简介：目的：研究3—甲基胆蒽(3—methylcholanthrene，3—MC)对原代培养大鼠肝细胞细胞色素P4501A1／2的诱导作用，并探讨其时间—效应和剂量—效应关系。方法：原位两步胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞，无血清条件下培养细胞，并用不同剂量的3—MC诱导肝细胞24h或48h。乙氧基试卤灵(ethoxyresomn，EOR)为CYP1A酶活性探针药，高效液相色谱法(HPLC)测定试卤灵(resomfin，RSF)浓度。TaqmanRT—PCR法测定CYP1A1基因表达，Westembolt法分析CYP1A酶蛋白表达。结果：实验条件下对照组和3—MC诱导组的CYP1A1基因和酶蛋白，CYP1A1／2酶活性均可被检测。3—MC对原代培养大鼠肝细胞CYP1A1／2基因及蛋白表达、酶活性的诱导作用呈明显的剂量依赖性。结论：3—MC对大鼠原代培养肝细胞的CYP1A1／2有明显的诱导作用。

简介：摘要目的探讨骨骼肌细胞Syncytin-1过表达对脊髓前角运动神经元-骨骼肌细胞-施万细胞共培养模型炎性因子、钠离子依赖性中性氨基酸转运体1(ASCT1)和神经保护因子的影响。方法(1)体外原代培养脊髓前角运动神经元、骨骼肌细胞、施万细胞，免疫荧光染色分别检测细胞胆碱乙酰转移酶(ChAT)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙结合蛋白B(S100B)的表达进行鉴定。(2)将Syncytin-1重组质粒及空载质粒分别转染骨骼肌细胞后24 h，与另外2种细胞混合，分别建立3种细胞的共培养模型(Syncytin-1重组质粒转染组：Syncytin-1重组质粒转染的骨骼肌细胞、脊髓前角运动神经元、施万细胞混合；空载质粒转染组：空载质粒转染的骨骼肌细胞、脊髓前角运动神经元、施万细胞混合)。于倒置显微镜下观察共培养细胞形态及连接的变化。共培养48 h后应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组共培养细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting分别检测2组共培养细胞Syncytin-1、ASCT1、TNF-α、iNOS、VEGF mRNA和蛋白的表达。结果(1)免疫荧光染色检测显示：脊髓前角运动神经元中ChAT阳性表达细胞、骨骼肌细胞中α-SMA阳性表达细胞、施万细胞中S100B阳性表达细胞均占95%以上，且定位在细胞质内。(2)Syncytin-1重组质粒转染组及空载质粒转染组共培养细胞的数量及形态未见明显差异。与空载质粒转染组比较，Syncytin-1重组质粒转染组共培养细胞上清液TNF-α、iNOS及VEGF的浓度均增高，细胞TNF-α、iNOS、Syncytin-1、VEGF mRNA和蛋白的表达均增高，ASCT1 mRNA和蛋白的表达均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨骼肌细胞Syncytin-1过表达可以引起共培养细胞炎性因子释放、ASCT1表达降低、神经保护因子VEGF表达增高。

简介：这些均提示TGFβ1在肝损伤引起的细胞凋亡中起作用,抑制细胞凋亡可达到保护肝细胞损伤的目的,体内及体外试验均发现它们可诱导肝细胞发生凋亡（1）

简介：摘要目的探究敲减角质形成细胞KRT5基因对共培养黑素细胞黑素含量的影响，以解释屈侧网状色素沉着症（DDD）的色素增加性皮损形成的机制。方法通过成簇的规律间隔的短回文重复序列-相关蛋白9（CRISPR-Cas9）技术获得KRT5基因杂合突变的HaCaT细胞，将转染非靶向单向导RNA：Cas9蛋白复合物的HaCaT细胞设为对照组，分别与人原代黑素细胞HEMn体外共培养。免疫荧光观察共培养细胞中细胞角蛋白及黑素小体表达；差异胰酶消化获得不同共培养组中黑素细胞，检测细胞内黑素含量。免疫组化检测1例KRT5突变DDD患者皮损和正常对照皮肤中黑素细胞特异性前黑素小体蛋白17（Pmel17）的表达改变。结果Sanger测序显示，实验组HaCaT细胞KRT5基因第1外显子起始密码子发生杂合突变（c.1delA），对照组HaCaT细胞KRT5基因未发生突变。Western印迹显示，实验组HaCaT细胞KRT5蛋白表达水平（0.60 ± 0.05）显著低于对照组（1.00 ± 0.00，t = 32.38，P = 0.001）。HEMn细胞与实验组HaCaT细胞共培养体系中Pmel17标记的黑素小体较与对照组共培养体系增多，且细胞内黑素含量增加52.5%，差异具有统计学意义（t = -3.48，P = 0.025）。KRT5突变DDD患者皮损组织中Pmel17表达量较正常对照皮肤增加。结论本研究通过CRISPR-Cas9诱导KRT5基因突变的HaCaT细胞，与黑素细胞在体外建立共培养细胞模型，验证了其对共培养黑素细胞的影响，为进一步研究角质形成细胞与黑素细胞相互作用机制以及皮肤色素异常的发病机制提供了初级研究模型。

简介：目的：探讨建立一种新的从膨胀液中提取脂肪间充质干细胞（ADSCs）的分离方法。方法：收集含有脂肪间充质干细胞的膨胀液，然后从膨胀液中分离出脂肪间充质干细胞并进行体外培养，观察培养间充质干细胞生长状态，流式细胞术检测间充质干细胞干性标记物，细胞生长曲线比较新方法与运用传统方法分离脂肪间充质干细胞的增殖活性，多向诱导分化鉴定其向成骨，成软骨及成脂方向分化的能力。结果：成功建立了一种新的从膨胀液中提取脂肪间充质干细胞的分离方法；分离自膨胀液的间充质干细胞数量虽然低于与等体积脂肪组织来源的间充质干细胞，但细胞生长曲线分析结果表明其增殖速度快，生长至第8天时，密度基本等同于脂肪组织来源间充质干细胞。间充质干细胞表面分子标记物CD73，CD90，CD105，CD45，CD34，CD11b，CD19，HLA—DR表达测定结果显示正常，阳性细胞率与脂肪组织来源的干细胞相近。多向诱导分化结果显示从膨胀液中分离的脂肪间充质干细胞可以向成脂、成骨和成软骨三向分化。结论：新方法分离的细胞确为脂肪间充质干细胞，符合国际干细胞协会规定的定义标准。

简介：摘要目的研究激光照射对体外培养的婴儿血管瘤内皮细胞相关生长因子及细胞凋亡的影响。方法活化培养的婴儿血管瘤内皮细胞分为3组，强脉冲光（IPL）组（23 J/cm2，照射1次）、激光组（1 064 nm Nd：YAG激光，90 J/cm2，照射1次）和对照组（不照射激光）。照射后第1、3、7天，RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）、VEGF受体2（VEGFR-2）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA的表达，Western印迹检测VEGFR-2蛋白表达，ELISA检测细胞上清液中VEGF和bFGF的含量，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与对照组相比，1 064 nm Nd：YAG激光照射后第7天，VEGF mRNA（0.363±0.021比1.000±0.023）、VEGFR-2 mRNA（0.483±0.017比1.001±0.031）、bFGF mRNA（0.402±0.040比1.000±0.004）表达均下降，VEGFR-2蛋白表达下降（0.332±0.055比0.768±0.096），VEGF[（69.389±24.179）ng/L比（334.506±13.084）ng/L]和bFGF[（2.386±0.151）ng/L比（9.165±0.232）ng/L]分泌减少，细胞凋亡率（18.413%±2.654%比4.300%±0.036%）上升，差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，IPL组照射后第7天VEGF mRNA（0.436±0.041比1.000±0.023）、VEGFR-2 mRNA（0.493±0.037比1.001±0.031）、bFGF mRNA（0.490±0.044比1.000±0.004）表达下降，VEFGR-2蛋白表达下降（0.406±0.037比0.768±0.096），VEGF[（128.858±6.063）ng/L比（334.506±13.084）ng/L]和bFGF[（2.723±0.471）ng/L比（9.165±0.232）ng/L]分泌减少，细胞凋亡率上升（16.597%±1.877%比4.300%±0.036%），差异均有统计学意义（P<0.05）。结论1 064 nm Nd：YAG激光可能通过调节VEGF/VEGFR-2信号通路上的关键因子，以及细胞凋亡发挥对血管瘤内皮细胞的抑制作用，从而达到治疗血管瘤的作用。

简介：研究内源性大麻素N-花生四氢酸氨基乙醇（anan-damide，AEA）对体外培养的牛眼小梁细胞细胞骨架及PGE2表达的影响。方法：对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养，并行鉴定。对传3代的牛眼小梁细胞分别施加AEA浓度分别为0，0．1，1．0，10／μmol／L的无血清培养液，作用24h后提取细胞上清液，并将细胞置于倒置显微镜下摄像，计算机图像分析系统计算细胞面积。用ELISA法检测PGE2浓度的变化。结果：AEA可以产生明显的细胞舒张效应，呈浓度依赖性。而且在一定范围内可以成剂量依赖性的促进PGE2的表达。与对照组均有显著性差异（P〈0．05）。结论：AEA可引起小梁细胞的舒张和促进PGE2的释放。

简介：目的研究淫羊藿苷对体外培养的人牙龈成纤维细胞（humangingivalfibroblasts，HGF）的作用。方法体外培养HGF，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0．1μg／ml）、不同时间（24、48、72、96h）作用下HGF的增殖水平。结果淫羊藿苷（0．001～0．1μg/ml）对HGF增殖具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／ml浓度作用最明显。结论淫羊藿苷有促进HGF增殖的作用。

简介：摘要目的探讨早产儿脐血干细胞定向培养免疫体系的意义。方法收集30例早产儿，留脐带血标记后进行分离、诱导、分化、扩增培养，培养前后监测早产儿脐血的CD3,CD4,CD8,CD4/CD8;IgG,IgA,IgM水平。结果培养前CD3(60.32±5.67)%,CD4(24.88±5.02)%,CD8(18.43±4.07)%,CD4/CD8(1.25±0.25)%;IgG(62.67±5.57)g/L,IgA(1.16±0.36)g/L,IgM(1.20±0.20)g/L。培养后分别为(70.32±5.71)%,(58.88±5.21)%,(26.43±4.08)%,(2.01±0.25)%,(70.65±5.61)g/L,(1.82±0.37)g/L,(1.80±0.23)g/L。t检验,P均<0.05,差异有显著性意义。结论早产儿免疫功能低下，脐血干细胞可定向培养免疫体系，为干细胞移植作好准备。

简介：开展制作细胞模型活动，从方案设计、实施、选材、制作、修正、完善、展评等环节，为学生提供趣味性、知识性、实用性为一体的探究情境和创新空间，培养学生学科思想、创新精神、科学品质等核心素养。

简介：目的探讨体外培养颈椎后纵韧带骨化（ossificationofposteriorlongitudinalligament,OPLL）患者韧带细胞的方法并检测其成骨活性。方法2013年1~12月颈椎外伤与后纵韧带骨化患者各15例行颈前路手术治疗。术中切取韧带标本,采用组织块培养法进行体外培养。取第3代细胞进行细胞鉴定,逆转录聚合酶链反应方法测量2组细胞骨钙素、碱性磷酸酶与Ⅰ型胶原mRNA表达差异。结果组织块培养法培养7~14d见细胞萌出,细胞呈梭形、纺锤形及多角的星形,细胞核大、卵圆形、细胞边界不清。免疫细胞化学及免疫荧光检测显示波形蛋白阳性表达,证实细胞培养成功。逆转录聚合酶链反应结果提示韧带骨化组细胞骨钙素、碱性磷酸酶与Ⅰ型胶原mRNA表达明显高于外伤组。结论组织块培养法可成功培养颈椎后纵韧带组织细胞,形态学表现为成纤维细胞特点。体外培养的OPLL患者的韧带细胞具有明显的成骨活性。

简介：摘要目的探讨羊水细胞载玻片原位培养法在产前诊断中的应用价值。方法2716例羊水细胞采用载玻片原位培养法培养，培养成功后制片，用GSL-120全自动核型扫描仪进行进行扫描拍摄和分析。结果2716例羊水细胞经载玻片原位培养后制片、核型分析，成功率达100%；原代培养成功率达98.42%，传代培养率1.58%。共检出异常224例、占8.25%，其中125例21三体、31例18三体、3例13三体、4例45，X、17例47，XXY、5例47，XYY、1例48, XXY, ＋18、1例48, XXYY、26例结构异常，并鉴别出11例染色体数目异常真嵌合。结论羊水细胞原位培养法结果稳定，成功率高；能够鉴别真假嵌合，提高产前诊断的精准性。

简介：目的探讨壬基酚对大鼠睾丸支持细胞的影响及其作用机制.方法建立体外培养大鼠睾丸支持细胞以及混合培养支持细胞和生精细胞体系,以不同浓度的壬基酚(分别为0.2μg/L、1.0μg/L、3.0μg/L、5.0μg/L)作用于支持细胞和混合培养的支持细胞和生精细胞,采用MTT法测定支持细胞的活性,流式细胞仪测定支持细胞的凋亡率,RT-PCR法测定混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasLmRNA表达量的变化.结果随着壬基酚作用剂量的增大和作用时间的延长支持细胞的活性下降,且支持细胞的凋亡率随着壬基酚浓度的增大而提高;混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasLmRNA表达量均明显提高.结论壬基酚可引起支持细胞凋亡,进而通过Fas/FasL系统启动生精细胞凋亡.

简介：乳酸菌培养是乳酸菌应用的关键技术。传统的乳酸菌培养采用游离细胞悬浮培养，生产效率低，细胞密度低，细胞分离难，成本高。微囊化乳酸菌避免了传统悬浮发酵剂的缺点和限制，细胞密度可超过10cfu／g，从培养基中分离细胞不需经过超滤或冷冻离心，而用普通的离心或过滤就可进行，因此大大降低了生产成本。另外，微囊化细胞技术可以防止氧对双歧杆菌的伤害，防止噬菌体的感染，以及在冷冻过程中有很好的保护作用，用于浓缩乳酸菌生产效果比较显著。本文主要是从囊内细胞初始浓度的影响、壳聚糖包膜后细胞的定时更换培养基连续培养过程中囊内细胞的增长、增殖培养基的筛选等方面对囊内乳酸菌的浓缩培养进行了研究。

简介：陕西省妇联坚持把文明家庭创建作为妇联组织实现习总书记对陕西提出“追赶超越”的重点抓手，立足遍布城乡的“妇女之家”，以弘扬、宣传、传承好家风为目标，扎实开展各类活动，在潜移默化中培养更多的文明家庭，以优良家风带民风，努力培养更多和谐社会的活细胞，推动形成爱国爱家、相亲相爱、向上向善、共建共享的社会主义家庭文明新风尚。

简介：目的针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,建立一种理想的原代培养成骨细胞的方法,为骨替代材料的研究提供成骨细胞.方法本实验用新生1～2天大鼠颅盖骨,采用多次酶消化法进行细胞体外培养.倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定.结果所培养细胞具有成骨细胞的形态学特征及体内成骨细胞的生物学行为.结论本实验体外培养成骨细胞的方法切实可行,可为骨替代材料的研究提供种子细胞,也可为骨细胞生物学和骨组织工程的研究提供一种客观而有效的实验手段.

简介：目的观察中药凉血活血复方水醇粗提液对人永生化表皮细胞（HaCaT）的增殖抑制效应和诱导细胞凋亡作用的影响，探讨该复方治疗银屑病的可能机制。方法将不同浓度的凉血活血复方水醇粗提液分别作用于体外培养的HaCaT细胞，采用MTT法检测凉血活血复方水醇粗提液对细胞的增殖抑制作用以及药物的有效浓度；采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察细胞处理前后的形态学改变：流式细胞术检测细胞周期的变化及凋亡比率。结果凉血活血复方以时间和浓度依赖性方式抑制HaCaT细胞增殖，作用24、48、72h其IC50分别为155．83mg／mL、71．57mg／mL，41．27mg／mL。细胞形态学和流式细胞仪检测发现药物以浓度依赖性的方式干扰细胞周期、诱导细胞凋亡，细胞分裂周期阻皆滞于G2／M期。结论凉血活血复方可能通过抑制角质形成细胞的增殖、诱导其凋亡而治疗银屑痛。

简介：摘要目的优化脐带血单个核细胞的分离方法，培养、纯化及鉴定脐血间充质干细胞(UCB-MSCs)，并观察其生物学特性，探讨单份和混合UCB-MSCs的区别。方法采用四联袋方法和试管方法分离脐带血单个核细胞，比较两种方法分离后单个核细胞的回收率、细胞数及红细胞混入量。鉴定UCB-MSCs向神经样细胞横向分化的能力。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析单份组和混合组培养液上清中白细胞介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)含量。符合正态分布并方差齐的，根据数据类型应用参数检验中的单因素方差分析或t检验，不符合正态分布的应用非参数检验中秩和检验。结果试管法和四联袋法分离的单个核细胞回收率分别为(60.23±6.34)%、(71.92±11.30)%(P<0.05)。试管法和四联袋法分离后单个核细胞(MNC)数量分别为(6.12±1.21)×107、(9.29±3.11)×107个(P<0.05)。混合组的培养液上清中IL-2和IFN-γ含量高于单份组。单份组和混合组的IL-2水平分别为(0.52±0.13)、(1.50±0.23) pg/ml(P<0.05)；单份组和混合组IFN-γ水平分别为(43.16±4.75)、(56.07±6.67) pg/ml(P<0.05)。巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)染色均为阳性表达。结论采用四联袋方法分离的单个核细胞回收率和细胞数均高于试管方法，四联袋法分离单个核细胞是一种高效、高质量和安全的分离方法，UCB-MSCs可以向神经样细胞分化，混合组UCB-MSCs增殖活跃，分泌更多IL-2和IFN-γ细胞因子。

简介：目的：建立分离、培养和鉴定成年小鼠心脏干细胞的方法并初探其离子通道特性。方法和结果：（1）分离Langendorff法灌流小鼠心脏，用胶原酶酶解法制备单个心肌细胞，差速离心法将较大的细胞（如心室肌细胞）和较小的细胞分离卉。取用较小细胞，用c-kit抗体孵育后，然后用免疫磁珠分离法分离心脏干细胞。

简介：目的建立稳定的羊水及绒毛细胞原位培养方法。方法采用细胞原位培养载玻片法,对100例羊水和30例绒毛标本进行原位培养收获,制备好的玻片于GSL-120染色体全自动扫描系统进行克隆识别扫描。结果结合染色体全自动扫描平台,建立了条件稳定、操作简单、分析过程简化的原位培养载玻片法。100例羊水标本均培养成功,其中异常4例,核型分别为2例46,XX,inv(9),1例47,XX,+21,1例45,XY,rob(13;14);30例绒毛标本中,10例为介入性产前诊断标本,均培养成功,核型均正常;余20例为流产绒毛,成功17例,其中5例异常,核型分别为2例47,(XX/XY),+16,1例47,XX,+14,1例45,X,1例47,XX,+3。结论细胞原位培养载玻片法培养周期短,操作简便,染色体形态好,核型多且完整,配合染色体全自动扫描系统,大大缩短阅片时间,能更加及时准确地得出产前诊断结果。