简介：[摘要]目的：用大鼠骨髓单核细胞提取新鲜分离骨髓细胞，植入脊髓损伤大鼠模型，观察脊髓功能恢复、神经再生、新生血管形成及长期预后。方法：试验于2020年6月至2021年6月在研究中心进行。实验水平：生物安全一级。试验材料：SD大鼠体重量为200~220 g的洁净级，实验动物中心提供，实验动物处理时应符合动物伦理规范。取大鼠胫骨和股骨干的骨髓细胞，采用密度梯度离心法，备取骨髓单个核细胞。建立大鼠髓损伤的动物模型，将20只造模成功的大鼠随机分为2组：模型+细胞组(n=10)：脊髓充分横断T9~10后，椎管内注射骨髓单个核细胞；模型+ DMEM组(n=10)：脊髓完全横断T9~10后，在损伤邻近区注射 DMEM。假术组(n=10)：只在T9-10棘突和椎板上剪除，对脊髓无损伤，逐层缝合。检测宿主脊髓移植细胞存活状况， BBB评分评价脊髓神经功能恢复情况。结果：假术组的评分在所有的时间点上没有显著的差别，都是正常的。模式+ DMEM组评分0，脊髓功能恢复不明显。脊髓模型+细胞组在2、4、6、8周均呈逐步恢复状态。结果表明： DMEM组和假手术组均有显著差异(P

简介：摘要目的探讨2例老年髋部骨折患者骨髓单个核细胞（BMMNCs）中是否存在与调节免疫炎症相关的亚群，比较其BMMNCs亚群差异。方法选取2例老年髋部骨折患者作为研究对象，记为A和B。检测患者外周静脉血补体（C）3、C4、白细胞介素（IL）-2、IL-6、IL-10和淋巴细胞亚群。对2例患者的BMMNCs进行单细胞转录组测序分析，将细胞聚类分群，对每个亚群差异表达倍数前20的基因进行基因本体论（GO）及京都基因和基因组百科全书（KEGG）分析，判断每个亚群的主要功能，找出调节免疫炎症的相关亚群及基因。比较2例患者的预后、BMMNCs亚群种类及对应细胞比例差异。结果A患者外周血指标仅IL-10稍偏高。B患者C3偏低，C4接近正常值下限，IL-2、IL-6、IL-10明显偏高，CD8+T细胞百分比偏低，CD4+/CD8+偏高，其余指标未见明显异常。经单细胞转录组测序分析，将2例患者的BMMNCs分成相同的5个亚群，其中亚群2和亚群4的功能与调节免疫炎症相关，亚群2中的CCL4、CCL5、LTB、CXCR4及亚群4中的C1QA、C1QB、CD14、SPP1可能是关键基因。A患者最终预后较好，其BMMNCs中构成亚群2和亚群4的细胞比例均高于B患者[47.00%（1 431/3 045）vs. 29.28%（882/3 012），5.88%（179/3 045）vs. 3.85%（116/3 012）]。结论运用单细胞转录组测序技术能将老年髋部骨折患者的BMMNCs分成不同亚群，其中有与调节免疫炎症相关的亚群，其可能影响患者伤后免疫炎症状态及预后。

简介：目的：探讨同种异体骨髓单个核细胞（BM—MNCs）移植大鼠溃疡性结肠炎模型的作用。方法：将DAPI标记的同种异体大鼠骨髓单个核细胞（BM—MNCs）经尾静脉注射移植到大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型体内（模型组），以尾静脉注射等量PBS的UC大鼠作为对照组。光镜观察大鼠结肠组织病变改变，荧光显微镜观察标记DAPI的BM—MNCs在结肠组织中的定植及分布情况，免疫荧光检测BM—MNCs中CKl9、CD34的表达情况。结果：移植组大鼠结肠组织可见新生黏膜上皮及腺体，黏膜下有新鲜至成熟肉芽组织生成，明显优于对照组；移植14天，大鼠结肠组织中可观察到DAPI标记的BM—MNCs细胞；DAPI标记的细胞可表达血管内皮细胞特异性表达蛋白CD34或黏膜上皮细胞特异性表达蛋白CK19。结论：BM—MNCs可向受损病变部位结肠组织迁移和定植。且分化为血管内皮细胞和黏膜上皮细胞。

简介：目的建立犬骨髓单个核细胞（Bonemarrowmononuclearcells,BMNCs）的分离培养、体外扩增和成骨诱导方法,为骨缺损的修复提供理想的骨组织工程种子细胞。方法用1.063g/mlpercoll液分离2.5mlBeagle犬骨髓,利用细胞贴壁筛选法进行分离、培养、扩增和成骨诱导。结果采用1.063g/mlpercoll液可获得纯度较高的BMNCs,接种细胞生长良好,平均倍增周期为1d,经成骨诱导培养后可定向分化为成骨细胞。结论采用1.063g/mlpercoll液能够较好的进行Beagle犬BMNCs的分离培养和体外扩增,分离得到的细胞具备骨髓基质干细胞（Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs）的特性。

简介：目的：探讨骨髓单个核细胞（BMMSC）移植治疗心肌梗死的疗效。方法应用计算机从PubMed、Cochrane、中国期刊全文数据库、万方数据库、维普资讯等电子数据库中检索2014年8月以前有关自体骨髓单个核细胞移植治疗心肌梗死的随机对照试验。通过提取数据进行Meta分析探讨骨髓单个核细胞移植对心肌梗死后心功能的影响。结果对纳入的12个随机对照试验进行Meta分析，随访至少3个月后各项指标与基础值比较，植入BMMSC后左室射血分数（LVEF）明显增加（WMD=3.65%，95%CI：3.35%～3.95%，P＜0.00001），但存在明显异质性（I2=86%，P＜0.00001）；进行亚组分析：基础LVEF＜40%亚组BMMSC治疗组LVEF水平较对照组增加，差异有统计学意义（WMD=4.06%，95%CI：3.74%～4.37%，P＜0.00001）；基础LVEF＞40%亚组BMMSC治疗组LVEF水平与对照组相比，差异无统计学意义（WMD=-0.89%，95%CI：-1.94%～0.15%，P＞0.05）。BMMSC治疗组较对照组左室收缩期末容积较前下降，且有统计学差异（WMD=-6.28%，95%CI：-8.39%～-4.16%，P＜0.00001）。BMMSC治疗组左室舒张期末容积与对照组相比，无统计学差异且存在明显异质性（P=0.0005，I^2=70%）；进行亚组分析：基础LVEF＜40%亚组仍无法消除异质性（P＜0.00001，I^2=89%），排除左室舒张期末容积较其他研究明显增大的研究后，异质性消除且差异具有统计学意义（WMD=-4.29%，95%CI：-8.14%～-0.45%，P＜0.05）；基础LVEF＞40%亚组BMMSC治疗组与对照组相比差异无统计学意义（WMD=-1.41%，95%CI：-6.04%～3.22%，P＞0.05）。结论自体骨髓单个核细胞移植能够提高心肌梗死后左室收缩功能，抑制心室重塑，对基础LVEF＜40%患者效果明显。

简介：摘要目的探究骨髓单个核细胞（BM-MNCs）联合颅内外血管搭桥治疗缺血性脑卒中的临床疗效。方法选取2017年2月至2019年1月本院缺血性脑卒中患者94例，根据治疗方案不同分组，各47例。对照组给予颅内外血管搭桥+血清注射治疗，观察组给予骨髓单个核细胞联合颅内外血管搭桥治疗。对比两组并发症（切口感染、硬膜下血肿、脑梗死再发生、癫痫）及治疗前、治疗3个月末美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）、血流动力学水平（收缩期血流流速、舒张期血流流速、血流阻力）、血小板膜糖蛋白GMP-140与PAC-1表达。结果治疗3个月末，两组患者NIHSS评分均低于治疗前，且观察组（11.08±3.12）分，低于对照组（15.25±3.85）分，差异均有统计学意义（均P<0.05）；治疗3个月末，两组患者收缩期血流流速、舒张期血流流速高于治疗前，血流阻力低于治疗前，差异均有统计学意义（均P<0.05）；治疗前、治疗3个月末，两组患者收缩期血流流速、血流阻力、舒张期血流流速比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）；治疗3个月末，两组患者血小板膜糖蛋白GMP-140、PAC-1表达均低于治疗前，且观察组（5.49±1.86）%、（6.35±2.04）%，均低于对照组（7.85±2.31）%、（8.51±2.56）%，差异均有统计学意义（均P<0.05）；观察组并发症发生率2.13%，低于对照组17.02%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论骨髓单个核细胞联合颅内外血管搭桥治疗缺血性脑卒中患者，可改善血流动力学水平及神经功能，降低血小板膜糖蛋白GMP-140与PAC-1表达，且安全性高。

简介：摘要目的探讨进行外周单个核细胞采集的患者采集过程中出现乳糜血后所采用的方法及体会。方法收集我科从2012年4月至2015年4月之间的800例进行外周单个核细胞采集的患者中20例患者在采集过程中出现乳糜血后对其进行的处理，经过相应处理20例患者所采集的成品细胞质量未受影响。结论在采集外周单个核细胞出现乳糜血后，给予相应处理，效果良好，值得在临床中推广应用。

简介：摘要目的观察骨髓单个核细胞(BMMCs)移植对大鼠局灶性脑缺血后右侧额叶缺血灶周围区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及Nogo-A表达的影响，并探讨其促进神经功能恢复的可能机制。方法从SD大鼠骨髓中分离BMMCs，采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，于缺血再灌注24 h后根据Longa评分选择入组模型，采用随机数字表法将48只MCAO大鼠分为模型组及观察组，每组再细分为7 d、14 d及21 d共3个亚组。将BMMCs缓慢注入观察组缺血侧纹状体内，模型组则注入等体积磷酸盐缓冲液(PBS)。各组大鼠分别于干预后7 d、14 d及21 d时再次进行Longa评分，随后麻醉处死取脑，采用免疫组织化学染色观察各亚组大鼠右侧额叶缺血灶周围脑区GFAP及Nogo-A表达。结果缺血再灌注21 d时，发现观察组大鼠肢体神经功能缺损评分低于模型组(P<0.05)；观察组大鼠在再灌注14 d及21 d时其GFAP表达数量均较模型组增多[(37.62±2.45) vs (27.62±1.69)，(38.00±1.85) vs (27.25±1.83)，P<0.05]，而Nogo-A表达数量均较模型组降低[(28.88±2.64)vs(32.50±1.60)，(23.87±2.36)vs(32.00±1.85)，P<0.05]；观察组大鼠在再灌注21 d时其Nogo-A表达量明显低于再灌注14 d时水平[(23.87±2.36) vs (28.88±2.64)，P<0.05]。结论BMMCs移植能促进局灶性脑缺血大鼠受损神经功能改善，其作用机制可能与促进缺血灶周围脑组织GFAP表达及抑制Nogo-A表达有关。

简介：

简介：目的探讨3种抗凝剂保存的外周血对培养γδT细胞的增殖和杀伤功能的影响研究。方法选择获得知情同意的6例健康志愿者，其中男性3例，女性3例；年龄25-45岁。常规无菌抽取新鲜外周血15mL。将其外周血标本分别置于肝素钠、细胞保存液（枸橼酸钠）和乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝剂中（即肝素钠组、细胞保存液组、EDTA组），并立即处理培养细胞，用CCK-8法检测3组细胞的增殖情况。在第10天，行流式细胞术检测3组γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达。结果在外周血细胞培养过程中．EDTA组细胞增殖不明显;肝素钠组和细胞保存液组细胞增殖明显，在第14天细胞增殖倍数最大分别为137．00％±1．44％和99．00％±1．45％，且肝素钠组优于细胞保存液组（t=2．72，P〈0．01）。流式细胞仪检测发现肝素钠组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达都明显高于细胞保存液组（t=3．871，P=0.003；t=2．744，P：0．021；t=2．261，P=0．047）。结论肝素钠和细胞保存液均可用于γδT细胞培养的血液抗凝，但肝素钠保护γδT细胞的杀伤功能明显优于细胞保存液。

简介：目的：回顾性分析结合和未结合骨髓单个核细胞（bonemarrowmononuclearcells，BMMCs）移植的打压植骨治疗骨循环研究协会（associationresearchcirculationosseous，ARCO）分期IIB期、IIC期股骨头坏死的疗效。方法34例（53髋）非创伤性股骨头坏死（osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH）手术患者获得随访。男27例，女7例。手术时年龄28～42岁，平均38.1岁。手术方法：微创扩大髓芯减压坏死灶清除、人工骨打压植入。BMMCs移植组加入5ml浓集后的BMMCs，单纯植骨组未加入BMMCs。采用Harris评分系统评估术后患髋功能改善情况，应用视觉模拟标尺法（visualanaloguescale，VAS）进行临床疼痛测定，影像学按股骨头是否塌陷及病灶修复情况评定。结果两组患者整体术后终末随访Harris评分较术前显著提高（64.1±4.6）分vs（78.8±4.8）分，（P＝0.0000）。与单纯植骨组相比，BMMCs移植组术后终末随访Harris评分较术前提高幅度更明显（28.6±0.5）%vs（18.4±1.7）%，（P＜0.0001）。两组患者整体术后终末随访VAS评分较术前显著降低（6.3±0.9）分vs2.6±0.7）分，（P＝0.0000）。与单纯植骨组相比，BMMCs移植组术后终末随访VAS评分较术前降低幅度更明显（-66.3±1.4）%vs（-51.7±2.9）%，（P＜0.0001）。BMMCs移植组临床成功率（21/26）高于单纯植骨组（10/27），差异有统计学意义（P＝0.001）。BMMCs移植组放射学成功率（23/26）高于单纯植骨组（11/27），差异有统计学意义（P＝0.001）。结论微创扩大髓芯减压坏死灶清除、人工骨打压植入术在选择合适的中早期非创伤性ONFH（ARCO分期IIB期、IIC期）可获得优良的中期疗效。结合浓集BMMCs移植可提高保留关节手术疗效和骨修复质量。

简介：无

简介：摘要目的分析环状RNA（circRNA）在痛风患者PBMCs中的表达谱，探讨circRNA在痛风发生发展中可能的作用机制。方法收集24例急性期痛风患者（AG）、24例间歇期痛风患者（IG）以及24名健康体检者（HC）外周血标本。随机选取3例AG、3例IG、3名HC，采用基因芯片技术筛选其PBMCs中差异表达的circRNA。选择两两对比组间差异倍数较大的6个circRNA，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）在所有72例研究对象PBMCs中验证了它们的相对表达量。对显著差异表达的circRNA（变化倍数>1.5，P<0.05）进行了基因本体（GO）分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析以及预测了其与微RNA（miRNA）的相互作用。采用中位数（四分位数间距）描述数据，组间比较采用Mann-Whitney U检验。结果（1）芯片数据显示，与HC组相比，AG和IG组分别有116个和41个显著差异表达的circRNA；与IG组相比，AG组有105个显著差异表达的circRNA。（2） RT-qPCR验证的6个circRNA中，5个基因表达趋势与芯片结果一致，其中hsa_circRNA_105034在AG组中表达量相对于IG及HC组差异具有统计学意义[AG组5.17（4.60），IG组1.68（2.39），HC组0.90（0.73），AG组与IG组（Z=-4.413，P<0.01）；AG组与HC组（Z=-5.052，P<0.01）]。（3）生物信息学分析：① GO分析发现差异circRNA主要参与DNA的转录调控、细胞的正性调控及蛋白质修饰等；② KEGG通路分析发现它们可能参与了丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路介导的免疫反应；③ circRNA与miRNA的结合位点预测提示痛风中差异表达的circRNA可能通过靶向miRNA-146a、miRNA-302b和miRNA-23a等分子影响其炎症反应。结论痛风患者PBMCs中存在差异表达的circRNA，可能与痛风的发生发展密切相关。

简介：目的建立细胞因子的基因检测方法,观察其在临床上的初步应用情况.方法利用RT-PCR技术检测部分免疫相关性疾病和肿瘤病人外周血或组织中14种细胞因子的表达情况.结果20例支气管哮喘病人外周血单个核细胞和23例肿瘤病人癌组织主要表达Th2类细胞因子(IL-4、6、10、13),15例肾病综合征病人主要表达炎性细胞因子(IL-1β、IL-6),16例自身免疫性甲状腺疾病病人主要表达IL-2、IL-4、IL-6,而5例正常人外周血单个核细胞中未检出细胞因子.结论RT-PCR法检测细胞因子可用来反映多种疾病的病理变化.

简介：目的:建立白细胞及骨髓有核细胞减少的小鼠模型.方法:用直线加速器不同剂量照射小鼠.结果:小鼠白细胞及骨髓有核细胞明显减少.结论:此方法可建立比较理想的白细胞、骨髓有核细胞减少模型.

简介：肿瘤病人在手术、放疗及化疗后，免疫功能低下，肿瘤细胞负荷低，此时运用细胞过继性免疫治疗在临床上已取得了确切的疗效。但是肿瘤患者在应用细胞过继性免疫治疗进行单个核细胞采集（简称单采）时，常常因为化疗后血管细，血管弹性差，导致静脉穿刺失败；或因凝血机制异常等原因，导致血液流速缓慢，机器出现低血流报警，而导致单采不能正常进行。为解决这一问题，我科运用一次性血液透析导管行股静脉穿刺置管进行单采，使整个单采过程能够顺利进行，细胞分离满意，现将护理体会报道如下。

简介：摘要目的探讨骨髓单个核细胞移植对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠微小RNA（miRNA）-21和miRNA-155表达影响。方法健康清洁级6~8周龄KM小鼠数字随机分为移植组、模型组和正常对照组，每组15只。移植组和模型组用葡聚糖硫酸钠（DSS）方法造模24 h，移植组小鼠经尾静脉注入0.4 ml 4′,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记的P3-BM-MNCs细胞悬液（3.2×106个/ml）；模型组及正常对照组大鼠注入0.4 ml磷酸盐缓冲液（PBS）。采用UC疾病活动指数（DAI）对小鼠的一般情况进行评分；采用HE染色观察小鼠结肠组织病理变化；采用实时定量PCR检测miRNA-21和miRNA-155信使RNA（mRNA）表达。结果正常对照组、模型组和移植组的DAI评分分别为0(0,1)、3.1(2.8,3.3）和2.7(2.4,3.1)，与正常对照组比较，模型组和移植组小鼠DAI评分较高（P<0.05）；与模型组比较，移植组小鼠DAI评分较低（P<0.05）。正常对照组、模型组和移植组的组织损伤大体评分为0（0，1）、3（3，4）和1（1，2），组织损伤病理评分分别为0（0，1）、16（12，16）和6（6，8），与正常对照组比较，模型组和移植组小鼠组织损伤评分较高（P<0.05）；与模型组比较，移植组小鼠组织损伤评分较低（P<0.05）。正常对照组、模型组和移植组的miRNA-21 mRNA表达水平分别为0.87±0.15、2.38±0.29和1.59±0.32，miRNA-155 mRNA表达水平分别为1.87±0.46、7.38±1.97和3.92±0.84，与正常对照组比较，模型组和移植组小鼠miRNA-21和miRNA-155 mRNA表达较高（P<0.01）；与模型组比较，移植组小鼠miRNA-21和miRNA-155 mRNA表达较低（P<0.05）。结论骨髓单个核细胞移植可改善UC模型小鼠组织病理学评分和DAI评分，其机制可能与下调miRNA-21和miRNA-155 mRNA表达相关。

简介：1病历摘要

简介：有研究证实,白细胞介素12（IL-12）可以增强自然杀伤细胞的细胞毒性,还可以促进细胞毒T细胞对原代白血病细胞及白血病细胞株的细胞毒反应.此外,Wilms癌基因WT1mRNA作为微小残留病变的标志已被广泛用于监测急性白血病（AL）和骨髓增生异常综合征（MDS）的疗效.为了研究IL-12能否降低AL和MDS患者外周血单个核细胞WT1基因的表达,分别收集了30例恶性血液病患者和5例健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMNC）进行体外培养,在培养体系中加入IL-12.培养前和培养后第3天,用竞争性RT-PCR方法分别测定各标本中WT1mRNA的表达量.结果显示,在6例慢性粒细胞性白血病患者,WT1mRNA由104.8降至104.2拷贝/微克总RNA;在12例MDS患者,WT1mRNA由105.4降至104.8拷贝/微克总RNA;在5例完全缓解期AL患者,WT1mRNA由105.0降至104.2拷贝/微克总RNA;但在7例未缓解的AL患者,WT1mRNA的表达无变化.结论：IL-12可以显著降低大部分恶性血液病患者WT1mRNA的表达水平,IL-12有望用于去除恶性血液病患者体内的微小残留病变.

简介：为明确阴囊内异种移植脐血单个核细胞对老年小鼠机能的影响,通过观察移植细胞的存活、作用,明确阴囊内移植的脐血单个核细胞不仅可以在小鼠体内存活,且无明显的副作用,还可以显著提高雄性老年小鼠的30min内交配次数（P=0.018）,但其不能提高老年小鼠的存活时间以及心脏每搏量（皆P〉0.05）.