简介：本实验在综合分析目前国内外人胚胎生殖细胞（EG细胞）的培养条件后，采用组织块培养法，以同源胚胎的成纤维细胞为饲养层，在不添加任何细胞因子的情况下，对人EG细胞进行体外培养。该培养体系确保了在培养过程中人EG细胞有充足的来源，避免了胰酶以及一些机械操作对原始生殖细胞（PGCs）的损伤，同时也避免了由于用小鼠成纤维细胞做饲养层，而对培养体系造成的异种蛋白的污染。这是关于建立人EG细胞合适的体外培养体系的一次有意义的探索。

简介：目的温对猴骨髓基质干细胞(BMSCs)进行体外培养及扩增，观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点。方法抽取4只成年猴髂骨骨髓，用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs，胰酶消化传代，用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况，对传代细胞进行HE染色及碱性磷酸酶(ALP)染色。结果成年雄性恒河猴BMSCs体外培养生长良好，原代细胞10-13d汇成单层，传代后4～7d长满瓶底。HE染色光镜下观察见BMSCs为单核细胞，细胞呈梭形、多角形，传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论猴BMSc的体外培养增殖能力强，可诱导为成骨细胞，可作为灵长类动物骨组织工程的种子细胞。

简介：神经干细胞的研究是最近几年来神经科学及胚胎发育学的热点问题。人们通常认为成年哺乳动物的中枢神经系统组织是不可再生的，中枢神经系统损伤或神经系统退行性病变将只能由神经胶质爬行替代，遗留难以弥补的神经系统功能缺损。而神经千细胞特别是在成年哺乳动物中枢神经系统中发现的神经千细胞对以上观点产生了巨大的冲击。随着神经干细胞的研究深入，必将为神经系统损伤性、退行性疾病的彻底治愈，甚至神经移植治疗带来一次革命性突破。

简介：目的：建立体外分离培养人脂肪间充质干细胞（hADSCs）的方法。方法采用酶消化法分离培养hAD-SCs，流式细胞仪检测细胞免疫表型，台盼蓝染色计数绘制细胞生长曲线并计算倍增时间，油红和VonKossa鉴定成脂成骨多向分化能力。结果成功从脂肪中分离纯化得到hADSCs，呈放射状、河流状的梭形细胞。流式结果显示hADSCs高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166等，低表达或不表达CD45和HLA-DR。生长曲线和倍增时间显示自我更新及增殖能力强。成脂和成骨染色显示其有多向分化能力。结论实验表明建立了一种有效的hADSCs体外分离培养方法。

简介：本文报告应用体外培养异体表皮细胞片移植于Ⅲ度烧伤创面的方法。临床应6用例,4例获得成功,2例因感染而失败。待进一步研究,以便更有效的应用于临床。

简介：目的探讨体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的可行性,分析其部分表型特点,为细胞移植治疗中枢神经系统疾病奠定基础.方法采用贴壁筛选法分离纯化大鼠MSCs,进行培养,传代扩增,免疫组化鉴定细胞是否表达具有干细胞特性的标记抗原-神经巢蛋白(nestin),并用流式细胞仪进行荧光检测初步鉴定.结果分离后的MSCs出现增殖性生长,免疫组化显示巢蛋白(nestin)表达阳性,经流式细胞仪检测显示CD44,CD90阳性,CD45阴性.结论在体外可培养出较大丰度大鼠骨髓间充质干细胞,而且此方法简单易行.

简介：目的探讨成骨细胞在细菌纤维素/聚乳酸/羟基磷灰石复合支架中的生长和增殖情况。方法将成骨细胞以5×104/ml的密度接种于细菌纤维素（BC）、细菌纤维素/聚乳酸（BC/PLA）、细菌纤维素/聚乳酸/羟基磷灰石（BC/PLA/HA）三种支架中,进行体外培养。采用MTT比色法测定1、3、5、7d的成骨细胞增殖情况;碱性磷酸酶活性测定法检测3、6、9d的碱性磷酸酶活性变化,并通过扫描电镜观察细胞在复合支架中的形态变化。结果实验组与对照组比较1、3、5、7d细胞的增殖量（OD值）有统计学差异（p〈0.05）,其中BC/PLA/HA组的OD值高于其他实验组;第3d至第9d三组细胞的ALP分泌量均呈上升趋势,各组间比较均有统计学差异（p〈0.05）;复合培养6dSEM观察可见三组材料中均有细胞的粘附,BC/PLA/HA组的细胞生长状态好于其他两组材料。结论BC/PLA/HA较BC/PLA和BC有利于成骨细胞的增殖和生长。

简介：肌源性干细胞（muscle-derivedstemcell,MDSC）是在肌肉中发现的多功能干细胞。因其来源丰富,取材便捷和体外移植存活率高等特点,因而在血液病的治疗中MDSC展示出良好的应用前景。研究人员对MDSC进行体外培养时,在取材鼠的选择、MDSC分离和纯化等实验方法方面存在较大差异。此外,促进MDSC体外增殖并向造血细胞分化的培养条件以及相关作用机制还不清晰。本文主要就体外培养MDSC向造血方向转化的实验研究现状作一综述,讨论的具体问题包括MDSC的体外培养,MDSC的鉴定,MDSC的增殖和MDSC向造血方向的分化等。

简介：目的　观察体外培养组织工程皮肤的生物学活性。　方法　将表皮细胞和(或)成纤维细胞种植于脱细胞真皮表面,经培养后形成各种皮肤替代物,分别于接种后3、7d时收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定白细胞介素(IL)6、IL8和转化型生长因子β1(TGFβ1)的含量,采用放射免疫法测定层粘连蛋白、透明质酸、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的含量。　结果　各皮肤替代物上清中均可检测到一定量的细胞因子、生长因子和细胞外基质成分,培养7d与3d时相比,除TGFβ1外,其余各指标的含量均明显上升(P<0.01)。含表皮细胞和成纤维细胞的皮肤替代物与单纯含成纤维细胞的皮肤替代物相比,培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(P<0.01)。　结论　体外培养的皮肤替代物具有较强的生物学活性,种植表皮细胞对成纤维细胞的功能具有一定的调节作用。

简介：视网膜Müller细胞是一种特化的神经胶质细胞,其贯穿着整个视网膜,为神经元细胞提供营养、促进视网膜祖细胞向神经元分化[1]及保护光感受器细胞等[2]功能;同时也通过多种途径参与视网膜的病理生理过程[3]。因此,建立Müller细胞有效的体外培养体系,有利于进一步研究其在视网膜的生理活动及病理过程中所起的作用。目前国内外学者都在努力探寻体外稳定地培养大量单一Müller细胞的有效方法。现就Müller细胞的培养、分离、纯化、鉴定等方法的研究进展作一综述。

简介：目的通过原代培养人子宫内膜细胞,进而建立正常子宫内膜的体外模型,同时观察不同月经周期内膜细胞的培养特性。方法选择因子宫肌瘤而行子宫全切术的12例患者,取子宫内膜细胞进行分离、纯化和培养。并用免疫细胞化学法进行鉴定。结果12例患者中10例培养成功,在不同月经周期取材的内膜标本其培养细胞生长的数量、质量、成活率及形态上无明显差异;免疫细胞化学法结果显示,间质细胞CK19染色阴性,Vimentin染色阳性,阳性率90%,阳性细胞胞质呈棕黄色;腺上皮细胞CK19染色阳性,Vimentin染色阴性,阳性率85%,阳性细胞胞质染成棕黄色。结论本实验成功对子宫内膜细胞进行了体外的分离培养及鉴定,为研究细胞的生长、分化和代谢以及性激素的作用机制提供了一个理想的实验模型,同时认为内膜细胞的各种培养特性不存在明显的月经周期性改变。

简介：目的软骨微环境对软骨形成具有重要作用。本实验探讨软骨细胞与成纤维细胞共培养体外构建软骨的可行性。方法分别培养猪软骨细胞与人成纤维细胞,将两种细胞按3:7(软骨细胞:成纤维细胞)比例混匀,以5．0×107／ml终浓度接种于聚羟基乙酸支架(PGA,直径9mm,高2mm)作为共培养组,相同终浓度单纯软骨细胞和单纯成纤维细胞分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照。每组各接种3例标本,每例接种细胞悬液200μl。全部标本均体外培养12周后取材,通过大体观察、组织学及免疫组化等检测对构建软骨进行评价。结果各组细胞均与材料支架粘附良好。体外培养12周后,阳性对照组(软骨细胞组)及共培养组均形成成熟的软骨样组织,组织学及免疫组化显示有成熟的软骨陷窝样结构及Ⅱ型胶原表达。软骨细胞组在体外培养过程中能基本保持复合物初始的大小和形状,形成的软骨在组织学上也教为均匀一致。共培养组在培养过程中稍有缩小,在复合物的周边区域形成了均质的软骨样组织,但在近中心区域存在一定量的纤维性组织。阴性对照组(单纯成纤维细胞组)在体外培养过程中逐渐皱缩变形,未形成软骨样组织。结论软骨微环境在体外软骨分化及软骨形成中具有重要作用,软骨细胞与成纤维细胞体外共培养能形成软骨样组织。

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简介：目的观察胰岛素对体外培养兔骨骼肌肌管蛋白降解的调节作用。方法无菌分离幼兔下肢骨骼肌肌肉，采用组织块法分离、培养成肌细胞，待其融合形成肌管，采用L-[3，5-^3H]．酪氨酸标记肌管内蛋白后，随机分为对照组（用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）、胰岛素组（用含100nmoL／L胰岛素＋体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）、地塞米松组（用含100nmoL／L地塞米松＋体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）和胰岛素＋地塞米松组（用含100nmol／L胰岛素＋100nmol／L地塞米松＋体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养），每组含24孔肌管。培养24h后，应用液体闪烁计数仪测定培养液和肌管内L-[3，5-^3H]．酪氨酸的含量，计算肌管内蛋白的降解率。RNA印迹法测定肌管内泛素-蛋白酶体C2亚基mRNA的表达水平，以其与内参照甘油醛-3-磷酸脱氢酶的灰度值之比表示。结果肌管内蛋白的降解比：地塞米松组为0．50±0．03，明显高于对照组（0．38±0．04，P〈0．01）；胰岛素组为0．35±0．03，明显低于对照组（P〈0．05）；胰岛素＋地塞米松组为0．41±0．03，明显低于地塞米松组（P〈0．01），但仍高于对照组（P〈0．05）。肌管内泛素-蛋白酶体C2亚基的mRNA表达水平：与对照组（泛素2．4kb条带为0．82±0．15、1．2kb条带为0．60±0．10，C2亚基为0．75±0．16）比较，地塞米松组（泛素2．4kb条带为2．15±0．23、1．2kb条带为1．50±0．14，C2亚基为1．50±0．13）明显升高（P〈0．01）；胰岛素＋地塞米松组（泛素2．4kb条带为1．25±0．17、1．2kb条带为0．85±0．09，C2亚基为0．90±0．15）明显低于地塞米松组（P〈0．01）；胰岛素组（泛素2．4kb条带为0．85±0．07、1．2kb条带为0．65±0．12，C2亚基为0．76±0．09）与对照组相近（P〉0．05）。结论胰岛素对兔骨骼肌肌管内�

简介：目的探讨调控体外培养大鼠血管平滑肌中微小RNA-21(microRNA-21,miRNA-21)的表达水平对该类细胞迁移和侵袭能力的影响。方法0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离血管平滑肌细胞并进行培养,用免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白的表达。试验分为6组:空白对照组(加DEPC水)、单纯转染试剂组(仅加lipofectamineTM2000)、阴性对照组(转染阴性对照序列)、上调miRNA-21组(转染miRNA-21拟似物)、下调miRNA-21组(转染miRNA-21阻遏物)、无关序列组(转染无关序列)。利用lipofectamineTM2000将miRNA-21转染到培养的血管平滑肌细胞中,采用real-timePCR分别检测各组细胞miRNA-21的表达水平。采用细胞划痕实验分别检测各组细胞体外迁移能力的变化和transwell侵袭小室模型分别检测各组细胞侵袭能力的变化。结果原代血管平滑肌细胞在相差显微镜下呈现‘谷和峰’的生长特点,胞浆内α-肌动蛋白染色阳性的细胞数占总细胞数的98%以上。与对照组相比,上调miRNA-21组的血管平滑肌细胞体外迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05),下调miRNA-21组的血管平滑肌细胞体外迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miRNA-21可以促进血管平滑肌细胞迁移和侵袭。

简介：目的探索物理混合及化学交联两种方法制备的细菌纤维素（BC）/明胶支架材料用于成骨细胞体外培养的可行性。方法采取物理混合和化学交联两种方法将BC和明胶两者结合制备出海绵状复合体,接种成骨细胞后培养观察细胞形态,考察ALP活性表达,HE染色和共聚焦观察材料表面细胞情况和粘附。结果物理混合法制备的BC/明胶细胞增殖和粘附性能,ALP表达量优于单纯BC和化学交联制备的BC/明胶。结论物理混合法制备BC/明胶复合支架材料可以作为成骨细胞体外培养的良好载体。

简介：背景：神经生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化，促进其生长、发育，维持其功能方面具有不可替代的作用。目的：观察灯盏花素对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响，并初步探讨其机制。方法：取新生SD大鼠胚胎，取其大脑皮质后，对神经元进行原代培养，随机分为3组，其中灯盏花素组加入10g/L灯盏花素，对照组加入等量生理盐水，正常组不作任何处理，各组又分为24h、48h亚组。对24孔板中各组细胞各时间点采集图像，之后采用RT-PCR技术检测神经生长因子、酪氨酸激酶AmRNA的表达变化。对96孔板中各组细胞不同时间点采用MTT检测神经元生长活力。结果与结论：正常组和对照组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异（P〉0.05），但正常组及对照组均有随时间点延长，3个指标均上调（P0.05），灯盏花素组各时间点较正常组和对照组上调（P〈0.05）。提示灯盏花素促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长，其机制可能是通过上调神经生长因子及其受体TrkA的表达发挥作用。

简介：目的建立犬骨髓单个核细胞（Bonemarrowmononuclearcells,BMNCs）的分离培养、体外扩增和成骨诱导方法,为骨缺损的修复提供理想的骨组织工程种子细胞。方法用1.063g/mlpercoll液分离2.5mlBeagle犬骨髓,利用细胞贴壁筛选法进行分离、培养、扩增和成骨诱导。结果采用1.063g/mlpercoll液可获得纯度较高的BMNCs,接种细胞生长良好,平均倍增周期为1d,经成骨诱导培养后可定向分化为成骨细胞。结论采用1.063g/mlpercoll液能够较好的进行Beagle犬BMNCs的分离培养和体外扩增,分离得到的细胞具备骨髓基质干细胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs）的特性。