简介：摘要目的探讨柯里拉京(Corilagin)对小鼠巨噬细胞RAW264.7的M2型极化和纤溶相关细胞因子[白细胞介素(IL)-10和基质金属蛋白酶(MMP)-9]表达的影响。方法取RAW264.7细胞系(中乔新舟生物科技有限公司)分为6组：M0型对照组、M0型低浓度(4 mg/L)Corilagin组、M0型高浓度(32 mg/L)Corilagin组、M2型极化组、M2型极化低浓度(4 mg/L)Corilagin组和M2型极化高浓度(32 mg/L)Corilagin组，分组培养24 h，采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测M2型巨噬细胞标识分子和纤溶相关细胞因子的mRNA表达水平。各组间比较采用单因素方差(One-way ANOVA)和t检验。结果高浓度Corilagin(32 mg/L)处理后RAW264.7细胞的M2型极化标识分子CD206、Arg-1和Fizz1的mRNA表达水平分别为33.61±1.36(F＝24.990，P<0.05)、3.74±0.73(F＝73.100，P<0.01)和2.25±0.74(F＝11.100，P<0.01)；同时，高浓度Corilagin处理的M2型巨噬细胞的纤溶相关细胞因子IL-10和MMP-9的相对表达量分别为1.53±0.30(F＝7.150，P<0.05)和1.37±0.05(F＝53.950，P<0.01)。结论Corilagin可能通过抑制巨噬细胞M2型极化、影响M2型巨噬细胞的亚型分布和促进纤溶相关细胞因子表达，参与伤口愈合的病理生理过程。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miR)-155对氧化型低密度脂蛋白(oxidized-LDL particles，oxLDL)活化的RAW264.7细胞分泌的趋化因子的调控作用及其对辅助性T细胞1(helper T cell 1, Th1)分化的间接调控作用。方法培养RAW264.7细胞，向细胞内转染寡聚核苷酸(miR-ctrl、miR-155 mimics、miR-155 inhibitor、miR-155 mimics＋siRNA-ctrl和miR-155 mimics＋CXCL10 siRNA)，并以此对细胞进行分组。oxLDL刺激所有细胞活化，实时定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)方法检测趋化因子表达情况，将上述细胞与纯化并活化的CD4＋T细胞共培养后，流式细胞术检测Th1细胞的分化情况。结果miR-155促进oxLDL活化的RAW264.7细胞分泌CXCL10(mRNA水平：oxLDL刺激细胞6、12和24 h的F值分别为44.86、214.91、688.88；蛋白水平：oxLDL刺激细胞6、12和24 h的F值分别为284.57、144.66、60.95，P值均<0.05)；在RAW264.7中上调miR-155的表达可促进CD4＋T细胞分化为Th1细胞(F＝26.72，P<0.05)；阻断RAW264.7细胞中CXCL10的表达则抑制miR-155对Th1细胞的间接调控作用(t＝3.78，P<0.05)。结论miR-155可通过促进oxLDL活化的RAW264.7细胞分泌CXCL10间接促进Th1细胞分化。

简介：摘要目的探讨内质网应激（ERS）在二氧化硅（SiO2）诱导的RAW264.7细胞自噬中的作用及对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的影响。方法以200 μg/ml SiO2刺激的RAW264.7细胞为体外细胞模型，以SiO2不同处理时间分组，包括0 h组（对照组）、6、12、24和48 h组，通过吖啶橙及单丹（磺）酰戊二胺荧光（MDC）染色检测细胞自噬小体的形成。应用实时聚合酶链反应（实时PCR）检测自噬相关分子Beclin1 mRNA表达，蛋白免疫印迹（western blotting）检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ与Beclin1的表达；应用实时PCR和western blotting检测ERS特异标记分子BiP的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测RAW 264.7细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）和TNF-α的分泌。以ERS抑制剂4-PBA进行干预试验，包括空白对照组、SiO2组、1 μmol/L 4-PBA+SiO2组、10 μmol/L 4-PBA+SiO2组、20 μmol/L 4-PBA+SiO2组，检测各组LC3Ⅰ、LC3Ⅱ与Beclin1蛋白的表达及TGF-β1、TNF-α的分泌变化。结果与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞各时间组荧光强度均明显增强，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞各时间组的Beclin1 mRNA表达均明显增加，LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达均明显增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞6、12、24 h组BiP mRNA和蛋白表达均明显增加，6 h达高峰，差异均有统计学意义（P<0.05）；与SiO2组比较，随着4-PBA浓度增加，RAW264.7细胞的LC3-II和Beclin 1蛋白水平逐渐下调，差异均有统计学意义（P<0.05）；与SiO2组比较，1、10、20 μmol/L 4-PBA+SiO2组RAW264.7细胞TNF-α分泌水平明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论SiO2诱导的ERS可能参与了RAW264.7细胞自噬以及TNF-α的分泌过程。

简介：摘要目的探讨微RNA（miR）-146a参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法①培养RAW264.7细胞，给予单钠尿酸盐（MSU）晶体刺激建立痛风炎症模型，经200 μm/ml的MSU晶体刺激后，分别在0、3、6、12 h时间点收集细胞及上清液，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR，TaqMan探针法）检测miR-146a，RT-qPCR检测：白细胞介素-1受体相关激酶（IRAK）1、肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）6、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA，ELISA检测培养上清液IL-1β浓度，蛋白质印迹法检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。②用Lipofectamine 2000将miR-146a模拟物（mimic）、miR-146a抑制物（inhibitor）及两者相应对照物分别转染至RAW246.7细胞，将其设置为miR-146a mimic组、miR-146a mimic对照组（mimic control）、miR-146a抑制物组、miR-146a抑制物对照组（inhibitor control），分别用200 μg/ml的MSU晶体刺激各组细胞6 h后，分别检测各组miR-146a、IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA和TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。采用SPSS 21.0统计软件进行分析，近似正态分布定量资料以±s描述，组间比较采用独立样本t检验和重复测量方差分析。结果① MSU晶体刺激RAW264.7细胞后，实验组在3、6、12 h miR-146a的表达水平较对照组降低（t=-10.234，-17.059，-26.204，P均<0.01），实验组在6、12 h IL-1β蛋白浓度表达水平较对照组升高（t=7.552，9.007，P<0.01）；分别检测2组IRAK1、TRAF 6、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA的表达水平：刺激组在3、6 h IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较对照组升高（t=9.847，6.147，P<0.01；t=3.49，3.32，P<0.05；t=3.643，8.471，P<0.05；t=8.726，49.68，P<0.01），实验激组在3个时间点的TNF-α mRNA的表达水平均较对照组升高（t=4.691，11.115，12.816，P<0.01）。分别检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β的蛋白表达水平：实验组6、12 h的TRAF6、NF-κB蛋白相对表达较对照组升高（t=8.052，8.119，P<0.01；t=22.454，5.845，P<0.01），实验组在3个时间点IL-1β蛋白表达较对照组均升高（t=18.561，4.74，8.432，P<0.01）。②转染后检测miR-146a mRNA表达，mimics组较mimics control组明显升高（t=31.769，P<0.01）；inhibitor组较inhibitor control组明显降低（t=-4.22，P<0.05）。③ miR-146a mimic组经200 μg/ml MSU晶体刺激6 h后，mimic组IRAK1、TRAF6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较mimic control组均降低（t=-14.754，-21.201，-19.381，-17.323，P<0.01），TRAF6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平较mimic control组也降低（t=-3.137，-32.974，-18.789，P<0.05），inhibitor组结果正好相反。结论①过表达miR-146a可降低IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β表达，抑制MSU晶体介导的炎症，而抑制miR-146a表达可使炎症加重，提示miR-146a参与负反馈调节痛风炎症。② miR-146a可能靶向NF-κB信号通路参与了痛风性关节炎的自发性缓解。