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  • 简介:摘要目的在pMDT-18克隆质粒载体的基础上,构建实用型的能够稳定转染甲型流感病毒RNPs并且可体外定量检测的RNA聚合I荧光报告系统。方法设计并人工合成人RNA聚合I启动子、小鼠终止子序列及毒株A/Puerto Rico/8/34的NP基因的UTR,利用嵌合PCR方法将绿色荧光蛋白(eGFP)基因与上述元件体外连接,形成小鼠终止子-3’UTR-eGFP-5’UTR-人RNA聚合I启动子报告元件,将报告元件克隆至不携带任何启动子的pMDT-18质粒载体中,构建实用型RNA聚合I荧光报告质粒,转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞,观察荧光表达及测定相对荧光度。结果该系统在转染HeLa细胞后,无任何荧光产生,而转染稳定表达流感病毒A/Puerto Rico/8/34 RNPs的HeLa细胞后24 h、36 h、48 h和60 h均有荧光产生,强度随时间逐渐增强。结论成功构建了实用型RNA聚合I荧光报告系统,有助于提高流感病毒反向遗传系统的拯救效率、研究流感病毒聚合功能以及探索UTR多态性对特定基因的复制或转录的影响机制,为流感工作者在病毒分子机制领域的研究搭建了可靠的技术平台。

  • 标签: RNA聚合酶I 流感病毒 绿色荧光蛋白
  • 简介:[摘要 ] 目的:探讨长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)干扰后,在人支气管上皮细胞( the human bronchial epithelial cells, 16HBE)中的表达情况。方法 :应用 real-timePCR方法检验 lncRNA- ENST00000414355干扰效果。结果 : 正常 16HBE细胞中 ENST00000414355干扰 48h后,三条阳性序列的实验组 ENST00000414355表达均下降,都具有统计学意义 P值均 <0.0001;在氯化镉转化 16HBE成瘤细胞中 ENST00000414355干扰后,第一条阳性序列转染下达到沉默效果,且具有统计学意义 P<0.0001;在氯化镉转化 16HBE第 35代细胞在 ENST00000414355三条阳性序列转染下没有出现沉默效果所示。结论: ENST00000414355在正常 16HBE细胞中干扰效果最明显,在氯化镉转化 16HBE成瘤细胞中只有一条序列有干扰效果。

  • 标签: [ ] 实时荧光定量 PCR, LncRNA, 16HBE
  • 简介:摘要目的探究甲基转移样蛋白3(methyltransferase like 3,METTL3)和去甲基化肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)在H7N9病毒感染中发挥的作用及可能的分子机制。方法利用Western blot(WB)检测H7N9病毒感染A549细胞后METTL3和FTO的表达。敲低和过表达METTL3和FTO,H7N9病毒感染后用WB和TCID50检测其对病毒复制的影响。利用转录组测序方法对METTL3或FTO敲低及野生型对照细胞进行了转录组水平基因差异表达分析,对发挥作用的潜在靶标进行初步分析。结果H7N9病毒感染A549细胞24 h后METTL3的表达上调,FTO无明显变化。敲低METTL3和FTO后,病毒核蛋白(nucleoprotein, NP)表达水平和病毒滴度显著下降,过表达METTL3和FTO后,病毒滴度显著增加。转录组测序结果显示在METTL3或FTO敲低组与对照组之间分别发现314和555个差异表达基因,GO功能富集分析和KEGG通路富集分析结果表明这些基因与宿主免疫应答相关。结论METTL3和FTO可能通过调节宿主-病毒相互作用在H7N9病毒感染中起关键作用。

  • 标签: METTL3 FTO H7N9 转录组分析
  • 简介:摘要例1,男,10岁,以“间断恶心、呕吐3个月,加重 3 d”起病。临床表现为间断恶心、呕吐伴乏力、腹痛、头晕、肝功能异常、脑电图异常。例2,女,4岁,为例1胞妹,无临床表型。2例患儿基因检测均为ETFDH基因错义变异,核苷酸变化为c.1369 T>C、c.1851 G>A,氨基酸改变p.S457P、p.M617I,诊断为多种酰基辅酶A脱氢缺乏症。

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  • 简介:摘要早老(presenilin,PS)基因是家族性阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的主要致病基因。PS基因突变可以促使淀粉样前体蛋白( amyloid precursor protein,APP)加工成有毒形式的β淀粉样蛋白(amyloid beta protein,Aβ),在AD发病机制中发挥重要作用。然而,目前针对Aβ的靶向治疗对AD尚未能产生良好的效果,这表明可能存在其他的致病机制。近年来,钙稳态异常及其在AD中的病理作用引起了人们的关注。钙信号通路受PS的调节,PS基因突变的神经元中钙调节受损,导致其处理氧化应激的能力降低,从而导致细胞死亡促进AD的发生。PS基因突变引起内质网钙含量的部分耗尽也会导致自噬功能受损。此外,最近的研究表明PS基因突变导致的Ca2+稳态失衡会引起线粒体代谢受损及大脑网络活动缺陷。本文以钙信号通路为中心,从自噬受损、内质网应激、线粒体功能障碍、细胞凋亡及大脑网络活动缺陷等方面综述PS通过调节钙信号参与AD的致病机制,为AD的病因学研究及药物靶点的发现提供思路。

  • 标签: 阿尔茨海默病 早老素 钙信号 自噬 内质网应激 线粒体功能障碍 凋亡 大脑网络活动
  • 简介:摘要目的研究并分析对接受胰岛注射治疗的糖尿病患者使用人性化护理的效果。方法收集接受胰岛注射治疗的糖尿病患者共122例,根据随机、单盲、平行对照设计原则分为对照组(61例)和观察组(61例),对照组患者接受常规护理,对观察组患者实施人性化护理,将两组患者的护理总有效率以及治疗依从性进行观察和对比。结果观察组患者的护理总有效率明显高于对照组,观察组患者的治疗依从性显著高于对照组,P均<0.05。结论在接受胰岛注射治疗的糖尿病患者的治疗过程中,人性化护理能够显著提升护理的有效性,并规范患者的遵医行为,从而保证胰岛注射治疗的效果,值得推广应用。

  • 标签: 胰岛素注射治疗 糖尿病 人性化护理 护理效果
  • 简介:摘要:目的:探索2型糖尿病运用早期胰岛强化治疗的效果及对患者血糖水平的积极影响。方法:将已接诊的79例2型糖尿病患者作为实验研究对象,摸球法随机分组,观察组中39例,对照组中40例,对照组行口服降糖药治疗方案,观察组行早期胰岛强化治疗方案,分析两组的治疗前后血糖水平和胰岛水平。结果:治疗前数据无差异(P>0.05)治疗后观察组空腹以及餐后2h血糖指标均低于对照组而空腹以及餐后2h胰岛指标均高于对照组(P

  • 标签: 早期胰岛素强化治疗 2型糖尿病患者 治疗效果 血糖水平
  • 简介:笔者本人通过采用徐福松教授的补肾导浊汤加减,结合锌硒宝及米诺环联合治疗慢性前列腺炎218例,收到较好的临床效果,现报告如下。

  • 标签: 补肾导浊汤 锌硒宝 米诺环素 治愈率