简介:目的建立HLA分型基因微阵列新技术,并与PCR-SSO(PCR-顺序特异性寡核苷酸)、PCR-SSP(PCR-序列特异性引物)及SBT(DNA测序)进行方法学比对。方法基于反向SSO原理设计引物和探针→探针点样→标本处理和标记→杂交检测分析,其依据的原理和主要步骤为:(1)PCR扩增;(2)DNA杂交;(3)酶联染色;(4)结果判断。以此构建HLA-B27分型基因微阵列系统,并检测88例标本,将此结果与PCR-SSO、PCR-SSP及金标准的SBT三种方法进行比对。结果成功构建了HLA-B27分型基因微阵列系统。其与PCR-SSO、PCR-SSP及SBT方法相比总体一致率为98.86%;B27阳性标本结果的一致率为97.72%(86/88);B27阴性标本结果的一致率为100%(4/4)。结论与目前常用的PCR-SSO,PCR-SSP及SBT等方法相比,HLA分型基因微阵列具有高效、快速、稳定、经济等特点,可同时进行HLA-B27基因检定与等位基因分型,不失为临床及造血干细胞库大规模HLA分型(中低分辨)的一种新方法。
简介:以往在血型血清学疑难配血中往往通过血型定型(AB0正反定型、RhDCE定型等),抗体筛查(筛选细胞、谱细胞等),抗体Coombs及吸收放散实验等步骤一般即可完成相应的配血过程。但在血清学检测条件不充分时如稀有血型抗体缺乏、谱细胞的谱型不全时等,对于稀有表型及存有高频抗原抗体的血液的配型,常规的检测方法与路径有时就显不够。此时如配合以血型基因分型检测可能的血型表型基因并判断相应的抗体存在,应当是解决问题的一个路径。我室最近在Diego系统抗体缺乏、谱细胞谱不完全的情况下,结合基因分型的方法,解决了2份存有抗高频抗原Dib抗体的定型与输血问题。
简介:目的:应用PCR-SSP法对吉林省汉族人群人血小板同种抗原系统(HPA)1~6进行基因及其多态性分布特征研究。方法:用DNA试剂盒提取外周血标本中DNA,通过特异性引物(PCR—SSP)扩增HPA等位基因。检测200名HPAl~6抗原系统共12个抗原的基因分型。结果:200名无偿献血并无血缘关系的吉林省汉族人群HPA基因频率为:HPA-1a0.9900、Ib0.0100;2a0.9300、2b0.0700;3a0.5575、3b0.4425;4a1.0000、4b0.0000;5a0.9900、5b0.0100;6a0.9875、6b0.0125。结论:吉林地区血小板志愿捐献者HPAl~6抗原系统的基因频率符合Hardy-Weinberg遗传定律,与其他地区和国家的同类资料相比显示出种族和地域性差异,由此建立起了吉林地区已知HPA基因型的血小板捐献者资料库。
简介:摘要目的对SSP-PCR检测HLA-B27在强直性脊柱炎患者中的应用价值进行评价分析,为今后的临床诊断工作提供有价值的参考信息.方法选择2014年1月-2015年6月间我院收治的符合临床诊断标准的强直性脊柱炎患者68例作为研究对象,另选择同期健康体检者70例作为健康对照组,分别采取流式细胞术和SSP-PCR技术对受试者HLA-B27进行检测,而后对检测结果进行统计分析.结果流式细胞术与SSP-PCR技术对强直性脊柱炎患者的检测结果比较差异不具有统计学意义(P>0.05);强直性脊柱炎患者HLA-B27检测水平与健康对照组比较差异显著(P<0.05);强直性脊柱炎患者HLA-B27阳性率明显高于对照组(P<0.05),且不同年龄、不同性别者检测结果也有所不同(P<0.05).结论HLA-B27与强直性脊柱炎之间存在明显的相关性,经SSP-PCR方法对HLA-B27进行检测的准确性较高,可为临床诊断和治疗提供可靠的参考依据.关键词强直性脊柱炎;人类白细胞抗原-B27;流式细胞术;SSP-PCR中图分类号R593文献标识码B文章编号1008-6315(2015)12-0739-01
简介:【摘要】目的:探讨SSP培训及其在住院医师规范化培训教学中的应用效果。方法:将我院2020年1月-2021年1月40例住院规培医师,数字表随机法分二组。对照组给予常规教学,实验组实施SSP培训。比较两组培训方案好评度、临床核心理论考核分和临床核心技能考核分。结果:实验组培训方案好评度高于对照组,临床核心理论考核分和临床核心技能考核分高于对照组,P<0.05。结论:住院规培医师实施SSP培训效果确切,可提高住院规培医师的技能掌握水平和好评度。
简介:1985年Cetus公司的Mullis发明的聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是现代分子生物学研究中的一项非常重要的技术,它可在短时间内在试管中获得数百万特异DNA序列的拷贝,从而很容易地对目的基因进行分析、鉴定以及其它操作。这一技术现已广泛应用于生物学的各研究领域。PCR的定量实质是核酸的体外扩增,当人们利用技术扩增出大量的特异DNA序列后,还必须对这些PCR产物进行定性或定量检测,特别是临床检验中,定量分析PCR产物可以为临床诊断、疗效观察等提供更为准确的信息。另外,在研究基因的表达调控研究中,经常利用RT-PCR定量检测某一特定的转录mRNA,因此,建立灵敏、准确、重复性好的PCR产物定量检测法是目前PCR及其相关技术研究的特点,电是定量PCR技术的基础。本文将对这一技术近年来的研究进展状况作一简要综述。
简介:目的:用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法准确地定是检验血清中乙型肝炎病毒(HBV)的数量和免疫指标,以指导临床。方法:采用HBV-DVAFQ-PCR诊断试剂盒,以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术组合所产生的实时检验定量PCR方法,检测了58例临床血清标本。结果:经FQ-PCR检测,9例HBV的HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBcAb都阳性标本,其HBV-DNA的阳性率为100%,平均HBV-DNA拷贝数为2.0×10^8/ml;16例HBsAg、HBeAb、HBcAb都阳性的标本,其阳性率为62.5%(10例),平均拷贝数为5.2×10^5/ml,而常规PCR只有33%的阳性率;7例HBsAb、HBeAb、HBcAb都阳性的标本,其阳性率为14.3%(1例),平均拷贝数为4.7×10^3ml。结论:HBV-DNA的FQ-PCR检测较常规PCR更具有较高的灵敏度和特异性,且定量准确,结果可靠,能够避免PCR后处理导致物假阳性污染,可以真实反映HBV的感染和低复制状态,对于乙型肝炎的临床诊断,治病方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。