简介:目的:在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS株,生产重组颗粒溶素(GNLY)。方法:选取含pET28a(+)-GNLY的BL21(DE3)pLysS菌株单个克隆分级培养,将制备的二级种子液接种于发酵罐中。在发酵过程中,控制溶氧为30%~50%,温度为37℃;在基础培养基内生长4h后,补加以甘油为碳源的补料,继续生长到11h;加入葡萄糖至终浓度为1%,30℃诱导表达6h;收集菌体,纯化制备目的蛋白。利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性,用CFU方法检测其生物学活性。结果:发酵液中最终菌体密度达80g/L;纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%,含量为60mg/L;经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性。结论:用含重组质粒pET28a(+)-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达系统,可得到具有生物活性的重组颗粒溶素,为大批量生产提供了条件。
简介:目的建立人颗粒溶素(granulysin.GNLY)mRNA荧光定量的检测方法,构建克隆载体pMD18-T-GNLY作为定量模板,在ABI7900HT型实时荧光定量PCR检测仪上通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板,来建立实时荧光定量RT-PCR方法,并检测了40名正常健康献血者外周血中GNLY的表达。结果本方法的动态检测范围为10^3~10^9拷贝/μgRNA(r^2≥0.996),内参18srRNA的动态检测范围为10^3~10^8拷贝/μgRNA(r^2≥0.996);低值的批内、批间的重复性分别为10.33%和17.32%,高值的批内、批间的重复性分别为6.41%和8.46%;而40名正常健康人外周血的PBMCs中均有GNLYmRNA的表达,范围为3.12×10^6~4.32×10^7拷贝/μgRNA,均值为(2.0±1.3)×10^7拷贝/μgRNA。结论成功建立了人GNLY基因表达含量的荧光定量检测方法,检测结果可用绝对拷贝数表示,定量准确可靠。GNLYmRNA荧光定量测定方法的建立为研究GNLYmRNA表达水平与感染性疾病免疫机制的关系奠定了基础。
简介:摘要目的探讨颗粒溶素在精索静脉曲张(VC)患者精液的表达水平及临床意义。方法选择2016年9月至2017年7月在本院就诊的80例男性不育患者作为观察组,其中45例为原发性VC(VC不育组),35例患者不合并VC(非VC不育组)。同时,本研究选取30例健康男性为可育对照组。检测所有入组精液精子密度、精子活动率、精子正常形态比例以及颗粒溶素的表达水平。结果VC不育患者精浆颗粒溶素的表达水平均显著高于可育对照组;此外,与非VC不育患者相比较,VC不育患者精浆颗粒溶素水平更高;精浆颗粒溶素的表达与精子浓度(r=-0.364,P<0.001)、精子活力(r=-0.397,P<0.001)和精子正常形态(r=-0.441,P<0.001)均呈负相关。结论不育合并VC患者精浆颗粒溶素表达水平显著高于正常健康人群,且其表达水平与VC等级密切相关。
简介:目的:建立护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量,色谱柱HederaODS-2柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸,梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长360nm,柱温为35℃.结果:槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在0.0768-1.92μg,0.02004~0.501μg,0.021~0.525μg范围内进样量与峰面积积分值线性关系良好,r分别为0.9999、0.9998、0.9999,加样回收率分别为97.4%、98.1%、97.9%,RSD分别为1.4%、1.8%、1.3%.结论:该方法准确、稳定,可以用来同时测定护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量.
简介:好氧颗粒污泥外表和内在的不同溶氧(dissolvedoxygen,DO)水平分别适合硝化和反硝化微生物的生长,形成具有同步硝化反硝化功能的脱氮体系。DO水平对颗粒污泥内部厌氧好氧区域的构成有影响,改变DO可以研究氧对好氧颗粒污泥同步硝化反硝化过程的影响。结果屈示,反应系统在一定DO参与下时有机物的去除效率较高,各种条件下均能达到90%左有;高DO(≥30mg/L)提商硝化速率,但易造成反应过程中NO2^-和NO3^-的积累;低DO(≤2.0mg/L)下反应积累的硝化产物少;在颗粒污泥同步硝化反硝化反也过程中适当控制供氧,可减少运行过程中N2O的排放。实验条件下,控制DO在1~2mg/L为佳;在低DO情况下,NO2^-通过短程反硝化反应直接还原为气态的N2O和N2;高DO情况下,大部分NO2以全程反硝化方式还原为气态氮。好氧颗粒污泥具有良好的硝化反硝化能力,阿DO对硝化反硝化过程有很大的影响,且低DO更有利于氮的盘除和N2O排放量的降低。
简介:以纤维素为骨架,丙烯酸(AA)为单体,采用接枝共聚方法在85%磷酸溶液反应介质中合成了pH值敏感水凝胶(C-gAA)。主要研究了C-g-AA水凝胶的pH值敏感性及在不同pH值溶液(pH值分别为1.15,6.86,11.05)中的溶胀可逆性和溶胀动力学行为,并与在去离子水中的溶胀行为进行对比。结果表明,C-g-AA水凝胶的溶胀比随着凝胶中AA组分的增加而增加,最高可达73%;水凝胶溶胀具有明显的pH值敏感性,当pH值〉7时达到溶胀平衡,水凝胶对pH值的溶胀可逆性良好;不同pH值溶液中的溶胀动力学表明,溶胀初期水分子在水凝胶中的扩散行为可用non-Fickian扩散定律来描述,整体溶胀行为满足Schott二级动力学方程,而在去离子水中,水凝胶溶胀初期的扩散特征指数同样保持稳定,但整体溶胀行为却不遵循Schott二级动力学方程。
简介:摘要目的研究催产素加新生化颗粒用于药物流产的效果观察。方法选择我中心门诊自愿药流的健康妇女240例,随机分为研究组与对照组各120例,研究组在服用米索前列醇3小时后肌注催产素20U,l次/d,连用3d,并同时口服新生化颗粒12g/次,2次/d,连用7d。对照组在孕囊排出后口服抗生素预防感染。结果两组完全流产率比较差异有统计学意义(P<O.05)。两组平均出血时间比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者阴道出血量间差异有统计学意义(P<0.05)。结论催产素加新生化颗粒用于药物流产可以提高完全流产率、缩短阴道出血时间、减少出血量,有临床应用价值。