简介:摘要目的评估三氯甲烷抽提冻融细胞沉淀内腺病毒颗粒的效果,建立一种提高氯化铯垫层超速离心纯化腺病毒产量的方法。方法收集感染腺病毒的HEK293细胞,反复冻融3次,离心后分别收获细胞冻融后上清及细胞残渣,使用三氯甲烷抽提细胞残渣内病毒颗粒,通过氯化铯密度梯度超速离心法纯化腺病毒。通过透射电子显微镜技术评价三氯甲烷抽提腺病毒的效果,通过分光光度计法及测定病毒感染滴度分析获得纯化腺病毒产量及活性。结果三氯甲烷可促进冻融细胞残渣内病毒颗粒释放,增加约34%病毒产量,且三氯甲烷抽提获得的腺病毒形态完整、活性良好。结论建立了一种通过三氯甲烷抽提细胞残渣增加腺病毒超速离心纯化产量的方法,为提高腺病毒纯化效率提供参考,以期满足科研需求。
简介:摘要目的建立并优化人冠状病毒NL63参考株(HCoV-NL63-NC_005831)的体外富集方法。方法以恒河猴肾细胞系(LLC-MK2)培养HCoV-NL63,以离心力135 000×g、分别离心病毒培养上清4 h、6 h、8 h、10 h和12 h以富集病毒,并以商品化PEG沉淀试剂盒富集方法作为对照。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、半数组织培养感染剂量(TCID50)和空斑实验对原始病毒液、富集病毒液分别进行病毒核酸和病毒生物活性定量检测,评价病毒富集效果;通过透射电镜负染观测病毒富集前后的形态。结果经层超速离心法及经PEG沉淀法分别进行体积100∶1富集处理,两种方法获得的富集病毒液相较于原液的病毒核酸浓度及活病毒浓度均有提高(P<0.001)。超速离心方法富集前后,电镜下观察到的病毒颗粒呈正常的负染形态;4 h、6 h、8 h、10 h和12 h超速离心后活病毒浓度平均分别是原病毒液的(7.35±1.62)倍、(13.98±1.71)倍、(36.36±10.41)倍、(48.16±9.38)倍、(54.26±7.02)倍,PEG沉淀后活病毒浓度是原病毒液的(3.39±0.16)倍,经超速离心法获得的富集病毒液的核酸浓度及活病毒浓度显著高于PEG沉淀法(P<0.05);8 h、10 h、12 h超速离心后病毒浓度显著高于4 h和6 h(P<0.05),但8 h、10 h、12 h之间病毒含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论超速离心法相较于商品化的PEG沉淀法能更有效富集HCoV-NL63病毒;离心力为135 000×g时,选择8 h的超离时间可获得较优的体外富集效果。
简介:摘要目的从力学性能、生物学性能、促进软组织再生效果等方面探讨水平离心制备的软组织再生用液态血浆基质的最佳离心时间,以期为液态血浆基质的临床应用提供参考。方法2021年9至11月采集武汉大学口腔医学院6名健康医师志愿者[男性3名,女性3名,年龄(26±2)岁]静脉血,以500 ×g离心力分别离心3、5、8和12 min,获取液态血浆基质。测量并记录各液态血浆基质的体积、质量、凝固时间以及凝块的力学性能(各时间点样本量均为3)。用扫描电镜观察各液态血浆基质凝块的微观结构;流变学测试检测各液态血浆基质凝块的流变性能;使用全血细胞计数检测全血以及各液态血浆基质中细胞数量和浓度;通过HE染色观察各液态血浆基质凝块中细胞分布;利用细胞迁移法检测对照组(含20%胎牛血清的高糖达尔伯克改良伊格尔培养液)以及3、5、8、12 min组(每组3个复孔)液态血浆基质凝块渗出液对牙龈成纤维细胞迁移的影响;用荧光显微镜观察对照组以及各组液态血浆基质凝块渗出液对牙龈成纤维细胞形态的影响。结果离心3、5、8和12 min的液态血浆基质体积分别为(2.47±0.12)、(2.67±0.12)、(3.53±0.12)、(3.73±0.12)ml,质量分别为(0.35±0.01)、(0.46±0.02)、(0.88±0.06)、(1.03±0.01)g,相应液态血浆基质凝块的最大拉伸力分别为(0.55±0.03)、(0.56±0.03)、(1.31±0.05)、(1.38±0.02)N。扫描电镜显示,随离心时间增加,液态血浆基质凝块内部纤维越来越致密。与全血及其他时间点相比,离心8 min的液态血浆基质白细胞、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞浓度最大,且细胞分布较均匀。相比其他组,8 min组牙龈成纤维细胞迁移率(1.60±0.01)最大。荧光染色显示,与对照组相比,液态血浆基质凝块渗出液培养的牙龈成纤维细胞更舒展。结论以500 ×g离心力离心8 min制备的液态血浆基质具有较高的活细胞浓度以及促牙龈成纤维细胞迁移的能力。
简介:摘要目的探讨毛细管超速离心法在地中海贫血患者鉴定Rh血型的应用价值。方法对本院49名反复输血的重型地中海贫血患者血样本分别进行直接测定Rh血型和经毛细管超速离心法分离自身红细胞并鉴定Rh血型。对比前后检测结果,分析毛细管超速离心法在地中海贫血患者中分离自身红细胞的运用价值。结果反复输血的重度地中海贫血患者经毛细管超速离心技术分离鉴定Rh血型的成功率与输血间隔期呈正相关(r=0.844,P<0.01)。63.26%(31/49)重型地中海贫血患者可以经过毛细管超速离心法分离自身红细胞并成功鉴定Rh血型。经分离鉴定成功的Rh分型结果比例分布为CCDee>CcDEe>ccDEE>CCDEE。结论毛细管超速离心分离自身红细胞有助于反复输血的地中海贫血患者Rh血型的鉴定,为其Rh配型输血,减少同型免疫反应提供基础。
简介:摘要目的探讨关节镜下清理联合等速离心训练治疗膝关节骨性关节炎的效果。方法抽取2021年3月至2022年3月开封市中心医院收治的158例膝关节骨性关节炎患者,按随机数字表法分为训练组和清理联合组,每组79例。训练组予以等速离心训练治疗,清理联合组予以关节镜下清理联合等速离心训练治疗。比较两组的治疗效果、治疗前后骨代谢指标[骨钙素(BGP)、降钙素(CT)、骨保护素(OPG)];统计视觉模拟评分法(VAS)、西大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)、Lysholm膝关节评分量表评分;记录膝关节屈曲角度;评价不良反应。结果清理联合组总有效率(97.46%,77/79)高于训练组(88.60%,70/79),P<0.05。治疗后,清理联合组VAS评分、WOMAC评分低于训练组,BGP、OPG水平、膝关节屈曲角度及Lysholm评分高于训练组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论关节镜下清理联合等速离心训练治疗膝关节骨性关节炎的效果较优,可改善骨代谢水平,促进患者快速恢复。
简介:摘要目的确定10 kg以下婴儿体外膜氧合(Extracorporeal Membrane Oxygenation ,ECMO)时,使用滚筒泵和离心泵病死率有无差异。设计回顾性倾向性匹配队列研究。场所所有向体外生命支持组织(Extracorporeal Life Support Organization,ELSO)报告的ECMO中心。对象2011至2016年期间,ELSO注册中心记录的所有行ECMO支持且<10 kg患儿。干预根据人口统计学变量,ECMO适应症,中心或外周血管插管以及ECMO前患者诊治情况预测接受离心泵的可能性,并据此倾向性匹配离心泵和滚筒泵接受者(1∶1)。测量和主要结果2011至2016年间ELSO注册中心共记录12′890名行ECMO治疗的10′kg以下患儿。所有患儿倾向性匹配成一组包含8′366样本的队列.分别倾向性匹配静脉-动脉和静脉-静脉ECMO患儿。除滚筒泵组中较早年的ECMO外(标准化平均差异=0.49),倾向性匹配队列相似。其中离心泵组的出院存活率较低(57%vs59%,OR 0.91,95%CI 0.83~0.99,P=0.04)。溶血、感染、肢体损伤、机械、代谢、神经、肺部和肾脏并发症在离心泵组中更为常见。组间出血并发症相似。溶血介导了离心泵与病死率的关系(间接效应=0.023,P<0.001)。结论该倾向性评分匹配队列研究纳入8 366名体重<10 kg的ECMO支持患儿,其中离心泵支持者病死率和ECMO并发症率较高。溶血被认为是离心泵和患儿死亡间关系的潜在介导因素,并且满足完全介导标准。
简介:摘要目的探讨pH值、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)含量和离心条件对PEG4000粉末用于去除人C1酯酶抑制剂(C1 esterase inhibitor,C1-INH)制备原料中的IgM效果的影响,并通过对羧甲基(carboxymethyl,CM)离子交换层析中洗脱盐离子浓度的筛选,分离活性与非活性C1-INH。方法向不同pH值的C1-INH制备原料中加入不同质量分数的PEG4000,于不同条件下离心后,用特定蛋白检测仪对离心后上清液中IgM和C1-INH含量进行检测,确定PEG沉淀法纯化C1-INH的最佳条件。将离心后上清液调节pH后作为CM离子交换层析上样样品,使用不同盐离子浓度的洗脱液对活性C1-INH进行分离,确定最佳的盐离子浓度。结果在弱酸性pH(6.8)下,当PEG4000质量分数为12%,离心条件15 000×g、25 ℃、20 min时,IgM去除率>99%,且C1-INH的回收率>80%;在盐离子浓度为200 mmol/L时,产物中C1-INH的比活性最大(4.43 IU/mg),且绝大多数杂质蛋白得以去除。结论优化条件下,PEG4000能有效去除C1-INH制备原料中的IgM,且能保持较高的C1-INH回收率;CM离子交换层析能对活性与非活性C1-INH进行有效分离,并去除大多数杂质蛋白。