简介：摘要microRNA是一类长约24个碱基的非编码RNA，其广泛表达在各种生物体内，发挥重要的调节功能，在免疫系统中，亦有报道认为其参与了免疫细胞的发育、活化等。通过实时定量PCR研究发现mir-128-2高表达在双阳性、双阴性T细胞和共同淋巴细胞祖细胞中，而在成熟T细胞和成熟B细胞中表达显著降低。为进一步探讨mir-128-2在淋巴细胞发育中的作用，我们通过制备过表达mir-128-2逆转录病毒，并感染小鼠骨髓干细胞制备骨髓嵌合小鼠模型。通过FACS、实时定量PCR及Northern-blot鉴定模型成功建立。进一步使用FACS分析发现mir-128-2过表达后阻碍了B细胞发育，对T细胞发育无显著影响。进一步研究发现mir-128-2过表达后并不影响B细胞的凋亡和自我增殖，而可能是阻止了CLP向PreProB细胞的发育。通过嵌合小鼠模型建立和表型分析可见mir-128-2参与了B细胞发育的调控，表现为阻碍B细胞的发育。

简介：目的:建立白细胞及骨髓有核细胞减少的小鼠模型.方法:用直线加速器不同剂量照射小鼠.结果:小鼠白细胞及骨髓有核细胞明显减少.结论:此方法可建立比较理想的白细胞、骨髓有核细胞减少模型.

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简介：摘要经典的BCR/ABL阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)是一组起源于造血干细胞(HSC)的恶性克隆性髓系肿瘤，包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF)。2005年MPN患者存在JAK2V617基因突变被首次报道，JAK2、MPL和CALR突变为MPN的常见驱动基因突变。近年，随着二代测序技术在临床的广泛应用，MPN的非驱动基因突变谱系得以明确，如TP53、ASXL1、EZH2、TET2、IDH1/2及DNAMT3A等突变。为了阐释上述基因突变在MPN发病过程中的作用机制，相关研究者构建了一系列小鼠模型。笔者就伴不同基因突变的MPN小鼠模型及其在新药临床前研究中应用现况进行阐述。

简介：利用显微注射的方法,分别将三株不同类型的经过遗传修饰的中靶ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,通过胚胎移植将注射后的囊胚引入受体小鼠子宫中,分别获得了不同整合度的嵌合体小鼠,将高嵌合度小鼠与C57BL/6J小鼠杂交,对这些仔鼠进行PCR及Southern鉴定的结果表明,三株修饰后的ES细胞均能整合入生殖系,得到了棕褐色子代鼠,表明获得了种系嵌合体小鼠.

简介：摘要目的研究人骨髓来源间充质干细胞(MSC)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型的保护作用。方法实验性研究。24只雄性SPF级BALB/c小鼠，随机分成3组：对照组、ALI组和干预组。在气管滴注LPS(5 mg/kg)造模后2 d取小鼠肺组织，HE染色观察肺损伤的病理改变，并进行肺损伤评分；收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)，瑞氏-吉姆萨染色法计数白细胞和分类，测定总蛋白和炎症细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)，白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度；测定肺组织湿干比(W/D)；RT-PCR检测半胱天冬酶3(Caspase 3)、角质细胞生长因子2(KGF-2)、表面活性蛋白C(SPC)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达情况；TUNNEL方法检测肺内细胞凋亡；免疫组化检测肺内PCNA；Masson方法检测肺内胶原纤维沉积；小动物活体成像示踪MSC在肺内的定植情况。结果与对照组相比，由LPS诱导的急性肺损伤小鼠模型中肺损伤明显严重(11.75±1.71)分比(2.75±0.96)分，(P<0.01)，W/D明显升高(5.23±0.15)比(4.36±0.29)，P<0.01)，总蛋白水平升高(1 181.80±297.11) mg/L比(196.81±58.54) mg/L，(P<0.01)。BALF中白细胞、中性粒细胞和巨噬细胞增多(184.00±20.40) ×104/L比(45.00±12.09) ×104/L；(152.00±48.50) ×104/L比(1.00±0.58) ×104/L，(20.00±5.03) ×104/L比(2.00±1.15) ×104/L，(P值均<0.01)；MSC干预后肺损伤明显减轻(4.50±1.29)分，W/D(4.53±0.15)和总蛋白水平(588.27±72.57)mg/L明显下降；BALF中的白细胞(84.00±28.53)×104/L、中性粒细胞(59.00±20.43)×104/L和巨噬细胞(8.00±3.64)×104/L明显减少。BALF和血浆中的IL-1β，IL-6和TNF-α均较健康对照组明显升高，加入MSC的干预组则可明显降低；ALI组KGF-2 mRNA和SPC mRNA明显低于对照组，干预组KGF-2 mRNA和SPC mRNA明显高于ALI组；ALI组caspase-3 mRNA和PCNA mRNA明显高于对照组，干预组caspase-3 mRNA和PCNAmRNA明显低于ALI组，差异均有统计学意义(P<0.05)；病理检查结果显示ALI组肺内胶原纤维沉积和凋亡增多，而干预组肺内胶原纤维沉积和凋亡减少。小动物活体成像提示MSC 2 h时已到达肺内血管。MSC只定居在肺内，未出现在肝脏，骨骼，脾脏等器官。结论人骨髓来源间充质干细胞可改善小鼠ALI。

简介：本研究探讨人源骨髓间充质干细胞（MSC）输注对免疫介导性再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血功能及生存率的影响．采用雌性BALB／c小鼠30只，参照姚军等方法建立免疫介导性再生障碍性贫血模型，实验分模型组、MSC组及照射组。MSC组于制模后3天从小鼠尾静脉1次性输注人骨髓MSC1×10^6，观察各组小鼠外周血象变化、第28天存活率、骨髓有核细胞数量、造血集落生成和骨髓病理学特征。结果显示：于制模后第7天，模型组外周血WBC显著低于MSC组和照射组，分别为（0．65±0．05）×10^9／L，（2．45±0．71）×10^9／L，（2．30±0．33）×10^9／L；第10天3组均表现为全血细胞减少，第14天模型组血象指标仍持续降低，而MSC组及照射组血象指标开始回升，至28天3组小鼠存活率分别为18．2％、80％和100％，MSC组小鼠存活率显著高于模型组（P〈0.01）。MSC组小鼠单侧股骨有核细胞数量、造血祖细胞集落生成数量均显著高于模型组，而与照射组结果一致。结论：MSC输注可减轻再生障碍性贫血模型小鼠骨髓造血衰竭程度，提高存活率。

简介：摘要目的建立嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗相关细胞因子释放综合征(CRS)的小鼠模型。方法通过分子克隆及慢病毒转染技术，构建靶向人CD19分子的CAR-T细胞，采用流式细胞术检测CAR-T细胞转染效率，酶联免疫吸附试验(ELISA)法及流式细胞术检测CAR-T细胞特异性杀伤靶细胞的能力。通过尾静脉注射CAR-T细胞至荷瘤重症联合免疫缺陷裸鼠体内，小鼠分为磷酸缓冲液组、低负荷组(注射1×105个人淋巴瘤细胞Raji-Luc2细胞)和高负荷组(注射5×105个Raji-Luc2细胞)。采用动物活体成像法检测肿瘤治疗效果，ELISA法检测小鼠血清中细胞因子人白细胞介素2(IL-2)、人γ-干扰素(IFN-γ)、鼠IL-6、鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的水平。结果经尾静脉注射人T细胞和T细胞+OKT-3抗体后，T细胞组和T细胞+OKT-3组小鼠的健康得分分别为(1.15±0.08)分和(2.90±0.15)分，差异有统计学意义(P<0.001)。T细胞+OKT-3组小鼠血清中人IL-2、人IFN-γ、人IL-15、鼠IL-6、鼠GM-CSF水平分别为(1 064.00±50.14)、(1 285.00±193.90)、(202.4±18.76)、(1 478.00±289.20)和(350.70±42.27)pg/ml，均高于T细胞组[分别为(22.67±6.36)、(23.67±3.71)、(44.33±14.45)、(147.30±36.20)和(138.00±22.74)pg/ml，均P<0.05]；OKT-3联合人T细胞引起小鼠血清中细胞因子人IL-2、人IFN-γ、鼠IL-6、鼠GM-CSF水平迅速升高，并伴有体温升高及体重下降。成功构建靶向CD19分子的CAR-T细胞，流式细胞术检测CAR-T细胞阳性率>30%。ELISA结果显示，在CD19抗原存在时，CAR-T19细胞与Raji、Nalm-6共孵育组细胞分泌IL-2和IFN-γ的水平分别为(561.00±37.07)、(680.30±71.27)、(369.00±25.71)和(523.00±26.31)pg/ml，均高于与K562共孵育组[分别为(55.00±20.53)和(64.00±7.55)pg/ml，均P<0.001]。小鼠成像实验显示，小鼠成瘤后第7天经尾静脉回输活化后的CAR-T19细胞，成瘤第13天，低负荷和高负荷组小鼠肿瘤荧光强度均低于接种肿瘤的第7天，高负荷组肿瘤荧光强度由144.00±24.69减少至5.02±2.35(P＝0.005)，低负荷组肿瘤荧光强度由58.47±9.36减少至3.48±1.67(P＝0.004)。荷瘤小鼠注射CAR-T19细胞72 h后，血清中T细胞活化相关细胞因子人IL-2、人IL-15、人IFN-γ水平迅速增高，单核细胞相关因子鼠IL-16、鼠GM-CSF分泌增加，同时伴随有体温升高和体重降低等CRS典型特征。结论体外成功构建靶向CD19分子的CAR-T细胞，通过CAR-T细胞回输治疗验证了小鼠体内CRS现象的发生，为CAR-T细胞治疗相关CRS的发生机制及CRS预防策略提供了动物模型参考。

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简介：目的观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓细胞周期和凋亡的影响，探讨其可能造血调控作用机制。方法用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数以及骨髓细胞周期和调亡的影响。结果右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞（BMC）数，右归丸高剂量对血小板（PLT）和白细胞（WBC）有明显升高作用。右归丸低、高剂量组均能促进骨髓GO／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化，从而导致G2／M期细胞比例明显升高，增殖指数（PI）也明显升高。中、低剂量组右归丸的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论右归丸可能通过促进骨髓细胞修复受损的DNA，加速通过GI／S和S期监测点，进行增殖和分化；抑制造血细胞的凋亡；调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制，从而促进损伤骨髓造血功能恢复。

简介：摘要目的观察当归补血汤方对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响。方法将44只NH小鼠随机分为空白组（n=13）、对照组（n=15）、中药组（n=16）。空白组予腹腔注射生理盐水，剂量为150mg/kg；后两组均腹腔注射环磷酰胺150mg/kg复制小鼠骨髓抑制模型，1d后全部经目内眦眼底取血，检测血常规。中药组予当归补血汤10mL/kg灌胃，2次/d，连续10d。结果中药组外周血白细胞及血小板较对照组显著升高。结论当归补血汤明显升高放化疗后骨髓抑制所致的外周血白细胞及血小板的减少。

简介：背景：建立人骨髓间充质干细胞与猴的嵌合体肝脏对研究干细胞体内增殖与分化具有重要意义。目的：应用成人骨髓间充质干细胞建立人-猴肝脏嵌合体动物模型。方法：分离成人骨髓间充质干细胞,纯化并培养至6代,使细胞量大于5×108。转染绿色荧光蛋白基因标记后在B超引导下移植到妊娠10周的胎猴肝脏中,幼猴出生后1个月和3个月,穿刺取肝脏组织活检,切片后荧光显微镜观察带绿色荧光的人源细胞数量及分布,免疫组织化学染色法检测人白蛋白的表达。结果与结论：荧光显微镜观察发现,幼猴出生后1个月及3个月均发现有人源骨髓间充质干细胞在肝脏内存活,并发生迁移,分布趋向于集中。免疫组织化学检测发现,幼猴出生后1个月及3个月肝脏内有表达人白蛋白的细胞存在,分布与带有绿色荧光的细胞较为一致。提示应用成人骨髓间充质干细胞在猴胚胎早期能够建立人-猴肝脏嵌合体,人源性骨髓间充质干细胞可在猴肝中分化成具有合成白蛋白功能的细胞。

简介：近年来胰腺癌的发病率呈上升趋势．其中80％～90％为起源于胰腺导管上皮的胰腺导管腺癌（Dancreaticductaladenoma．PDA）。胰腺癌起病隐匿．缺乏特异性临床表现，且容易转移．恶性程度高．导致其早期诊断困难，确诊时大多已处于晚期而无法施行根治手术。胰腺癌现有治疗方案大致包括联合化学治疗（化疗）、新辅助放射治疗、分子靶向治疗，但治疗效果不十分理想，胰腺癌的5年生存率不足4％，是目前预后最差的恶性肿瘤之一。

简介：为建立小鼠免疫低下模型,应用环磷酰胺对小鼠引起的免疫低下状态进行了实验研究.一次性腹腔给予25～30g的雄性BalB/c小鼠40mg/kgBW的环磷酰胺,第二天,小鼠抗体生成细胞实验和血清溶血素实验呈免疫低下状态;给予100mg/kgBW的环磷酰胺,第二天,小鼠迟发型变态反应(足跖增厚法)实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验呈免疫低下状态.给予环磷酰胺一周后,小鼠免疫状态恢复至正常,甚至会出现免疫增强的现象.小鼠的脾脏指数和体液免疫指标对环磷酰胺较敏感.

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简介：摘要目的探讨骨髓单个核细胞移植对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠微小RNA（miRNA）-21和miRNA-155表达影响。方法健康清洁级6~8周龄KM小鼠数字随机分为移植组、模型组和正常对照组，每组15只。移植组和模型组用葡聚糖硫酸钠（DSS）方法造模24 h，移植组小鼠经尾静脉注入0.4 ml 4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记的P3-BM-MNCs细胞悬液（3.2×106个/ml）；模型组及正常对照组大鼠注入0.4 ml磷酸盐缓冲液（PBS）。采用UC疾病活动指数（DAI）对小鼠的一般情况进行评分；采用HE染色观察小鼠结肠组织病理变化；采用实时定量PCR检测miRNA-21和miRNA-155信使RNA（mRNA）表达。结果正常对照组、模型组和移植组的DAI评分分别为0(0,1)、3.1(2.8,3.3）和2.7(2.4,3.1)，与正常对照组比较，模型组和移植组小鼠DAI评分较高（P<0.05）；与模型组比较，移植组小鼠DAI评分较低（P<0.05）。正常对照组、模型组和移植组的组织损伤大体评分为0（0，1）、3（3，4）和1（1，2），组织损伤病理评分分别为0（0，1）、16（12，16）和6（6，8），与正常对照组比较，模型组和移植组小鼠组织损伤评分较高（P<0.05）；与模型组比较，移植组小鼠组织损伤评分较低（P<0.05）。正常对照组、模型组和移植组的miRNA-21 mRNA表达水平分别为0.87±0.15、2.38±0.29和1.59±0.32，miRNA-155 mRNA表达水平分别为1.87±0.46、7.38±1.97和3.92±0.84，与正常对照组比较，模型组和移植组小鼠miRNA-21和miRNA-155 mRNA表达较高（P<0.01）；与模型组比较，移植组小鼠miRNA-21和miRNA-155 mRNA表达较低（P<0.05）。结论骨髓单个核细胞移植可改善UC模型小鼠组织病理学评分和DAI评分，其机制可能与下调miRNA-21和miRNA-155 mRNA表达相关。

简介：摘要目的分离、培养符合实验要求的小鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定，为进一步的研究打基础。方法采用贴壁培养法培养小鼠骨髓间充质干细胞，观察细胞的形态及生长特性，并应用流式细胞仪对细胞表面抗原CD34、CD45、CD29、CD44进行表型鉴定。结果原代分离的间充质干细胞在接种后培养24小时，细胞开始贴壁，胞体呈圆形或多边形，培养第3-5天，细胞开始较紧密贴附壁上并开始有细胞呈梭形，培养第7天开始观察到细胞分裂，随着细胞数的增加，细胞的生长速度变快，逐渐成漩涡状排列，培养第12天贴壁细胞长满瓶底的80%，并融合成片。传代后细胞生长迅速，培养7天左右即可长满瓶底的80%。传至10代仍具有良好的增殖活性。流式细胞仪检测第4代及第8代MSCs细胞均不表达CD34、CD45，但表达CD29、CD44，纯度分别为73.8%、91.65%。结论采用贴壁培养法可获得生长状态良好、增殖能力强的间充质干细胞，随传代数增加，其纯度增加，且该方法简单、实用。