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  • 简介:目的探索BALB/cC57BL/6两个品系在有关实验中不同作用。方法选取了结合随机测序与生物信息学分析设计合成神经系统表达一些基因反义核酸(antisense)中2个,用Hamilton微量注射器将其分别定量注射到BALB/cC57BL/6小鼠侧脑室,并分别设注射生理盐水和随机序列核酸(Scramble)对照组。每一反义核酸实验组和对照组各注射10只小鼠,之后观察实验组与对照组在不同行为学实验中差异。小鼠行为学检测模型为:考察日常代谢能力摄食量,考察Locomotionactivity(移动)旷场行为,考察疼痛阈值甩尾试验和考察记忆能力步下法实验。结果注射No.1基因反义核酸后,两品系实验组均在测试记忆力步下法(Step-downTest)试验中表现出记忆力减弱,且与对照组差异明显,说明No.1基因功能确与记忆相关。注射No.2基因反义核酸后,在测试移动能力旷场行为(OpenFieldBehavior)试验中,BALB/c实验组跨格、直立行为均比对照组明显减少,说明受此反义核酸影响显著,而C57BL/6实验组则与对照组无大差异。此外,在生理盐水对照组和随机序列核酸对照组实验中以及其他行为学模型实验中,两品系也存在着一定差异。结论用遗传背景不同多品系进行相关实验,可进一步建立新基因功能初筛中有显著结果基因复筛平台;同时,实验结果对于进一步研究什么样品系适用于什么样实验将具有较大意义。

  • 标签: 对照组 反义核酸 注射 行为学 实验 C57BL/6小鼠
  • 简介:目的BALB/c突变无毛小鼠皮肤和被毛结构突变是否影响机体免疫功能,为此研究其免疫功能.方法通过流式细胞仪和ELISA方法.对特异性免疫指标CD4+、CD3+、CD8+、CD19+、IgG进行检测.结果各项指标雌雄之间差异不显著,无毛小鼠各项指标均低于其他表型指标.各组之间方差分析结果:CD8+差异显著,其他指标差异不显著.IgG抗体吸光度结果,三种表型之间差异不显著.结论该小鼠皮肤和被毛突变对免疫功能有一定影响.

  • 标签: 小鼠 近交HRs 细胞 抗体生成 流式细胞仪 免疫功能
  • 简介:目的建立实验红鲫C1HD系生化遗传标记。方法采用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直电泳法,分析实验红鲫C1HD系与普通红鲫苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)等同工酶。结果实验红鲫C1HD系和普通红鲫血清蛋白电泳可分离出25条以上蛋白带,分为A、B、C等3个区段。在A、B区段,实验红鲫C1HD系分别具有SP-A1谱带和SP-B1、SP-B3-8谱带,但缺少SP-A2、SP-A3和SP-B2谱带。实验红鲫C1HD系具有8条SOD同工酶电泳谱带,比普通红鲫多出SOD-3、SOD-8两条特征带。两种红鲫均具备MDH-1、MDH-2和MDH-3电泳谱带,且带型一致;普通红鲫额外具备MDH-4和MDH-5两条电泳谱带。结论血清蛋白SP-A1和超氧化物歧化酶SOD-3、SOD-8电泳谱带可以作为实验红鲫C1HD系生化遗传标记。

  • 标签: 红鲫 C1HD系 血清蛋白 同工酶 生化遗传标记
  • 简介:目的建立一种耐药性稳定三阴性乳腺癌4T1耐药小鼠模型,为研究体内肿瘤耐药机制和逆转药物筛选奠定实验基础.方法采用顺铂(DDP)低剂量诱导及体内外交叉致瘤结合方法建立三阴性乳腺癌耐药小鼠模型;MTT法检测细胞耐药特性;实时荧光定量PCR法分析耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及GST-π表达差异;免疫组化分析耐药相关蛋白P-gp、BCRP、MMP7表达差异;蛋白印迹法检测磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,t-Akt)蛋白表达;小动物成像检测观察肿瘤生长情况.结果MTT显示建立三阴性乳腺癌耐药4T1小鼠模型耐药指数为12.84;耐药小鼠肿瘤组织中MDR1、BCRP、MMP7、GST-π基因mRNA表达量及P-gp、BCRP、MMP7蛋白表达量均高于非耐药小鼠(P〈0.01);Westernblot显示,耐药小鼠肿瘤组织p-Akt蛋白表达明显高于非耐药小鼠,t-Akt蛋白表达没有差异.非耐药小鼠与耐药小鼠肿瘤组织生长速度未见明显区别(P〉0.05).分别给予这两种模型小鼠相同剂量DDP治疗后,耐药小鼠对DDP敏感性明显低于非耐药小鼠(P〈0.01).结论初步建立了三阴性乳腺癌耐药4T1小鼠模型,为三阴性乳腺癌临床个体化治疗及耐药逆转研究等提供了良好实验动物平台.

  • 标签: 三阴性乳腺癌 肿瘤抗药性 顺铂 动物模型 小鼠
  • 简介:为了研究禽流感H5N1病毒在各个器官增殖和病理变化,在生物安全实验室,我们将禽流感H5N1病毒通过尾静脉接种BALB/C小鼠。结果小鼠在不经过适应情况下,直接感染发病,甚至死亡。在观察7天内,感染小鼠临床症状主要表现呼吸急促,体温、体重下降。尸检表现肺出血,心外膜坏死以及肝脏坏死。组织病理检查表现心、肝、肺等多器官病变。肺病变伴有纤维化弥漫性肺泡损伤;心肌外膜大量淋巴细胞浸润、坏死;肝细胞大量坏死,淋巴细胞浸润。心、肝坏死病变在H5N1禽流感病毒相关研究中未见报道。经过对各个组织器官病毒载量检测,未发现病毒在各个病变组织中复制。免疫组化检测,各个组织中也未检出阳性细胞反应。因此,我们认为H5N1禽流感病毒感染小鼠引起多个器官组织损伤,甚至死亡,不是病毒在器官复制,而可能病毒感染小鼠,产生炎症细胞因子高度表达,损伤多个器官组织所致。

  • 标签: 禽流感H5N1病毒 BALB/C小鼠 尾静脉接种 多器官病变
  • 简介:目的测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠(Npc1-/-小鼠)生长繁殖及血液生理生化指标,为开展NPC1病人研究提供理论基础资料。方法(1)选取077日龄Npc1-/-、Npc1+/-和Npc1+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;(2)Npc1-/-小鼠由Npc1+/-小鼠交配繁殖产生,统计Npc1+/-小鼠连续4繁殖数据;(3)检测60日龄Npc1-/-和Npc1+/+小鼠血液生理生化指标。结果(1)Npc1-/-小鼠体重在7周前随着日龄增加而增加,7周后随着日龄增加而减少,直至11周左右死亡。Npc1+/+和Npc1+/-小鼠体重均随着日龄增长而逐渐增加,两者之间并没有显著差别。4周后雄性比雌性体重增加明显比雌性小鼠快;(2)Npc1+/-小鼠不同代内交配分娩间隔、窝产仔数、离乳仔数、离乳仔数中雌雄数量及阳性数量差异无显著性(P〉0.05),而第2代离乳率明显大于第1代(P〈0.05);(3)Npc1-/-和Npc1+/+小鼠血液生理指标中平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均过氧化物酶指数(MPXI)差异有显著性(P〈0.05),其余差异无显著性(P〉0.05)。生化指标中尿素(UREA)差异有极显著性(P〈0.01),而天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(GLU)、乳酸脱氢酶(LDH)、钾(K)和铜(Cu)等差异有显著性(P〈0.05),其余差异无显著性(P〉0.05)。结论(1)Npc1-/-、Npc1+/-和Npc1+/+小鼠生长曲线因基因型和性别的不同而存在差异;(2)Npc1+/-小鼠不同代繁殖能力差异无显著性;(3)Npc1-/-和Npc1+/+小鼠部分血液生理生化指标差异有显著性。

  • 标签: C1型尼曼-匹克病 小鼠 生长曲线 繁殖 血液参数
  • 简介:目的:观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和C-Jun氨基端激酶(JNK)在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平变化,探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)病理机制。方法将60只大鼠随机分为糖耐量受损(IGT)模型组(n=20)、2型糖尿病(T2DM)模型组(n=20)、IGT对照组(n=10)及T2DM对照组(n=10),高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型,高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)制备T2DM大鼠模型,采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡;实时荧光PCR技术检测肝脏组织中MIFmRNA表达;Westernblot方法检测肝脏组织中MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK(p-JNK)表达。结果IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多;IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高(P<0.01),MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高(P<0.05或P<0.01);与IGT组相比,T2DM组caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而JNK磷酸化水平明显升高(P<0.01)。结论糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝发生可能与MIF、caspase-3、JNK表达水平升高及JNK磷酸化水平增强有关。

  • 标签: 巨噬细胞移动抑制因子 C-JUN氨基端激酶 Caspase-3 糖耐量受损 2型糖尿病
  • 简介:目的观察白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对于纯化培养条件下视网膜神经节细胞(retinalganglioncells,RGCs)生存率影响,进一步探讨自身免疫调节紊乱与视网膜神经节细胞损害之间关系。方法应用抗小鼠Thy1.2抗体粘附两步纯化法,得到纯化小鼠视网膜神经节细胞。Thy1.2单克隆抗体联合神经微管蛋白-2多克隆抗体对RGCs进行免疫细胞化学双标记法鉴定RGCs纯度。TUNEL染色法检测凋亡细胞、通过细胞形态学观察计数细胞。实验分为两个阶段,首先观察IL-4和IL-12对RGCs直接影响;然后观察在NMDA兴奋性毒性作用下IL-4和IL-12对于RGCs影响。结果正常培养条件下,除10U/mLIL-4外,IL-4和IL-12其余浓度组RGC存活率均较对照组降低(P〈0.0083);当有NMDA存在时,1、10、100U/mLIL-4和IL-12浓度组RGCs存活率分别为79.2%、87.2%、69.5%及77.5%、76.4%和73.7%,均较单纯NMDA处理组RGCs存活率62.25%明显提高(P〈0.0083)。结论纯化RGCs培养条件下,IL-4和IL-12不具有直接神经保护作用,但具有增强细胞对抗NMDA兴奋性毒性损伤作用,提示自身免疫调节紊乱可能损伤RGCs,与青光眼等发病有关。

  • 标签: 视网膜神经节细胞 白介素 神经保护
  • 简介:目的建立大鼠肾虚自然流产模型,研究模型蜕膜细胞因子、协同刺激因子表达。方法雌性大鼠20只,雄性大鼠10只。将雌鼠与雄鼠按2∶1合笼,以阴道涂片出现大量精子为妊娠第1天,随机分为对照组、模型组每天灌服羟基脲450mg/kg,第8天灌服米非司酮3.75mg/kg,建立肾虚模型;统计饮食量、饮水量、肾、卵巢、胚胎直径指数;RT-PCR检查Th1型/Th2型细胞因子mRNA表达;流式细胞检测协同刺激因子CD80、CD86、CD28、CTLA-4表达。结果模型组动物饮食量、饮水量、体重增加量与对照组比较,第8天差异有显著性(P〈0.05);胚胎直径指数显著减少(P〈0.01);平均流产率显著升高(P〈0.01);TNF-α、IFN-γ表达显著升高(P〈0.05),IL-4I、L-10表达显著升高(P〈0.05);CD80、CD86、CD28、CTLA-4显著性降低(P〈0.05)。结论灌服羟基脲与米非司酮可成功建立肾虚自然流产制模型。Th1型(TNF-αI、FN-γ)可能对妊娠有害,高表达有可能造成流产;Th2型(IL-4I、L-10)可能有利于妊娠,高表达维持妊娠。协同刺激因子CD80、CD86、CD28、CTLA-4表达与自然流产有关。

  • 标签: 大鼠 肾虚自然流产模型 蜕膜 细胞因子表达
  • 简介:本文对棉顶狨猴,普通狨猴和鞍背狨猴在实验室笼养条件下,进行了近8年狨猴发病类型及致死原因分析研究,结果表明引起狨猴死亡常见疾病:肺炎,痢疾,消耗性综合症,产后大出血等。并根据狨猴疾病摸索了一套有救防治方案,连对于狨猴饲养与繁殖,保证科学实验用健康健康狨群体具有重要意义。

  • 标签: 狨猴 死因 痢疾 消耗性综合症 肺炎
  • 简介:用0.1%、0.3%、0.5%和0.75%四种不同浓度蜂胶乙醇提取物(LiquidofEthanotExtrstedfrompropolis)EEP来净化自发感染螨虫ICR小鼠。发现不同浓度EEP对体表螨虫均有不同程度净化作用,但0.5%浓度EEp净化效果最佳。净化后小鼠精神状态较好,被毛光洁贴身,无异常反应,镜检未查见螨虫。结果表明EEP天然、无毒,价廉易得,一种高效、简便、理想实验动物体表螨虫生物净化剂。

  • 标签: 螨虫 体表 ICR小鼠 蜂胶乙醇提取物 异常反应 感染
  • 简介:目的探讨不同品系小鼠体外受精、胚胎和精子低温保存效果.方法本实验分别在中国科学院上海实验动物中心(SLAC)和日本熊本大学动物资源开发中心(CARD)对13个品系小鼠(C57BL/6J、BALB/cC3H/HeJ、ICR、KM、FVB、MRL、NOD、CBA、DBA/2、CD-1、BDF1、B6C3F1)体外受精(IVF)率、胚胎培养及移植成绩进行了比较研究.结果各品系小鼠新鲜精子IVF率15.1%~87.9%,冻融精子IVF率8%~80%;冷冻胚胎复苏率42.6%~83.9%;冻融胚胎移植后产仔率在17.8%~51.8%.结论遗传背景不同小鼠体外受精率、冷冻胚胎复苏率和胚胎移植产仔率差异有显著性.但同一品系两个实验室间新鲜精子IVF率、冷冻胚胎复苏率及移植产仔率差异无显著性(P>0.05);冻融精子体外受精率CARD明显高于SLAC(P<0.01).

  • 标签: 品系 小鼠 体外受精 胚胎移植 精子
  • 简介:目的探讨雌激素受体α(ERα)基因敲除小鼠优化繁育方法及ERα基因敲除小鼠子代鼠鉴定方法,建立ERα基因敲除小鼠模型,为进一步研究ERα蛋白功能奠定基础。方法用4种不同交配方式观察子代鼠各表型比率及雌、雄性ERα基因突变纯合子小鼠繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增ERα基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察结果。HE染色观察雌、雄性ERα^-/-小鼠生殖系统表型变化。结果WT、ERα^+/-、ERα^-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性ERα^-/-小鼠无繁殖能力。与WT比较,雄性ERα^-/-小鼠睾丸脏器系数降低,睾丸病理变化表现为生精小管管腔膨胀,生精细胞层变薄,且排列不规则;雌性ERα^-/-小鼠子宫脏器系数降低,子宫和卵巢病变明显,表现为:子宫浆膜、肌层、内膜层细胞排列不规则,卵巢有囊性病变、充血,无黄体。结论雌、雄性ERα^+/-小鼠交配繁育ERα^-/-小鼠较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定ERα^-/-小鼠,ERα^-/-小鼠获得为ERα蛋白功能实验研究提供了较理想动物模型。

  • 标签: 雌激素受体Α 基因敲除小鼠 基因型
  • 简介:目的建立分离纯化非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰岛方法,并对其体内外生物学特性进行研究。方法采用改良胶原酶消化结合Ficoll密度梯度离心方法,分离纯化NOD小鼠胰岛。应用体外糖刺激实验检测分离纯化胰岛功能,以及通过监测移植小鼠血糖、体重变化及糖耐量实验对移植胰岛体内生物学功能进行分析,并通过HE染色和免疫荧光染色检测肾被膜下移植胰岛存活情况。结果胰岛产率为(116±12)个胰岛/胰腺,纯度〉90%。体外糖刺激实验结果显示,NOD小鼠胰岛糖刺激胰岛素释放水平明显低于KM小鼠胰岛。胰岛移植实验显示,移植胰岛能有效改善糖尿病小鼠血糖、体重和糖耐量,但改善作用一般仅能维持2周左右。HE染色和免疫荧光染色结果显示,肾被膜下可见胰岛素阳性胰岛细胞团,并且在残存移植胰岛细胞团周围存在大量淋巴细胞浸润。结论通过改良小鼠胰岛分离方法可由NOD小鼠分离得到大量较高纯度胰岛,可用于今后探索如何阻断自身免疫损伤保护移植胰岛研究。

  • 标签: 非肥胖性糖尿病 胰岛 分离纯化 移植 小鼠
  • 简介:目的建立缺血性心肌纤维化小鼠模型并探讨其胶原沉积机制。方法将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组予以腹部皮下注射异丙肾上腺素50mg/kg,每天2次,连续10d。对照组同法注射生理盐水。对比体表心电图,45d后处死小鼠,天狼猩红染色观察心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量,荧光定量PCR检测心脏基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因表达,免疫组化染色分析心、肝、肾组织层粘连蛋白(LN)表达。结果实验组小鼠室性心律失常增多,心率加快(P〈0.05);心脏胶原沉积较多,MMP-9、TIMP-1、LN表达上调(P〈0.05),肝、肾组织LN无明显改变(P〉0.05)。结论异丙肾上腺素能制备缺血性心肌纤维化小鼠模型,其机制与MMP-TIMP失衡有关。

  • 标签: 异丙肾上腺素 心肌纤维化 小鼠 动物模型
  • 简介:目的在血管内皮细胞建立时空表达可控转基因动物模型调控体系.方法培育两个配套转基因动物品系,利用组织专一性启动子确保转基因表达空间专一性,利用四环素诱导系统对转基因表达在时间上实施调控.结果将血管内皮细胞特异性表达VE-cadherin基因启动子与人工融合转录因子tTA基因连接,建立转基因小鼠品系VE-cadherin:tTA;将tetoperon启动子与myrAktl连接,建立转基因小鼠品系TET:myrAktl.两系鼠杂交子代,筛选阳性纯合子,能可控性地在血管内皮细胞特异性表达目的基因Akt1/PKB.结论利用VE-cadherin基因启动子和tet-off诱导表达系统,可以达到在时间上和空间上都能人为控制目的基因在血管内皮细胞上特异性表达目的.

  • 标签: 转基因动物模型 调控体系 时空表达 血管内皮细胞 特异性表达 转基因表达
  • 简介:目的:开发一种新培养人胚胎干细胞(hESCs)包被基质,使hESCs培养更加简便。方法用甲醇固定小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)作为包被基质,人胚胎干细胞系X-01在该基质上生长,每隔5~6d传代一次,培养10代后,对人胚胎干细胞特性进行检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因表达和分化能力。结果hESCs在新基质上生长良好,经10次传代后仍能保持典型hESCs克隆形态。碱性磷酸酶染色阳性,免疫荧光染色Oct4、SSEA4、Tra-1-60为阳性,体外分化可形成拟胚体。结论此种固定基质可以大量制备,长期保存,并可以长期维持hESCs未分化状态,为人胚胎干细胞体外扩增探索出了一个新途径。

  • 标签: 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 甲醇固定 基质 MEF蛋白质复合物