四逆散中芍药苷含量的HPLC法测定

涂凤莲

涂凤莲（新建县中医院江西新建330100）

【中图分类号】R285【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2011)13-0405-02

【摘要】目的建立四逆散中芍药苷的HPLC测定法。方法用C18柱，流动相为乙腈-水（1:4），检测波长为230nm，流速为1.0ml/min，柱温：40℃。结果芍药苷进样量在0.168-0.672μg范围内线性关系良好（r=0.9998），平均加样回收率为102.0%（RSD=1.0%）。结论本方法简便、快速、准确、重现性好，可用于四逆散中芍药苷的含量测定。

【关键词】四逆散芍药苷HPLC含量测定

四逆散，有疏肝理脾、透解郁热、和中缓急的功能，用于阳气内郁之热厥，或肝脾不和所致的胸胁脘腹不舒等。现代多用于高血压、胃肠神经官能症、慢性肠炎及更年期综合征等。处方由柴胡、白芍、枳壳、甘草组成。为更好地控制药品质量，参照相关文献[1，2]，对方中的芍药苷进行了HPLC法含量测定研究，结果汇报如下。

1仪器与试药

1.1仪器

Waters515高效液相色谱仪；BS-110S电子天平；BP211D电子天平。

1.2试药

乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）。四逆散（江西青峰药业有限公司；批号：20090701,20090702,20090703）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为DiamonsilC185μm（200mm×4.6mm）色谱柱；流动相为乙腈–水（1∶4）；检测波长为230nm；流速为1.0ml/min；进样量为10μl。柱温：40℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000。

2.2线性关系与考察

取芍药苷对照品约15mg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用稀乙醇分别制成每1ml含67.2μg、44.8μg、33.6μg、22.4μg、16.8μg的对照品溶液，精密吸取上述溶液各10μl，在上述色谱条件下，分别进样5次，记录色谱图，以浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，计算线性回归方程：

Y=1734801.8X－5744.4，r=0.9999结果表明芍药苷在0.168-0.672μg范围内呈良好的线性关系。

2.3精密度考察

精密吸取芍药苷对照品溶液10μl，按上述色谱条件，重复进样5次，测定其峰面积值，结果峰面积的RSD为0.3%，表明测定方法的精密度良好。

2.4重现性考察

取同一批号的样品，照供试液制备方法平行制备5份供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积。结果含量的RSD为0.5%，表明测定方法的重复性良好。

2.5稳定性考察

取供试品溶液，于配制后第0、1、2、3、4小时分别进样测定，记录峰面积，峰面积的RSD为0.6%。结果表明该溶液在4小时内几乎无变化，可满足实验的要求。

2.6阴性对照试验

照处方比例制备缺白芍的四逆散，依照2．8项下操作，制备阴性供试液。在上述色谱条件下测定。结果在芍药苷的峰位上未出现色谱峰，说明阴性对照无干扰。

2.7加样回收试验

精密称取已知含量的四逆样品约0.5g，精密加入0.096mg/ml的芍药苷对照液10ml，精密加入稀乙醇15ml，密塞，称定重量，超声处理1小时，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，按正文测定方法进样，测定，计算回收率。结果见表1。

表1加样回收试验结果样品号

样品含芍药苷量(mg)

加入芍药苷量(mg)

芍药苷峰面积

测得芍药苷总量(mg)

回收率(%)

平均回收率(%)

RSD(%)

1

1.712

0.96

737895

2.704

103.33

2

1.711

0.96

735071

2.694

102.40

3

1.739

0.96

737863

2.704

100.52

102.0

1.0

4

1.740

0.96

741083

2.716

101.67

5

1.731

0.96

739610

2.710

101.98

2.8样品测定

取装量差异项下的本品内容物，混匀，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理1小时(功率：200W，频率：40KHZ)，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。结果见表2。

表2样品测定结果（n=5）批号

平均含量(mg/g)

RSD(%)

20090701

3.4

0.5

20090702

3.5

0.6

20090703

3.4

0.7

3讨论

实验比较了用稀乙醇、甲醇进行超声处理1小时的提取方法，结果以稀乙醇为溶剂超声处理1小时的方法效果最好，提取率高，因此最后确定以稀乙醇超声处理1小时的提取方法。本方法简便、快速、准确、重现性好，可用于四逆散中芍药苷的含量测定。

参考文献

[1]中国药典（2005年版一部）.中华人民共和国药典委员会.

[2]刘大伟,廖少华,肖林林等.四逆散质量标准的研究[J].中国现代药物应用,2010,Vol(4)16:134.