简介:目的探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性。方法首先,比较了两种流行的商业化载体:开放式拉长麦管(openpulledstraw,OPS)和冷冻帽(cryotop)开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果。其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体(cryotip)开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存。之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析。结果OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性(P〉0.05),但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性(P〉0.05),数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组。结论OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的。
简介:摘要目的对自制冷冻片微型载体(Strawtop)法与麦管法冷冻保存人微量精液的冻存效果进行系统评价。方法采用前瞻性研究分析2018年5月1日至2018年6月30日期间于同济大学附属东方医院生殖医学中心行卵胞质内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的患者捐献的部分精液样本,比较自制Strawtop法与麦管法冷冻人精子复苏后的冷冻复苏率、DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)、超显微结构和受精能力与胚胎发育情况。结果Strawtop法冻存人精子的冷冻复苏率(46.8%±17.1%)显著高于麦管法(23.1%±13.7%,P=0.001);与冷冻前(18.9%±11.6%)相比,麦管法(33.5%±15.0%)冷冻精子复苏后的DFI显著增加(P=0.019),而Strawtop法冻融人精子的DFI(23.4%±11.7%)与冷冻前相比差异无统计学意义(P=0.375);Strawtop法对冷冻精子超显微结构的损伤低于麦管法;Strawtop法冻融精子、麦管法冻融精子和新鲜精子的正常受精率、卵裂率和受精后48 h(第2日)的优质胚胎率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Strawtop法冷冻人微量精液冷冻复苏率高于麦管法,复苏精子的损伤较小,且复苏后无需离心洗涤即可直接用于ICSI,具有较高的临床应用价值。
简介:摘要:斑点叉尾鮰,亦称沟鲶,属于鲶形目,鮰科,原产于美国,是美国最主要的淡水养殖食用鱼类。其肉质鲜嫩,富含多种人体必需的氨基酸、不饱和脂肪酸和维生素等,营养价值非常高,同时还具有降血脂、调节免疫力、益智健脑、补肾明目、减肥抗衰老等保健功效,一直以来深受消费者喜爱。自 1984年被引入我国后,总产量和养殖面积不断增加,但是目前国内市场对于斑点叉尾鮰仍以鲜活销售为主,加工包装销售的产品相对较少,尤其缺少适应现代快节奏城市生活,既营养又食用方便的调理鱼产品。用五香调味液腌制的斑点叉尾鮰,经过真空包装后,不仅营养美味,食用方便,且在一定程度上可以延长斑点叉尾鮰的货架期,提高其经济价值。
简介:目的探讨不同品系小鼠的体外受精、胚胎和精子的低温保存效果.方法本实验分别在中国科学院上海实验动物中心(SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心(CARD)对13个品系小鼠(C57BL/6J、BALB/c、C3H/HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA/2、CD-1、BDF1、B6C3F1)的体外受精(IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究.结果各品系小鼠新鲜精子的IVF率15.1%~87.9%,冻融精子的IVF率8%~80%;冷冻胚胎的复苏率42.6%~83.9%;冻融胚胎移植后的产仔率在17.8%~51.8%.结论遗传背景不同的小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植的产仔率差异有显著性.但同一品系两个实验室间的新鲜精子的IVF率、冷冻胚胎的复苏率及移植产仔率差异无显著性(P>0.05);冻融精子的体外受精率CARD明显高于SLAC(P<0.01).
简介:摘要目的根据IRES末端序列的不同,构建4个GFP表达强度不同的逆转录病毒载体,为后续流式检测或成像提供基础。方法利用脑心肌炎病毒IRES的转录效率依赖于其末端的基因序列,通过重叠PCR方法将IRES与EGFP融合成4个不同连接方式的片段,然后克隆至逆转录病毒载体pMSCV-NGFR中;PCR扩增NGFR片段,克隆至逆转录病毒载体pMSCV-IRES-EGFP前面;逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP转染293T细胞,分析EGFP的表达比例和平均荧光强度(MFI),同时分析NGFR的表达。结果成功构建4个逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP;在293T细胞转染4个逆转录病毒载体,24 h和48 h时EGFP的表达效率没有明显差异,但荧光强度却有明显不同,同时NGFR的表达没有明显不同,说明IRES与EGFP之间加入不同的核苷酸序列,会使EGFP的荧光强度呈现明显差异。结论EGFP的表达强度受IRES与EGFP之间序列的影响,不同强度EGFP的逆转录病毒载体可以适用于不同的实验要求。
简介:摘要目的探讨冷冻胚胎周期不同年龄段患者如何制定移植策略。方法回顾性队列研究分析浙江省宁波市妇女儿童医院生殖中心取卵后全胚冷冻并于2018年1月至2020年4月期间首次行冻融胚胎移植患者的临床资料,根据患者的年龄分为三组,即≤30周岁组(1150个周期)、30~35周岁组(932个周期)及>35周岁组(405个周期);在每个年龄组内,再根据移植胚胎级别及移植数目分为第3日单卵裂期胚胎移植(single cleavage stage embryo transplant, SET3) 亚组、第5日单囊胚移植 (single 5th day blastocyst transplant, SET5) 亚组、第 6 日单囊胚移植 (single 6th day blastocyst transplant, SET6) 亚组、第3日双卵裂期胚胎移植(double cleavage stage embryo transplant, DET3)亚组、第 5 日双囊胚移植 (double 5th day blastocyst transplant, DET5) 亚组、第6日双囊胚移植 (double 6th day blastocyst transplant, DET6) 亚组。所有患者均随访至2020年6月30日,比较同一年龄组内各亚组的临床结局。结果①≤30周岁组: SET5亚组临床妊娠率、持续妊娠率及活产率分别为66.17%(221/334)、60.48%(202/334)及35.93%(120/334),分别高于SET3亚组[41.18%(28/68)、36.76%(25/68)、25.00%(17/68), P<0.001、P=0.001、P=0.045]及SET6亚组[54.42%(80/147)、43.54%(64/147)、27.21%(40/147), P<0.001、P=0.001、P<0.001]; DET5亚组多胎率[47.80%(76/159)]高于DET6亚组[29.49%(23/78)](P=0.007)。 ②30~35周岁组:SET5亚组临床妊娠率、持续妊娠率及活产率分别为63.59%(138/217)、55.30%(120/217)及29.95%(65/217),分别高于SET3亚组[30.65%(19/62)、27.42%(17/62)、14.52%(9/62), P<0.001、P<0.001、P=0.015]; DET5亚组多胎率[56.86%(58/102)]高于DET3亚组[32.54%(41/126)]及DET6亚组[28.57%(16/56)],差异均有统计学意义(P<0.001及P=0.001)。③35周岁以上组: SET5亚组临床妊娠率、持续妊娠率及活产率[53.45%(31/58)、39.66%(23/58)、20.69%(12/58)]与SET6亚组[43.75%(21/48)、35.42%(17/48)、16.76%(8/48)]比较,差异均无统计学意义(P=0.320、P=0.655、P=0.583),高于SET3亚组[16.98%(9/53)、15.09%(8/53)、7.55%(4/53), P<0.010、P=0.004、P=0.049]; DET5亚组临床妊娠率及持续妊娠率[66.67%(26/39),53.85%(21/39)]均高于DET3亚组[33.89%(61/180),27.22%(49/180)],差异均有统计学意义(P<0.001,P=0.001); DET5亚组临床妊娠率高于DET6亚组[51.85%(14/27)],差异有统计学意义(P=0.001)。结论对各年龄组患者,应尽量选择单胚胎移植,避免移植2个第5日囊胚;移植胚胎首选第5日单囊胚。