简介：目的探讨雌激素受体α（ERα）基因敲除小鼠的优化繁育方法及ERα基因敲除小鼠子代鼠的鉴定方法,建立ERα基因敲除小鼠模型,为进一步研究ERα蛋白的功能奠定基础。方法用4种不同的交配方式观察子代鼠的各表型比率及雌、雄性ERα基因突变纯合子小鼠的繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增ERα基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察结果。HE染色观察雌、雄性ERα^-/-小鼠生殖系统表型变化。结果WT、ERα^＋/-、ERα^-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性ERα^-/-小鼠无繁殖能力。与WT比较,雄性ERα^-/-小鼠睾丸脏器系数降低,睾丸病理变化表现为生精小管管腔膨胀,生精细胞层变薄,且排列不规则;雌性ERα^-/-小鼠子宫脏器系数降低,子宫和卵巢病变明显,表现为：子宫浆膜、肌层、内膜层细胞排列不规则,卵巢有囊性病变、充血,无黄体。结论雌、雄性ERα^＋/-小鼠交配是繁育ERα^-/-小鼠的较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定ERα^-/-小鼠,ERα^-/-小鼠的获得为ERα蛋白功能的实验研究提供了较理想的动物模型。

简介：目的建立分离纯化非肥胖性糖尿病（NOD）小鼠胰岛的方法,并对其体内外生物学特性进行研究。方法采用改良的胶原酶消化结合Ficoll密度梯度离心方法,分离纯化NOD小鼠胰岛。应用体外糖刺激实验检测分离纯化的胰岛功能,以及通过监测移植小鼠的血糖、体重变化及糖耐量实验对移植胰岛的体内生物学功能进行分析,并通过HE染色和免疫荧光染色检测肾被膜下移植胰岛的存活情况。结果胰岛产率为（116±12）个胰岛/胰腺,纯度〉90%。体外糖刺激实验结果显示,NOD小鼠胰岛的糖刺激胰岛素释放水平明显低于KM小鼠胰岛。胰岛移植实验显示,移植胰岛能有效改善糖尿病小鼠的血糖、体重和糖耐量,但改善作用一般仅能维持2周左右。HE染色和免疫荧光染色结果显示,肾被膜下可见胰岛素阳性的胰岛细胞团,并且在残存的移植胰岛细胞团周围存在大量淋巴细胞浸润。结论通过改良的小鼠胰岛分离方法可由NOD小鼠分离得到大量较高纯度的胰岛,可用于今后探索如何阻断自身免疫损伤保护移植胰岛的研究。

简介：目的建立缺血性心肌纤维化小鼠模型并探讨其胶原沉积机制。方法将BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组予以腹部皮下注射异丙肾上腺素50mg/kg,每天2次,连续10d。对照组同法注射生理盐水。对比体表心电图,45d后处死小鼠,天狼猩红染色观察心脏Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量,荧光定量PCR检测心脏基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）基因表达,免疫组化染色分析心、肝、肾组织层粘连蛋白（LN）的表达。结果实验组小鼠室性心律失常增多,心率加快（P〈0.05）;心脏胶原沉积较多,MMP-9、TIMP-1、LN表达上调（P〈0.05）,肝、肾组织LN无明显改变（P〉0.05）。结论异丙肾上腺素能制备缺血性心肌纤维化小鼠模型,其机制与MMP-TIMP失衡有关。

简介：目的在血管内皮细胞建立时空表达可控的转基因动物模型调控体系.方法培育两个配套的转基因动物品系,利用组织专一性启动子确保转基因表达的空间专一性,利用四环素诱导系统对转基因表达在时间上实施调控.结果将血管内皮细胞特异性表达的VE-cadherin基因启动子与人工融合的转录因子tTA基因连接,建立转基因小鼠品系VE-cadherin:tTA;将tetoperon的启动子与myrAktl连接,建立转基因小鼠品系TET:myrAktl.两系鼠杂交的子代,筛选的阳性纯合子,能可控性地在血管内皮细胞特异性表达目的基因Akt1/PKB.结论利用VE-cadherin基因启动子和tet-off诱导表达系统,可以达到在时间上和空间上都能人为控制目的基因在血管内皮细胞上特异性表达的目的.

简介：目的：开发一种新的培养人胚胎干细胞（hESCs）的包被基质，使hESCs的培养更加简便。方法用甲醇固定的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）作为包被基质，人胚胎干细胞系X-01在该基质上生长，每隔5～6d传代一次，培养10代后，对人胚胎干细胞特性进行检测，包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达和分化能力。结果hESCs在新的基质上生长良好，经10次传代后仍能保持典型的hESCs克隆形态。碱性磷酸酶染色阳性，免疫荧光染色Oct4、SSEA4、Tra-1-60为阳性，体外分化可形成拟胚体。结论此种固定的基质可以大量制备，长期保存，并可以长期维持hESCs的未分化状态，为人胚胎干细胞的体外扩增探索出了一个新的途径。

简介：目的构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠。方法使用Gatewaycloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好的载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产。将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖。另取阳性小鼠,提取主要组织器官的miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31的表达量。同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin的表达和神经干细胞的数量。结果成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上。各主要组织器官miR-31的表达均升高且稳定表达。阳性小鼠Nestin的表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。结论通过使用Gatewaycloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31的表达稳定,神经系统内的神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内的功能和神经系统疾病的治疗提供良好的工具小鼠。

简介：目的研究昼夜节律的改变对视网膜感光视蛋白melanopsin表达的影响。方法出生14d（P14）C57BL/6J小鼠随机分为实验组和正常对照组,实验组每天给予24h持续光照,对照组模拟正常昼夜节律每天给予12h光照、12h黑暗环境,运用免疫荧光染色结合RT-PCR技术,分别检测实验组和对照组小鼠在光照1周后和8周后视网膜感光视蛋白melanopsin的表达情况。结果免疫荧光染色结果显示感光视蛋白melanopsin主要位于视网膜神经节细胞层,少部分位于内核层。小鼠光照1周后melanopsin阳性细胞的表达数目实验组少于对照组;RT-PCR结果示小鼠光照1周和8周时melanopsin的mRNA含量实验组均少于各自的对照组,两者具有统计学意义（P〈0.01）。结论持续光照可以减少视网膜感光视蛋白melanopsin的表达,提示melanopsin阳性神经节细胞为光敏感性细胞,其表达可能对维持正常的昼夜节律有重要作用。

简介：目的寻找能调节T细胞功能的相关分子,进行与T细胞介导的自身免疫性疾病相关的研究。方法从BALB/c小鼠骨髓中收集树突状细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到很多株能调节T细胞功能的杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖的杂交瘤细胞系进行了进一步的深入研究。结果显示其目标分子是CD45,同时增殖实验结果显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论抗CD45单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导的自身免疫性疾病的相关预防及治疗中。

简介：

简介：目的为建立溶血性贫血(HA)和再生障碍性贫血(AA)两种贫血动物模型．研究HA和AA的发病机理。方法50只杂种健康家兔随机分为两组，25只皮下注射盐酸苯肼制备溶血性贫血(HA)模型；另25只行^60Coγ-射线亚致死量全身照射后输注同种异体胸腙淋巴细胞诱发AA型。结果HA组成功率100％，死亡率56％(14/25只)；AA组成功率为92％(23，25只)。结论两种模型的发生时间较稳定，实验重复性好，结果可靠，这为HA和AA发病机理的探讨丑实验性研究莫定了基础。

简介：[目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和southernblot鉴定。[结果]经300ug/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。[结论]本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。

简介：对四个单位保种的S180细胞经KM小鼠腹腔传代，体外培养加秋水仙碱，涂片、染色后，显微镜下计数染色体数目：腹水传代的S180细胞．用70％乙醇固定，流式细胞仪测DNA含量。结果如下：本学部(本部)，中国医学科学院药物所(药物所)，武汉大学保种中心(武汉大学)和北京市肿瘤所(肿瘤所)保种的S180细胞株，其染色体均数分别为628±22．8，69．1±21．2，39．9±8．26，58．7±9.75条。四单位S180细胞株染色体数做方差分析表明，除肿瘤所与本部外，其它两单位比较均有显著统计学差异(P<0．01)。直方图分析显示主流染色体范围分别为56～60，61～65，41～45，61～65条。流式细胞术DNA含量分析表明肿瘤所S180DNA含量最多，武汉大学保种的S180细胞的DNA含量最少。这些结果均证明四个单位的S180细胞株在一些方面已出现显著差异。

简介：目的建立棕背的实验室繁育方法,测定棕背生长和繁殖数据,为开展棕背实验动物化研究提供基础。方法将黑龙江省牡丹江市牡丹峰林地的野生棕背引入实验室,于大型硬壁式啮齿动物负压隔离器内进行人工饲育、繁殖,测定棕背生长和繁育数据,评价棕背实验室繁育效果。结果棕背在实验室条件下可以实现人工饲育、繁殖。妊娠率54.55%,平均妊娠期为20.4d（18~22d）;一个繁殖期内平均繁殖2.9次,最高繁殖次数为7次,远远超过自然条件下所统计到的繁殖次数（1~4次）;平均窝产仔数（4.3±1.22）只,单窝最高产仔数为8只;幼仔离乳率94.8%,生长发育状况良好。结论实现了棕背的实验室繁育,测定了棕背在实验室条件下的生长和繁育数据,为棕背实验动物化打下了基础。

简介：

简介：黑腹果蝇（Drosophilamelanogaster）是进行生物医学研究的理想模型,但研究过程往往受到遗传工具和品系资源的限制,无法有效地调控目的基因表达,阻碍实验的深入开展。为了方便果蝇领域的实验室开展研究,我们首先开发并优化了基于CRISPR/Cas9的基因组编辑技术,随后研发了转录激活系统和新一代转基因干扰技术,最终可以简单高效、准确特异地调控目的基因表达。同时,利用这些遗传学新技术,我们构建了相应的基因敲除、转基因转录激活、转基因干扰的果蝇品系资源库,使清华大学果蝇中心成为世界上最重要的果蝇技术和资源中心之一。这些新技术以及相应的果蝇资源,正在被国内外果蝇研究领域的实验室所应用,对发育和疾病等相关研究发挥着广泛的促进作用。

简介：目的探索来源于人的表皮细胞的分离培养方法，为其进一步作为皮肤组织工程中的种子细胞或临床应用奠定前期研究基础。方法取3～9岁健康儿童包皮环切术后包皮，经分离酶处理分离真表皮，再将表皮以胰蛋白酶消化为细胞悬液，分别接种于有血清培养基DMEM和无血清培养基K-SFM中进行细胞培养，观察表皮细胞生长融合情况及克隆形成率。结果表皮细胞在DMEM和K-SFM培养液中均能融合成片，但在K-SFM中的融合成片时间明显短于在DMEM中所需时间；在K-SFM中2周时克隆形成率显著高于在DMEM中的克隆形成率。结论两步酶法分离表皮细胞接种于K-SFM中培养，是一种简便有效的表皮细胞分离培养方法。

简介：目的对雌性树Ju的麻醉，生殖器官解剖与卵母细胞形态特征进行观察，为制备转基因树Ju奠定基础，方法用1%的戊巴比妥钠（10^-3ml/g体重）肌内注射对树Ju麻醉，比较在不同环境温度下对麻醉效果的影响。对雌性树Ju生殖器官解剖结构，卵母细胞形态特征等进行观察。结果（1）在25-28℃，18-20℃下麻醉的持续时间分别为80min,130min;(2)雌性树Ju的子宫为双角子宫，卵巢外有包膜；（3）卵母细胞富含色素，卵母细胞的透明带与质膜的韧性较山羊强，结论在25-28℃下，用1%的戊巴比妥钠（10^-3ml/g体重）对树Ju麻醉时间比较适中，便于实验操作而且苏醒快，雌性树Ju生殖器官解剖结构，卵母细胞形态特征观察表明，树Ju的胚胎移植，转基因等实验操作与小鼠类似，但树Ju的受精卵须进行离心处理。

简介：目的：构建大鼠CB1（rCB1）基因真核表达载体，检测rCB1基因在细胞中的表达，研究rCB1对人宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA，RT-PCR扩增rCB1基因，通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与pCDNA3.1（＋）质粒，构建pcDNA3.1（＋）-rCB1。脂质体法将其转染到HEK293和CaSki细胞，Westernblot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测rCB1的表达及定位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Westernblot与实时荧光定量PCR检测rCB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300bp的载体片段和1500bp的目的片段，测序结果和rCB1基因序列（NM＿012784.4）一致。转染HEK293细胞后，rCB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染CaSki细胞后，rCB1使细胞凋亡率增加（P＜0.05）；rCB1基因上调Bax、Bad的表达，同时抑制Bcl-2的表达，与空白组比较，其差异具有显著性（P＜0.05）。结论成功构建了pcDNA3.1（＋）-rCB1真核表达载体，rCB1表达于细胞膜和细胞质，rCB1可以明显促进宫颈癌CaSki细胞凋亡，其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。

简介：多模态融合的分子影像技术整合了多种分子影像技术的优势,已成为当前分子影像领域研究的热点和发展趋势。新近报道的七甲川菁(heptamethinecyanine)染料是一类具有肿瘤靶向性的近红外荧光(near-infraredfluorescence,NIRF)制剂。该染料独特的光学特征使其在肿瘤分子影像、靶向治疗和药物传递系统方面具有广阔的应用前景。纳米材料包裹该类染料可用于NIRF/MRI双模成像,标记核素后可实现NIRF/PET双模成像,共轭结合化疗药物后,可实现抗肿瘤药物的靶向传递,多个七甲川菁染料的复合物已被用作多模态成像,成为光热、光动力学和组合治疗肿瘤的新策略。

简介：目的建立具有稳定性高,重复性强,存活时间长的大鼠心肌梗死模型,探讨采用心电图（ECG）和心脏超声心动图（UCG）监测心梗后心电生理和左室功能变化的可行性。方法Wistar大鼠经10%水合氯醛麻醉后,气管切开插管及连通呼吸机,开胸后结扎冠状动脉左前降支。于手术后4、8和12周行ECG检测和UCG检查,术后12周取出心脏行病理检查。结果采用本法建立大鼠心肌梗死模型,术后72h内大鼠存活率为83.3%,术后12周以上大鼠存活率为73.3%。术后48、和12周ECG监测示心梗后PR间期,QRS时限,QT间期和QTc间期均较假手术组延长,同期行UCG监测示心梗后左室舒张末期内径和左室收缩末期内径显著增加,左室射血分数值和左室短轴缩短率值显著降低,12周后组织病理HE染色符合慢性心肌梗死的病理改变。结论本技术操作简单、创伤轻、成功率高,术后采用ECG和UCG可有效监测心梗后不同时期心电变化和左室功能变化。