在肝功能异常,其中轻度19例、中度13例、重度17例。男42例,女7例。年龄18～78岁,平

简介：MDR1基因的表达量与肿瘤细胞的耐药性呈正相关且在多种肿瘤组织中都有过度表达。准确监测肿瘤病人MDR1基因表达情况对选择化疗方案和提高化疗效果有重要作用。在检测MDR1基因表达的方法中RT-PCR检测MDR1的过程中一般使用β肌动蛋白作为外参照,通过计算MDR1cDNA与β肌动蛋白cDNA的比值来表示MDR1基因的表达量。这样只能得到MDR1基因相对β肌动蛋白基因的表达量,而不能测出其绝对表达量。而且扩增

简介：目的检测大鼠肢体缺血-再灌注后脑组织iNOS基因表达的变化.方法SD大鼠,随机分为肢体缺血-再灌注(I-R)组、肢体单纯缺血(I)组及正常对照(N)组,通过夹闭腹主动脉末端4?h,或/和开放2～24?h,复制I、I-R组动物模型,半定量RT-PCR方法检测脑组织iNOSmRNA表达的变化,免疫组化染色法观测脑组织内iNOS及过氧亚硝基阴离子(ONOO-)的硝基化产物硝基酪氨酸(NT)的生成与分布.结果N组脑组织iNOSmRNA未检出,I组及I-R组脑组织iNOSmRNA均有表达,再灌注2?h,iNOSmRNA表达量显著升高(P<0.01,vsN组),再灌注6?h达到高峰,随后下降,24?h仍有少量表达;I及I-R组脑组织均有iNOS阳性细胞,I-R组见于大脑皮层各区、海马、尾状核,I组仅见于皮层后肢区及尾状核.I-R组脑组织可见弥散分布的NT阳性神经元,I组偶见NT阳性神经元.结论大鼠肢体缺血-再灌后脑组织iNOS基因表达显著增强,且有时相变化特征.

简介：生产中定量纸的纸机目前国内数量最多，使用最普遍，因此对其进行计算机自动控制也最有意义，本文介绍了中定量纸纸机计算机控制系统的设计思想，建模方法、控制策略、软件结构、仪表与计算机配置等方面内容。

简介：目的建立人颗粒溶素（granulysin.GNLY）mRNA荧光定量的检测方法，构建克隆载体pMD18-T-GNLY作为定量模板，在ABI7900HT型实时荧光定量PCR检测仪上通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，来建立实时荧光定量RT-PCR方法，并检测了40名正常健康献血者外周血中GNLY的表达。结果本方法的动态检测范围为10^3～10^9拷贝／μgRNA（r^2≥0.996），内参18srRNA的动态检测范围为10^3～10^8拷贝/μgRNA（r^2≥0.996）；低值的批内、批间的重复性分别为10.33％和17.32％，高值的批内、批间的重复性分别为6．41％和8．46％；而40名正常健康人外周血的PBMCs中均有GNLYmRNA的表达，范围为3.12×10^6～4．32×10^7拷贝／μgRNA，均值为（2．0±1．3）×10^7拷贝／μgRNA。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法，检测结果可用绝对拷贝数表示，定量准确可靠。GNLYmRNA荧光定量测定方法的建立为研究GNLYmRNA表达水平与感染性疾病免疫机制的关系奠定了基础。

简介：运用荧光定量检测的方法,比较了CTAB法、试剂盒法和SDS法提取大豆加工样品的优劣.通过测定其内源基因Lectin得到的Ct值大小比较基因表达水平的高低,通过标准加入法得到标记基因35S和内源基因LectinCt值的差值ΔCt值,结合标准曲线,计算出每种混合样品中转基因成分的百分含量,进而比较这三种提取方法对PCR反应的抑制程度.总体说来,CTAB法提取大豆加工样品得到的核酸最适合PCR反应,其次是试剂盒法,SDS法稍差.

简介：<正>对1025份临床血清标本用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法进行HBVDNA定量检测,并同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙肝免疫学指标的对比检测。结果:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式HBVDNA阳性率为99.2％(390/393),其平均拷贝数为4.65×10E8拷贝/ml:在HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式中HBVDNA阳性率为62.5％

简介：摘要目的简要了解我市儿童乙型肝炎(下称乙肝)病毒表面抗体的浓度，以观察该群体抵御乙肝病毒侵入的能力。方法以磁微粒化学发光免疫分析仪定量检测525名儿童的乙肝病毒表面抗体(HBsAb)浓度，然后对所有结果进行统计分析。结果在525名儿童中,乙肝病毒表面抗体（HBsAb）浓度值≦10mIU/ml126人,完全不具有抵御乙肝病毒(HBV)入侵的能力,需要立即进行乙肝疫苗的接种；HBsAb浓度值在10-100mIU/ml150人,具有部分抵御HBV入侵的能力,需要进行乙肝疫苗加强接种；HBsAb浓度值≧100mIU/ml249人,具有抵御HBV入侵的能力,不需要进行乙肝疫苗接种。结论许多儿童不具有和不完全具有抵御HBV入侵的能力,需要进行乙肝疫苗接种,以预防乙肝。