简介：

简介：摘要目的研究依诺肝素对骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化过程及其分泌外泌体的影响。方法提取4周龄雄性SD大鼠的BMSCs，对其表面抗原和多系分化潜能进行鉴定，诱导其向成骨方向分化。10 IU/mL依诺肝素处理BMSCs 14 d后，采用试剂盒法提取BMSCs分泌的外泌体，运用透射电镜观察外泌体形态，检测外泌体CD63表达，茜素红染色分析BMSCs的成骨化，分别检测BMSCs及外泌体中成骨相关蛋白骨钙素及骨形态发生蛋白-2（BMP-2）的表达水平。结果分离培养的BMSCs呈长梭形，形态均匀一致，高表达CD29和CD44，低表达CD34和CD45，符合间充质干细胞特征；提取外泌体成椭圆形，直径30~80 nm，表达CD63。茜素红染色提示依诺肝素处理组矿化结节数较空白对照组低。依诺肝素处理组BMSCs骨钙素[（48.81±8.23）ng/mL]和BMP-2[(311.45±27.59) pg/mL]含量低于空白对照组[（80.43±10.74）ng/mL和(399.23±32.25) pg/mL]，差异均有统计学意义（P<0.05）。而相同BMSCs细胞数量来源的依诺肝素干预下的外泌体中骨钙素[（1.45±0.15）ng/mL]和BMP-2[(18.47±0.54) pg/mL]含量高于空白对照组[(1.00±0.12) ng/mL]和（9.07±0.36）pg/mL]，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论依诺肝素处理可以抑制BMSCs成骨化过程，其机制可能与依诺肝素直接抑制BMSCs成骨相关蛋白骨钙素及BMP-2的表达以及间接通过诱导BMSCs中的骨钙素及BMP-2以外泌体形式排出从而进一步减少BMSCs成骨相关蛋白水平有关。