简介：Objective:Todevelopasensitive,specificandsimplemethodfordetectionofextremelylownumbersofT.palliduminclinicalspecimens,asasignificantadditiontotheserologictestsforsyphilisdiagnosis.Methods:Double-tubenestedPCR(DN-PCR)andsingle-tubenestedPCR(SN-PCR)assayswereperformedtoamplifyspecificfragmentsoftheDNApolymeraseIgene(polA)ofT.pallidum.SensitivityandspecificityofthetwoPCRassaysweretested.EightysixwholebloodspecimensfrompersonswithsuspectedsyphilisweredetectedbythetwonestedPCRmethods.TheTPPAtestwasusedasacomparisonfordetectingsyphilisinserafromcorrespondingpatients.Results:OnlyspecificampliconscouldbeobtainedduringamplificationoftheT.pallidumpolAgeneandthedetectionlimitwasapproximately1organismwhenanalyzedongelbythetwoPCRmethods.Of86clinicalspecimens,62werepositivebyTPPA.Ofthese,54and51werepositivebytheDN-PCRandSN-PCR,respectively,whichdoesnotrepresentastatisticallysignificantdifferencebetweenthetwoPCRtests.Of24TPPA-negativespecimens,5werepositivebybothDN-PCRassayandSN-PCRassay.Conclusion:TheSN-polAPCRmethodisextremelysensitive,specificandeasytoperformfordetectinglownumbersofT.palliduminclinicalbloodspecimensasacomplementarytoserologyforsyphilisdiagnosis.

简介：目的：建立一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法：将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso的病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞，提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物，在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品，建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论：建立了一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性，该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。

简介：摘要目的利用荧光定量PCR检测技术,建立由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的快速检测方法.方法以金黄色葡萄球菌的特异性DNA核酸片段作为靶序列,采用聚合酶链反应(PCR)结合Taqman技术,以哈尔滨市２０１３~２０１４年度食源性致病菌主动监测分离鉴定的菌株作为阳性菌,对其进行荧光检测.结果本研究建立的反应体系对１８株金黄色葡萄球菌呈现出良好的扩增曲线,在５株相关细菌的检测中,除金黄色葡萄球菌结果为阳性外,其余菌株均为阴性.结论该方法特异性强、灵敏度高,操作简便快速,适应于由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及食源性疾病的快速检测,具有较大的推广及应用价值.

简介：无

简介：目的建立实验大小鼠金黄色葡萄球菌的快速检测方法--PCR法.方法根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列,设计并合成一对特异性的引物,利用PCR技术扩增nuc基因片段.对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增.结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现668bp的特异性DNA扩增片段,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性.将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释,测定此PCR体系的敏感性,结果显示,该PCR体系能检出3pg金黄色葡萄球菌DNA,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需4h.结论本研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法,具有快速、可靠、敏感和特异的特点,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测,适合应用于实验大小鼠的监测.

简介：摘要目的评价实时荧光定量PCR检测HPV-DNA在宫颈癌筛查中应用价值。方法2015年1月～2015年12月，对我中心经病理组织学诊断宫颈疾病女性500例开展实时荧光定量PCR检测HPV-DNA水平。结果y（Ct）=-3.3236lgx＋34.713，R2=0.9986，批内、批间、日间重复性检测CV均在合格范围内；不同病理类型HR-HPV阳性率差异具有统计学意义（=56.416，P＜0.05）；不同类型HR-HPV阳性者拷贝数分布差异无统计学意义（μ=11.495，P=0.063＞0.05）。结论实时荧光定量PCR检测HPV-DNA可作为宫颈癌筛查方法，筛查早期CIN病变。

简介：本研究以双单倍体马铃薯DM的突变体为材料,利用PCR-walking的方法扩增其突变体的侧翼序列。在试验中,以60个鉴定过的阳性突变体样品为材料扩增后,有28个样品扩增出有效条带。PCR胶回收后测序,有2个样品测序无信号,其他26个样品,将测序与载体序列和马铃薯基因组序列用BLASTN比对,发现有6个样品分别插入到了马铃薯1、3或7号染色体上。通过进一步比对,发现编号为TDM90的突变体中,载体插入了PREDICTED:Solanumtuberosumtrans-resveratroldi-O-methyltransferase-like(LOC102590422),mRNA马铃薯反式白藜芦醇基因中。试验说明了PCR-walking法扩增马铃薯侧翼序列是可行的。且载体插入马铃薯反式白藜芦醇基因中对马铃薯白藜芦醇基因的表达有何影响,有进一步研究下去的重要意义。

简介：目的探索均匀设计在优化实时定量PCR检测条件中的应用,确立心钠素基因实时定量的最佳条件。方法以乳鼠心肌细胞cDNA为模板,退火温度和引物浓度为影响因素,应用均匀设计法探索影响心钠素基因实时荧光定量PCR的扩增条件;量化不同实验条件下的扩增效果,在最优的扩增条件下建立ANP基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计法的试验设计,用8个试验点,完成了对温度和引物浓度2因素8水平的实验条件优化,建立了ANP基因实时定量PCR检测的最佳组合,为退火温度59.2℃、引物终浓度200μM。结论均匀设计是一种简便易行、快速经济的实时定量PCR检测条件的优化方法。

简介：摘要目的探讨PCR-高分辨熔解曲线(HRM)法在Kidd血型基因分型中的应用。方法采用简单随机抽样法，选择2019年10月至11月，于深圳市血液中心参加无偿献血的256例献血者为研究对象。本组献血者年龄为18～60岁；男性献血者为142例，女性为114例。采用血型血清学试验方法对本组献血者全血标本的红细胞抗原表型进行检测。采用PCR-SSP和PCR-HRM法对本组献血者的DNA标本进行Kidd血型基因分型。对于基因分型与血型血清学检测结果不一致的标本，则通过JK基因第9外显子直接测序法进行确认。本研究遵循的程序符合2013年修订版《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求，并且于献血前与所有献血者签署《献血者知情同意书》。结果①本组256例无偿献血者全血标本的血型血清学检测结果显示，Jk(a-b+)、Jk(a+b+)和Jk(a+b-)表型献血者分别为86、109和61例。②本组256例献血者基因组DNA标本的PCR-SSP和PCR-HRM法的Kidd血型基因分型结果一致，JKB/JKB、JKA/JKB和JKA/JKA基因型献血者分别为82、115和59例。③ 22例(8.6%，22/256)献血者的血型血清学表型与基因分型结果不一致。其基因组DNA标本经JK基因第9外显子直接测序结果显示，JK基因第9外显子存在c．838 G>A突变，与JKA/JKB基因分型结果相符。结论本研究建立的PCR-HRM法可准确进行Kidd血型基因分型，该方法可以有效地辅助Kidd血型精准鉴定。在进行Kidd血型鉴定的实际工作中，可联合血型血清学和PCR-HRM法，以提高Kidd血型鉴定准确度。

简介：

简介：目的分析比较实时荧光PCR与涂片镜检、培养三种方法在结核杆菌检测的差异。方法对我院疑似结核病患者的临床标本同时进行实时荧光PCR检测、涂片镜检和培养,将三组检测结果进行比较。结果215例疑似肺结核患者痰标本同时采用实时荧光PCR、涂片镜检和培养三种方法检测,阳性检出率分别为46.5%、32.6%和44.7%。实时荧光PCR法与涂片镜检法的阳性率间比较有统计学意义,实时荧光PCR法与培养法的阳性率间比较无统计学意义。112例疑似其他类型结核病患者的胸腹水、脑脊液、穿刺液和尿液等非痰标本同时采用上述三种方法检测,阳性率分别为18.8%、3.6%和16.1%。统计学意义同上。结论实时荧光PCR检测技术在临床上对结核病的诊断和鉴别具有较好的应用价值。

简介：摘要院微生物无论在地表水生物圈物质循环还是能量流动中的地位都是不可替代、举足轻重的，在湖泊生态系统中也起着非常重要的作用，是表征水体富营养化的主要原因之一。本文主要讨论拟将基于16SrDNA的PCR-DGGE（变性梯度凝胶电泳）技术应用于水体微生物多样性研究，进而控制预防水体富营养化。

简介：目的：建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法。方法：根据马尔尼菲青霉ITS序列，设计并合成引物，通过常规PCR扩增目标序列后，将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中，转化大肠杆菌JM109，经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模板建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线，得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式，并做灵敏性、特异性试验。结果：荧光定量PCR标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系，溶解曲线特异，相关系数为1.938，最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论：建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法，为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。

简介：摘要目的对比并分析荧光定量PCR检测结核杆菌DNA拷贝数与涂片抗酸染色镜检结果。方法选取2016年1月~2016年12月在我中心确诊的结核病患者150痰样本作为结核组，另选取同期来我中心就诊的无结核表现的其他病例患者的40份痰样本作为对照组，两组分别同期进行荧光定量PCR检测和涂片抗酸染色镜检，对检测结果进行比较分析。结果荧光定量PCR法检测结核杆菌阳性率为72.67%，明显高于抗酸涂片法的26.00%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。150例痰样本中，抗酸涂片结果阴性112例，阳性34例，疑似4例。在112例阴性结果中，有40例荧光定量PCR检测为阴性，72例检测为阳性，其中结合杆菌DNA拷贝数以102~103数量级居多；38例阳性（含疑似）结果中，有1例荧光定量PCR检测为阴性，37例检测为阳性，其中结合杆菌DNA拷贝数以103~104数量级居多，结果显示，DNA拷贝数数量级与涂片阳性程度基本呈正相关性。结论对于结核杆菌的检测，采用荧光定量PCR法较涂片抗酸染色法，敏感度更高，特异性更强，且前者检测结核杆菌DNA拷贝数与后者镜检阳性程度具有较好的相关性，两种方法联合使用可为临床诊疗提供可靠的依据。

简介：摘要：目的：探讨分析实时荧光PCR检测腹泻患者肠致泻性大肠杆菌的分布。方法：此次研究，获取我院之中150例腹泻患者的粪便标本，并借助实时荧光PCR检测，对病原菌做检测，分析不同大肠杆菌分布情况。结果：150例样本中有肠致泻性大肠杆菌40例，检出率为26.67%；其中检出肠致病性大肠杆菌占比47.50%, 肠黏附性大肠杆菌占比 30.00% ；肠出血性大肠杆菌占比 12.50% ；肠产毒性大肠杆菌占比7.50%, 肠侵袭性大肠杆菌占比 2.50%；＜5岁患者致泻性大肠杆菌检出率较高。结论：腹泻患者的肠致泻性大肠杆菌检测中，以肠致病性、肠黏附性为主，年龄小于5岁患者致泻性大肠杆菌感染几率较高。

简介：【摘 要】目的：在宫颈癌筛查中采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA，探究临床诊断价值。方法：以2018年4月至2020年4月期间在我院进行的200例宫颈癌筛查的病患作为研究对象，所有病患均采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA和杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测HPV-DNA。分析两种检测方式的检测结果，进而判断检测方式的诊断价值。结果：经病理诊断检测出HPV-DNA阳性病患有126例，以此作为金标准。经实时荧光定量PCR检测后，HPV-DNA阳性病患有106例，诊断正确率为84.12%；经杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测后，HPV-DNA阳性病患有74例，诊断正确率为58.73%。结论：在宫颈癌筛查中采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA，具有较高的检测价值，其诊断结果准确率高，降低误诊率，可有效筛查宫颈癌患者。

简介：【摘要】目的：讨论阴道细菌检验应用PCR检验法和细菌培养法的临床应用价值。方法：入选100例细菌性阴道炎患者主要于2021年1月-2021年9月接受病情诊疗。入选者在阴道细菌经验中均采取PCR检验法和细菌培养法。观察指标：检验阳性率、不同菌种检出率。结果：PCR检验组检验阳性率为88%，阴性率为12%；细菌培养组检验阳性率为75%，阴性率为25%，两组相比统计学差异显著（P＜0.05）。PCR检验组肠球菌检出率为93.55%、棒状杆菌检出率为81.82%、加特纳菌检出率为86.11%；细菌培养组肠球菌检出率为48.39%、棒状杆菌检出率为57.58%、加特纳菌检出率为58.33%，两组相比统计学差异显著（P＜0.05）。结论：阴道细菌检验应用PCR检验法和细菌培养法后发现，PCR检验法阴道细菌检出阳性率更高，且利于不同类型菌种的有效鉴别。

简介：摘要：目的：分析在肺结核早期诊断中PCR检验的价值及准确率。方法：从2020年5月至2021年7月期间抽取本院收治的40例肺结核患者，所有患者均在采用PCR检验、PPD检验，对比两种检验的阳性率与早期诊断符合率及AUC值。结果：经检验，PCR检验出阳性者35例，阳性率87.5%；PPD检验出阳性者18例，阳性率45.0%，两种检验方式阳性率相比差异有统计学意义，P

简介：摘要：PCR试验在兽医生物安全实验室中是一种常见的试验手段，全称为聚合酶链式反应。本文对兽医生物安全实验室PCR试验中的污染与防制对策进行了讨论。在兽医生物安全实验室中检验品被污染、PCR实验材料被污染、PCR扩增产物污染以及实验室环境污染都会影响实验的精确性，因此要规范试验操作流程。

简介：摘要：实时的荧光RT—PCR检测技术，是在常规PCR平台上发展出来的量化PCR工艺技术，通过在PCR的反应系统中添加了大量荧光反应基团，之后再经过大量荧光数据的积累，就可以即时的监控了整个PCR流程，之后又利用x射线断层成像数据的标准曲线，对所有未知模型都实现了定性分析。