连翘芦荟抑菌作用研究

韩涵 ,许娜娜 

山东协和学院   山东济南   250200

摘要：探究连翘和芦荟的联合应用对金黄色葡萄球菌生长的影响。通过超声波提取法对连翘苷进行提取，采用有机溶剂萃取法对芦荟苷进行提取，采取平板划线法在琼脂培养基内对金黄色葡萄球菌的涂布，并将浸有药物的药敏纸片和浸有生理盐水的药敏纸片放置于涂布完成的培养基内恒温培养观察其产生的抑菌圈大小。通过对适量的药液进行二倍稀释法，得到不同浓度的连翘芦荟药液，并通过对将相同浓度连翘和芦荟药液混合得到的混合药液加入金黄色葡萄球菌分别测定其最低抑菌浓度。将不同浓度下各药物高于最低抑菌浓度的药液进行菌落培养，测定其相应的最低杀菌浓度。连翘和芦荟对金黄色葡萄球菌产生了不同程度上的抑制，连翘抑菌活性强于芦荟抑菌活性。结论 连翘和芦荟均具有较好抑菌活性，两者联合应用产生了更好的抑菌效果。

关键词：连翘苷；芦荟苷；MIC；MBC；金黄色葡萄球菌             

    连翘作为传统中药，不仅能消肿散结，还具有较强的清热解毒功效。连翘内所含的连翘苷抑制多科致病菌能力较强，并且还具有极强的抗病毒、真菌以及抑制磷酸二酯酶的功效。在临床研究中，连翘的主要作用体现在抗菌和消炎上，连翘可以治疗由革兰氏阳性菌和阴性菌引起的疾病，在治疗急性化脓性毒疮等疾病都有良好的治疗效果。

芦荟作为在我们日常生活中常见的中药之一，其主要的功效表现为抗菌和消炎作用。芦荟内所含有的芦荟苷具有显著的抗白色念球菌、新生隐球菌、毛癣菌及曲霉菌等抗真菌活性，对临床常见厌氧菌也有很强抑制作用，除此之外，对大肠埃希菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、幽门螺旋杆菌及结核分枝杆菌等有明显的抗菌活性。

1 实验过程与方法

1.1  连翘苷的提取

连翘，它的抗菌成分为木脂素类化合物连翘苷等化合物，对链球菌和葡萄球菌等革兰氏阳性菌具有明显的抗菌作用。卢静华等人在连翘中连翘苷超声法提取工艺中，连翘苷的最佳提取工艺为加10倍量蒸馏水，超声提取三次，每次30min。超声波提取法简便快速，且对连翘苷的提取量高。

精密称取的连翘粉末30g，加入300ml的蒸馏水，超声提取3次，每次30min，得到连翘苷溶液。将其通过0.22μm的无菌过滤器过滤，放入冰箱4℃低温保存备用。使用时应振摇并再一次滤菌。

1.2  芦荟苷的提取

芦荟，其中含有蒽醌类化合物的芦荟苷具有促进伤口愈合和杀菌等效果，能有效的抑制和消灭革兰氏阳性菌等病原体的繁殖发育。张翠利等人在芦荟中芦荟苷提取工艺研究中，确定了提取芦荟苷最佳工艺条件为：乙醇浓度50%，料液比1∶15，提取时间60min，提取2次，最佳pH值为5。通过此法提取的芦荟苷含量相对较高。实验将按照以下提取方法对芦荟进行提取。

1.3  平板划线法

本次实验通过采取平板划线法来进行对金黄色葡萄球菌的接种和涂板，且实验前均对实验环境进行了1h的紫外线杀菌消毒，通过了对物体表面的杀菌以减少外在环境因素对实验的干扰影响。

1.4  最小杀菌浓度的测定

通过二倍稀释法所得到的最低抑菌浓度可知连翘、芦荟和连翘芦荟的混合溶液在浓度在250μɡ/ml为其最低抑菌浓度。将最低抑菌浓度下的溶液滴加到琼脂培养基内,37℃培养48h观察有无菌落形成,无菌落形成的相应试管中的药物浓度即为该种药物对菌株的最小杀菌浓度（MBC）。

2 实验结果

2.1  各提取液抑菌圈的大小

取三次抑菌圈直径测量值，在±0.2mm最小误差允许范围内分别测量其平均值得：连翘提取液抑菌圈直径=12.66±0.2mm，芦荟提取液=11.30±0.2mm，连翘芦荟混合溶液=13.12±0.2mm。经检验得：在95％的置信水平下接受原假设，连翘、芦荟和连翘芦荟混合药液都对金黄色葡萄球菌敏感，初步证明了连翘和芦荟对金黄色葡萄球菌抑菌作用。连翘的抑菌圈直径大于芦荟抑菌圈的直径，小于连翘芦荟混合药液抑菌圈的直径，说明连翘对金黄色葡萄球菌的抑菌活性强于芦荟，且两者混合后抑菌效果优于单一的连翘和芦荟药液。

2.2  各提取液的MIC值

与生理盐水空白组对照来比对药物在不同浓度下溶液的澄清程度，在最小浓度下溶液呈现澄清无浑浊为其最低抑菌浓度。ABC三组药液浓度均在31.3μɡ/ml、15.6μɡ/ml、7.8μɡ/ml、3.9μɡ/ml、1.9μɡ/ml和0.9μɡ/ml时产生了浑浊，说明了在此浓度下的连翘、芦荟及其混合药液的抑菌效果不理想。当连翘和芦荟在浓度为62.5μɡ/ml和125μɡ/ml下产生了一定程度上的澄清状态，但仍有轻微浑浊。而连翘芦荟混合药液在此浓度的基础下31.3μɡ/ml也呈现出了轻微浑浊，说明连翘芦荟混合药液起到了相较于单一连翘和芦荟略强的抑菌效果，但仍未达到药液对金黄色葡萄球菌的最佳抑菌效果。而连翘、芦荟及其混合药液在溶液浓度为250μɡ/ml和500μɡ/ml时溶液达到了澄清无浑浊的状态，相较于其他浓度此时浓度下金黄色葡萄球菌的生长受到了最佳的抑制。说明在连翘、芦荟及其混合药液在250μɡ/ml浓度下为最低抑菌浓度。抑菌圈直径大小与最小抑菌浓度呈现出正比关系，抑菌圈直径越大药液的最低抑菌浓度越大。

2.3  各提取液的MBC值

连翘、芦荟及连翘芦荟混合溶液虽在250μɡ/ml达到了最低抑菌浓度，但溶液滴加到琼脂培养基内培养仍产生了菌落，说明连翘、芦荟及其混合溶液没有达到其最低的杀菌浓度。证明了连翘、芦荟及其混合溶液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要优于其杀菌效果。

3 讨论

伴随着抗生素不合理应用、激素以及各种免疫抑制剂运用增多，真菌感染疾病逐年增加，而传统抗真菌药物大多存在疗效不确切、不良反应大或易产生耐药的情况，故而如今越来越多的研究者将目光转向中药制剂的抑真菌研究，如中药冰片的体外抑菌研究。通过研究连翘和芦荟两者联合应用对金黄色葡萄球菌的抑制作用，在一定的程度上缓解了由抗生素广泛使用所带来的细菌耐药性增加的问题，为新药的研发提供了一定的科学依据。

［参考文献］

[1]张宁.连翘主要有效成分的提取与药理作用[J].中医中药，2019，19（91）：180-189.

[2]李牧，杜智敏.芦荟大黄素的药理作用研究进展[J].今日药学，2015.37（9）：765-767.

作者简介：许娜娜，女，汉族，山东省济南市，1995年4月，硕士，讲师，中药药理学。

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