简介:紫云英属于异花授粉植物,品种内个体基因型杂合,品种鉴定难度大。本研究以紫云英闽紫系列3个审定品种为材料,采用SSR标记进行取样策略对3个品种鉴别能力影响的研究。结果表明:(1)固定4对引物组合,从5~50进行梯度取样时,品种内的扩增位点总数、观测等位基因数趋于增多,但有效等位基因数、Shanon信息指数、遗传多样性指数增大到最大值后趋于下降,其中取样量为30时总体样品出现最大值;随着样品量的增加,品种间Nei氏遗传距离以及分子方差分析的品种间期望变异系数比例值(PhiPT)均呈减少趋势,但PhiPT值的置信度在增大;(2)固定品种的样品容量为30和50,再加入2对能扩增出在品种间形成频率差异的标记位点的SSR引物对,基于这6对SSR引物可以将参试的3个紫云英品种有效的区分,品种间期望变异系数比例值(PhiPT)提高且差异的置信度为极显著。主成分分析进一步表明:3个参试品种30个样品与50个样品的散布状况基本一致。对紫云英取样策略的研究表明:为提高对参试品种的鉴别能力,样品取样量以30株为宜,即达到较佳鉴别效果又降低分析成本。
简介:摘要目的探讨紫云英苷对人结肠癌SW480细胞的诱导凋亡作用及其相关的分子机制。方法利用CCK-8实验检测紫云英苷对SW480细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞术检测紫云英苷对SW480细胞的诱导凋亡作用和线粒体膜电位变化情况,利用Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白和信号通路相关蛋白的表达。结果CCK-8实验结果表明紫云英苷能够有效抑制SW480细胞的增殖,其效果优于5-FU,且对正常细胞的毒副作用低于5-FU;流式细胞术结果显示紫云英苷能够通过降低线粒体膜电位水平,有效诱导SW480细胞凋亡;Western blotting实验结果表示,紫云英苷能够上调p-p38的水平并降低p-STAT3的水平。结论紫云英苷能够有效抑制SW480细胞发生的增殖情况,通过抑制线粒体的膜电位水平,有效激活线粒体具有的依赖性质,促使该细胞逐渐发生凋亡情况,其调节机制是通过激活p38信号通路并抑制STAT3通路来实现的。
简介:摘要目的探讨紫云英苷上调miRNA-513(miR-513)对前列腺癌细胞株C4-2B细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法选取前列腺癌细胞株C4-2B,采用125 μg/L紫云英苷作用48 h者为紫云英苷组,未处理者为对照组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测两组C4-2B细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期。采用miRNAMap预测软件预测miR-513的靶基因为叉头框蛋白R2(FOXR2),并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组细胞miR-513和FOXR2 mRNA的相对表达水平,蛋白质印迹法检测两组细胞中FOXR2、细胞周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)、β-actin和细胞周期蛋白H(cyclin H)的表达。结果与对照组比较,培养第2、3、4、5天紫云英苷组C4-2B细胞增殖活力均降低(均P<0.05)。对照组和紫云英苷组S期细胞比例分别为(48.1±3.2)%和(36.0±2.1)%,紫云英苷组S期细胞比例降低(t=3.12,P=0.021);G2期细胞比例分别为(24.9±3.3)%和(11.8±2.4)%,紫云英苷组G2期细胞比例降低(t=3.18,P=0.019)。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平分别为1.01±0.22和6.55±0.61,紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平升高(t=7.70,P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验验证FOXR2为miR-513的靶基因。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中FOXR2 mRNA相对表达水平分别为1.04±0.14和0.19±0.06,差异有统计学意义(t=5.53,P=0.002),提示紫云英苷促进miR-513表达后,FOXR2 mRNA表达降低。紫云英苷组C4-2B细胞FOXR2、CDK7和cyclin H蛋白相对表达水平较对照组均降低。结论紫云英苷可能通过上调miR-513的表达,抑制前列腺癌C4-2B细胞增殖,诱导细胞周期停滞。