丹酚酸的提取工艺

刘英男

山东中医药大学山东省济南市长清区250355

摘要：在丹参的这味中药中丹酚酸是主要的作用成分，它在抵抗动脉粥样硬化以及心肌细胞的保护等等一系列的人体疾病中具有很大的药用价值。中药丹参中水溶性的物质提取的标准是以原儿茶醛或丹参素为主，不足的是这两种物质的含量在药材中含量较少的含量，但在丹酚酸中的主要作用物质则是丹酚酸B。根据丹酚酸B的含量来讨论丹酚酸的提取工艺，以探讨最合适的工业化的方案。

关键词：丹酚酸：提取工艺；实验

一、仪器与试剂

1、仪器

此次实验中主要用到的实验仪器有电子分析天平、天平、电子天平、离心沉淀机、旋转蒸发仪、柱温箱、实验型喷雾干燥机、泵、紫外检测器、高效液相色谱柱、超声波清洗器、pHS-25型pH计。

2、药品与试剂

此次实验主要用到的药材是干燥的丹参药材系唇形科植物根和根茎，试剂主要是乙醇、甲醇、乙腈、甲酸、D101大孔吸附树脂、盐酸、FeCl3、丹酚酸B对照品。

二、丹酚酸提取的工艺流程

1、设计合理的实验

采用均匀的选择实验因素的方法，首先我们要选择3个影响醇的提取的主要的因素：这三个因素分别是乙醇的浓度（用A来表示）、提取醇是我们花费的时间（用B来表示）、提取醇是温度的大小（用C来表示），这三个因素作为我们判断的一个原因，然后我们需要选择9个不同的乙醇的浓度，还需要选择3个不同的提取花费的时间和提取时的温度也要选择3个不同的温度、每个不同的因素，实验的时候要做3次接下来就是实验过程。

2、制备基础的实验溶液

首先我们需要取100g丹参药材加入圆底烧瓶中，圆底烧瓶我们需要3000ml的，接下来下面的按表1实验中的排好的顺序和不同的条件进行做实验，我们需要在一个保持不变温的水浴锅中加热，就会混合均匀，就会有需要的东西从药材中蒸发出来，趁着刚加热后需要进行抽干过滤这个操作，留下滤渣，然后我们需要把它再次放入圆底烧瓶，在加热，趁热的时候把他抽干过滤，这就是我们进行的第2次从药材中提取乙醇，我们抽干过滤后，会有剩下的一些溶液，需要把这两次剩下溶液倒在一块。接下来就把混合后的溶液倒进旋转蒸发仪就行再次处理，通过降低压力，使溶液更纯，把我们倒入的乙醇需要蒸发干净，接着就需要用实验室配置好的质量分数是10%的盐酸溶液倒入到降低压力蒸发好的溶液调至酸性是溶液的pH=3，接下来用每分钟转2000圈的离心机，转5min，这样就可以把溶液离心，，想作为样品溶液备用还需要一步抽干过滤，这一步使用的漏斗是布氏漏斗。

3、大孔吸附树脂分离和纯化

树脂的刚开始需要的处理操作D101树脂首先需要用体积分数。95%的乙醇泡上一天一夜，这样做的目的是把最上层漂浮的东西去掉，我们装入玻璃管的时候采用湿法装柱，把乙醇倒入玻璃柱中，乙醇不断的往下流动这样就可以达到清洗的目的，在这个过程中还要不间断的检查一下流出来的乙醇溶液，不断加入乙醇，乙醇液与水混合按照（1∶5）的比例不出现白色浑浊的时候就可以了，还需要用水冲洗不断冲洗，直到没有什么味就可以啦。

4、丹参提取液分离纯化

需要把离心之后的样品溶液把它倒入D101大孔树脂（需要药材与树脂以1∶4的容量进行倒入；通过时需要保持一定的流速，在2.0～3.0BV/h），之后倒入水进行对样品溶液的冲洗，目的是用它来除去溶在水中的杂质。我们采用加入FeCl3检测的方法，可以判断用来洗脱的液体中还有没有丹酚酸B成分是否被洗脱干净，然后用溶液的6倍水来进行冲洗，继续用溶液的7倍量体力分数为30％的乙醇进行洗涤脱色（保持通过时的流速为0.5～1.0BV/h）。然后收集一些体积分数为30%的洗脱下来的乙醇溶液，之后需要用旋转蒸发仪（在60℃时）降低压力进行浓缩，浓缩直到液体的相对于原来密度的1.15倍。我们浓缩后的液体还需要进行喷雾和干燥（保持仪器的进风温度为220℃，出风时的温度80℃），最终得淡黄色固体粉末就为产品。然后把它放进干燥器内，留着备用。

5、丹酚酸B含量测定

制备供试品溶液用电子天平称取丹参提取出来的产品粉末10mg，把它加入到100mL量瓶中，加入一定量的水溶解后，然后再定容，充分摇匀，把定容后的溶液通过0.45μm微孔的滤膜过滤，就可以得到供试品所用的溶液。

6、色谱的条件

色谱柱用C18（规格250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水-乙腈-甲酸（四者的体积比30∶59∶10∶1）；流速为1mL·min-1；检测时的波长为286nm；加入的样品量10μL；柱子的温度35℃；

7、测定含量的方法

用移液管准确量10μL供试品溶液，然后把他注入液相色谱仪中，按照“2.3.2”项下条件显示的进行操作，通过仪器测定丹酚酸B吸收峰显示的峰的面积的积分值，就可以通过峰面积计算出丹酚酸B的含量。

我们将洗脱液放到于60℃的水浴，蒸发干乙醇和部分水，就会变成稠膏状的产品，把产品移至真空的干燥箱（调节温度和压力为60℃，0.09MPa）降低压力进行干燥，然后把它放到干燥器中停留0.5h，主要是为了它再次变得潮湿，等到样品变成正常温度后，就可以就行准确的测量了。

三、实验的结果

显示了丹酚酸提取的工艺使用正交试验结果。通过多次的计算和分析，最后求得回归方程Y=1961+2.0861X1+5.4653X2-0.0356X12-2.055X22+0.0186X1X3，R2=0.9545，F=6.1501，通过比较发现方程是明显表现了有效性，当乙醇的浓度为45%，提取次数为2次时，每次进行1h时，温度为70℃是最好的工艺参数。还需要进行验证一下我们得到的最佳的条件，这3批样品丹酚酸B含量为：70.23%、69.04%、69.69%。

四、分析与讨论

大部分文献记载采用水提醇沉法是提取丹参药材中水溶性成分丹酚酸B常用的方法。本文就是采用通过乙醇浸透然后提取提的方法提取，因为用水提取时提取液中含有的糖类等水溶性杂质会导致液体变得黏稠，这也是使用乙醇提取的原因。还有就是丹参提取的溶液不适合长时间在中高温浓缩。丹酚酸B对热非常的不稳定，特别容易发生氧化水解，对受热温度和受热时间都特别敏感，通过试验结果可以看出，，我们通过降低工艺过程的温度和受热的时间，有对提取物中丹酚酸保存率有着大大的提高。这就决定了丹酚酸提取适合采用减压浓缩和喷雾干燥等工艺来进行。

为了使部分杂质从浓缩液中析出，我们可以把浓缩液的PH值调节到3，并且酸性的体系对丹酚酸B水溶液在受热条件下的稳定有这很大的好处；可以改变丹酚酸在溶液中的游离状态，这也是调节PH带来的另一个有利之处。在酸性条件下，丹参酚酸的极性会降低，这就对大孔吸附树脂对丹酚酸的吸附起了很大的作用。

参考文献：

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