简介：摘要乳腺原发性粒细胞肉瘤（granulocytic sarcoma，GS）罕见，组织学形态和免疫表型类似粒细胞白血病，影像学缺乏特异性，类似于乳腺癌或乳腺脓肿。对其认识的重要性在于不能误诊为浸润性癌，特别是在冰冻诊断时误诊而导致过度手术。本研究收集3例乳腺粒细胞肉瘤病例，标本均充分取材，完善临床及预后资料，观察临床病理学特点，SP法免疫组织化学检测。探讨乳腺粒细胞肉瘤临床病理学特征，免疫组织化学特点，诊断及预后，以提高对本病的认识。

简介：摘要采用CCK8检测胰腺癌PANC1细胞的存活率，划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法检测与细胞增殖、凋亡及上皮间质转化相关的蛋白表达等方法探讨黄芪甲苷对胰腺癌PANC1细胞恶性生物学行为的影响。结果显示，黄芪甲苷干预PANC1细胞后可抑制细胞的存活率，显著减少迁移和穿膜的细胞数量，影响相关蛋白的表达，提示黄芪甲苷抑制胰腺癌PANC1细胞生长的机制可能与其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制上皮间质转化过程有关。

简介：摘要目的探讨原苏木素A调控结直肠癌细胞生物学行为及机制。方法结直肠癌SW480细胞分别用不同浓度(0、80、160、320、640和1 280 μmol/L)原苏木素A处理筛选有效抑制浓度。SW480细胞根据转染载体分成原苏木素A+Anti-miR-NC组(转染inhibitor control后1 280 μmol/L的原苏木素A处理)、原苏木素A+Anti-miR-431组(转染miR-431 inhibitor后1 280 μmol/L的原苏木素A处理)，细胞计数试剂-8法检测细胞增殖，克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，流式细胞术检测细胞凋亡差异，免疫印迹法检测细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测微小核糖核酸-431(miR-431)表达。两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果320、640和1 280 μmol/L原苏木素A处理后SW480细胞吸光度(A)值显著低于0、80、160 μmol/L(0.50±0.04、0.37±0.03、0.28±0.02、0.65±0.06、0.63±0.04和0.62±0.05，F＝120.991，P<0.01)。320、640和1 280 μmol/L原苏木素A处理后SW480细胞A值显著降低。320、640、1 280 μmol/L原苏木素A处理后的SW480细胞克隆形成数目(65.01±5.17、49.18±4.69、33.05±4.56比78.62±4.11，F＝161.813，P<0.01)及bcl-2蛋白表达(0.41±0.04、0.29±0.02、0.20±0.03比0.59±0.05，F＝189.500，P<0.01)显著低于0 μmol/L原苏木素A处理组，细胞凋亡率[(8.62±0.52)%、(14.78±1.25)%、(21.08±1.73)%比(4.15±0.16)%，F＝403.486，P<0.01]和bax蛋白表达(0.28±0.03、0.37±0.02、0.48±0.05比0.18±0.03，F＝125.298，P<0.01)显著高于0 μmol/L原苏木素A处理组。320、640、1 280 μmol/L原苏木素A处理后的SW480细胞迁移数目(172.42±14.97、130.89±12.08、105.50±10.82比224.56±31.58，F＝65.715，P<0.01)、侵袭数目(150.43±12.94、114.98±11.33、82.02±9.98比182.34±15.76，F＝105.513，P<0.01)和Vimentin蛋白表达(0.42±0.04、0.30±0.03、0.21±0.03比0.65±0.05，F＝221.479，P<0.01)显著低于0 μmol/L原苏木素A处理组。320、640、1280 μmol/L原苏木素A处理后的SW480细胞miR-431水平高于0 μmol/L原苏木素A处理组(1.56±0.10、1.92±0.12、2.45±0.18、1.00±0.12，F＝188.136，P<0.01)。原苏木素A+Anti-miR-431组SW480细胞A值(0.45±0.04比0.29±0.03)、克隆形成数目(47.04±4.11比34.25±2.78)、bcl-2蛋白表达(0.45±0.05比0.19±0.02)、细胞迁移(165.24±13.06比104.23±9.84)、侵袭数目(147.20±13.94比81.96±8.54)和Vimentin表达(0.38±0.03比0.20±0.02)高于原苏木素A+Anti-miR-NC组，细胞凋亡率[(12.05±1.23)%比(21.84±1.66)%]、细胞中E-cadherin(0.32±0.04比0.56±0.05)和bax蛋白表达(0.24±0.05比0.46±0.04)低于原苏木素A+Anti-miR-NC组，差异有统计学意义(t＝9.600、7.733、14.216、14.484、10.307、11.193、11.972、11.245、14.977，P<0.01)。结论原苏木素A可能通过上调miR-431调控SW480细胞生物学行为。

简介：摘要目的探讨增强CT定量参数与结肠癌恶性生物学行为及预后的相关性。方法选取2017年2月至2019年10月安徽皖北煤电集团总医院100例结肠癌患者作为研究对象，均行增强CT检查，并检测患者血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9（CA19-9）水平，根据结肠癌患者血清CEA、CA19-9水平的平均数分组，CEA<28.36 pmol/L为低水平，≥ 28.36 pmol/L为高水平；血清CA19-9<40.26 pmol/L为低水平，≥ 40.26 pmol/L为高水平。比较不同血清CEA、CA19-9水平、不同病理指标结肠癌患者的增强CT定量参数，分析血清肿瘤标志物水平、结肠癌恶性生物学行为与增强CT定量参数的相关性。随访12个月，统计不同预后患者临床资料、增强CT参数，分析结肠癌患者预后影响因素及增强CT定量参数对患者预后的预测价值。结果血清CEA、CA19-9低水平结肠癌患者CT平扫值、增强值及强化程度均低于高水平患者[（30.16 ± 5.14）HU比（38.51 ± 5.72）HU、（55.74 ± 8.12）HU比（78.62±8.97）HU、（25.58 ± 3.60）HU比（40.11 ± 3.14）HU]，差异有统计学意义（P<0.05）。结肠癌患者血清CEA、CA19-9水平与CT平扫值、增强值、强化程度存在正相关关系（P<0.05）；结肠癌患者CT增强值、强化程度与结肠癌患者Dukes分期、分化程度及有无淋巴结转移、淋巴管浸润有关，CT平扫值与结肠癌患者Dukes分期、有无淋巴结转移及淋巴管浸润有关（P<0.05）。结肠癌患者死亡危险因素包括年龄、Dukes分期、分化程度、淋巴结转移、淋巴管浸润、CT平扫值、增强值、强化程度（P<0.05）；CT平扫值、增强值、强化程度联合预测结肠癌患者预后的曲线下面积为0.873，大于各参数单一预测，联合预测的灵敏度、特异度分别为76.92%、88.37%。结论增强CT定量参数与结肠癌患者恶性生物学行为存在一定相关性，其检测值升高是患者预后的危险因素。

简介：摘要目的探讨增强CT定量参数与结肠癌恶性生物学行为及预后的相关性。方法选取2017年2月至2019年10月安徽皖北煤电集团总医院100例结肠癌患者作为研究对象，均行增强CT检查，并检测患者血清肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9（CA19-9）水平，根据结肠癌患者血清CEA、CA19-9水平的平均数分组，CEA<28.36 pmol/L为低水平，≥ 28.36 pmol/L为高水平；血清CA19-9<40.26 pmol/L为低水平，≥ 40.26 pmol/L为高水平。比较不同血清CEA、CA19-9水平、不同病理指标结肠癌患者的增强CT定量参数，分析血清肿瘤标志物水平、结肠癌恶性生物学行为与增强CT定量参数的相关性。随访12个月，统计不同预后患者临床资料、增强CT参数，分析结肠癌患者预后影响因素及增强CT定量参数对患者预后的预测价值。结果血清CEA、CA19-9低水平结肠癌患者CT平扫值、增强值及强化程度均低于高水平患者[（30.16 ± 5.14）HU比（38.51 ± 5.72）HU、（55.74 ± 8.12）HU比（78.62±8.97）HU、（25.58 ± 3.60）HU比（40.11 ± 3.14）HU]，差异有统计学意义（P<0.05）。结肠癌患者血清CEA、CA19-9水平与CT平扫值、增强值、强化程度存在正相关关系（P<0.05）；结肠癌患者CT增强值、强化程度与结肠癌患者Dukes分期、分化程度及有无淋巴结转移、淋巴管浸润有关，CT平扫值与结肠癌患者Dukes分期、有无淋巴结转移及淋巴管浸润有关（P<0.05）。结肠癌患者死亡危险因素包括年龄、Dukes分期、分化程度、淋巴结转移、淋巴管浸润、CT平扫值、增强值、强化程度（P<0.05）；CT平扫值、增强值、强化程度联合预测结肠癌患者预后的曲线下面积为0.873，大于各参数单一预测，联合预测的灵敏度、特异度分别为76.92%、88.37%。结论增强CT定量参数与结肠癌患者恶性生物学行为存在一定相关性，其检测值升高是患者预后的危险因素。

简介：摘要目的探究微小RNA-92a(miR-92a)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及对其细胞生物学行为的影响。方法实验性研究。收集宝鸡市中心医院2018年1月至2020年10月收治的39例NSCLC患者癌组织和癌旁正常组织，采用RT-PCR检测组织中miR-92a表达水平，并分析其与临床病理的关系。另选用肺癌细胞株A549，将miR-92a mimics、miR-92a inhibitor及对应阴性对照质粒转染A549细胞，转染48 h后采用MTT法检测细胞增殖水平，采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果NSCLC组织中miR-92a相对表达量(2.58±0.47)高于正常组织(1.04±0.39)，差异有统计学意义(P<0.05)；TNM分期T3+T4期、中低分化、淋巴结转移的NSCLC患者癌组织中miR-92a mRNA相对表达量分别(2.68±0.35)、(2.84±0.26)、(3.25±0.68)高于T1+T2期、高分化、淋巴结未转移者(2.19±0.30)、(2.13±0.38)、(2.17±0.54)，差异有统计学意义(P<0.05)；体外实验结果显示，miR-92a mimics组细胞中miR-92a mRNA相对表达量、增殖水平、迁移能力高于mimics-NC组，miR-92a inhibitor组细胞miR-92a mRNA相对表达量、增殖水平、迁移能力低于inhibitor-NC组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-92a在NSCLC组织中表达上调，且与患者临床病理有关，下调miR-92a表达可抑制NSCLC细胞的增殖、转移能力。

简介：摘要目的探讨鼻咽癌干细胞的生物学行为和Ras信号通路特征，以及CD44与Ras信号通路活化之间的调控关系。方法采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的干细胞CNE2-SC和5-8F-SC。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖，细胞平板克隆形成实验观察细胞克隆形成情况，Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力，细胞黏附实验观察细胞贴壁情况，Western blot法检测细胞中Ras信号通路相关蛋白的表达水平，采用RNA干扰技术明确CD44对Ras信号通路的调控作用。结果接种后24、48和72 h，鼻咽癌干细胞CNE2-SC和5-8F-SC的增殖能力分别低于其来源鼻咽癌细胞(均P<0.05)。细胞种植14 d后，CNE2-SC细胞的克隆形成率为(44.5±1.9)%，高于其来源细胞CNE2[(34.9±1.5)%，P<0.01]；5-8F-SC细胞的克隆形成率为(47.4±1.8)%，亦高于其来源细胞5-8F[(37.2±1.7)%，P<0.01]。CNE2-SC细胞的迁移细胞数为(87.6±7.8)个/视野，是CNE2细胞的3.97倍(P<0.01)。5-8F-SC细胞的迁移细胞数为(67.2±5.7)个/视野，是5-8F细胞的3.07倍(P<0.01)。接种后3 h，CNE2-SC和CNE2细胞的黏附贴壁率分别为(42.1±7.6)%和(8.9±2.0)%；接种后6 h，分别为(82.4±5.0)%和(12.1±2.2)%。CNE2-SC细胞的黏附贴壁率均高于CNE2细胞(均P<0.01)。接种后3 h，5-8F-SC和5-8F细胞的黏附贴壁率分别为(53.6±6.1)%和(7.3±1.5)%；接种后6 h，分别为(90.7±3.6)%和(11.0±1.2)%。5-8F-SC细胞的黏附贴壁率均高于5-8F细胞(均P<0.01)。与普通鼻咽癌细胞相比，鼻咽癌干细胞中CD44、Ras和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平升高(均P<0.01)，E-钙黏蛋白(E-cadherin)、10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达水平降低(均P<0.01)，磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平升高(均P<0.01)。相关分析显示，CNE2细胞与CNE2-SC细胞中，5-8F细胞与5-8F-SC细胞中，CD44与Ras蛋白表达水平均呈高度正相关(r＝0.985，P＝0.002；r＝0.962，P＝0.038)。沉默CNE2-SC细胞中CD44的表达后，人表皮生长因子受体2(HER-2)和Ras的蛋白表达水平显著降低，p-ERK1/2、p-Akt和p-PKCδ磷酸化水平下降(均P<0.01)。结论相对于来源鼻咽癌细胞，鼻咽癌干细胞增殖能力降低，但其克隆形成能力、迁移能力、黏附能力增强，可能与其CD44调控的Ras信号通路异常激活有关。

简介：摘要目的探讨鼻咽癌干细胞的生物学行为和Ras信号通路特征，以及CD44与Ras信号通路活化之间的调控关系。方法采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的干细胞CNE2-SC和5-8F-SC。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖，细胞平板克隆形成实验观察细胞克隆形成情况，Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力，细胞黏附实验观察细胞贴壁情况，Western blot法检测细胞中Ras信号通路相关蛋白的表达水平，采用RNA干扰技术明确CD44对Ras信号通路的调控作用。结果接种后24、48和72 h，鼻咽癌干细胞CNE2-SC和5-8F-SC的增殖能力分别低于其来源鼻咽癌细胞(均P<0.05)。细胞种植14 d后，CNE2-SC细胞的克隆形成率为(44.5±1.9)%，高于其来源细胞CNE2[(34.9±1.5)%，P<0.01]；5-8F-SC细胞的克隆形成率为(47.4±1.8)%，亦高于其来源细胞5-8F[(37.2±1.7)%，P<0.01]。CNE2-SC细胞的迁移细胞数为(87.6±7.8)个/视野，是CNE2细胞的3.97倍(P<0.01)。5-8F-SC细胞的迁移细胞数为(67.2±5.7)个/视野，是5-8F细胞的3.07倍(P<0.01)。接种后3 h，CNE2-SC和CNE2细胞的黏附贴壁率分别为(42.1±7.6)%和(8.9±2.0)%；接种后6 h，分别为(82.4±5.0)%和(12.1±2.2)%。CNE2-SC细胞的黏附贴壁率均高于CNE2细胞(均P<0.01)。接种后3 h，5-8F-SC和5-8F细胞的黏附贴壁率分别为(53.6±6.1)%和(7.3±1.5)%；接种后6 h，分别为(90.7±3.6)%和(11.0±1.2)%。5-8F-SC细胞的黏附贴壁率均高于5-8F细胞(均P<0.01)。与普通鼻咽癌细胞相比，鼻咽癌干细胞中CD44、Ras和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平升高(均P<0.01)，E-钙黏蛋白(E-cadherin)、10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达水平降低(均P<0.01)，磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平升高(均P<0.01)。相关分析显示，CNE2细胞与CNE2-SC细胞中，5-8F细胞与5-8F-SC细胞中，CD44与Ras蛋白表达水平均呈高度正相关(r＝0.985，P＝0.002；r＝0.962，P＝0.038)。沉默CNE2-SC细胞中CD44的表达后，人表皮生长因子受体2(HER-2)和Ras的蛋白表达水平显著降低，p-ERK1/2、p-Akt和p-PKCδ磷酸化水平下降(均P<0.01)。结论相对于来源鼻咽癌细胞，鼻咽癌干细胞增殖能力降低，但其克隆形成能力、迁移能力、黏附能力增强，可能与其CD44调控的Ras信号通路异常激活有关。

简介：摘要目的探讨环状RNA（circular RNA，circRNA）BICD2（circ-BICD2）对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）谷氨酰胺代谢、细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响和可能机制。方法纳入2016年1月至2018年1月就诊于郑州大学第一附属医院口腔科，手术切除的35例OSCC患者的肿瘤组织及其癌旁正常组织样本。通过实时定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测OSCC组织与癌旁组织、OSCC细胞（CAL27、SCC9、SCC15）与正常上皮细胞HIOEC细胞中circ-BICD2、miR-296-5p和转录球蛋白2（transgelin2，TAGLN2）的表达水平。生物信息学方法、双荧光素酶报告实验、RNA结合免疫沉淀反应（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）实验检测circ-BICD2与miR-296-5p、miR-296-5p与TAGLN2的靶向关系。在CAL27和SCC9细胞中分别转染circ-BICD2小干扰RNAsi-circ-BICD2#1（敲低1组）、si-circ-BICD2#2（敲低2组）及阴性对照si-NC（siRNA空白组）；在敲低1组细胞中分别转染miR-296-5p抑制物anti-miR-296-5p（抑制物组）及其阴性对照anti-miR-NC（抑制物对照组）。在CAL27和SCC9细胞中转染miR-296-5p模拟物（miR过表达组）及其阴性对照miR-NC（miR空白组）。在miR过表达组细胞中转染TAGLN2（共转染组）及空白质粒pcDNA（共转染对照组）。运用细胞计数试剂盒（cell counting kit 8，CCK-8）、集落形成实验、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell实验等检测OSCC生物学行为。同时检测谷氨酰胺（glutamine，gln）消耗量、α-酮戊二酸（α-ketoglutarate，α-KG）产生量和ATP浓度观察其对细胞代谢的影响。蛋白质印迹法检测各组CAL27和SCC9细胞中的细胞周期素D1（cyclinD1）和谷氨酰胺水解酶（glutamine hydrolase，GLS1）蛋白表达量。取4周龄清洁级BALB/c雌性裸鼠12只，于腋下皮肤分别注射转染sh-circ-BICD2（敲低组）和sh-NC（对照组）后的SCC9细胞单细胞悬液，建立移植瘤模型，每组6只。注射32 d时断颈处死裸鼠并切除肿瘤，检测肿瘤质量及两组的circ-BICD2、miR-296-5p及TAGLN2的表达水平。结果OSCC组织中circ-BICD2、TAGLN2表达量（分别为2.54±0.71和1.86±0.15）显著高于正常组织（分别为1.00±0.35和1.00±0.11），miR-296-5p表达量（0.56±0.23）显著低于正常组织（1.00±0.32）（P<0.05）。敲低1组CAL27和SCC9细胞活力、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数、S期细胞比例、gln消耗量、α-KG产生量、ATP浓度、cyclinD1和GLS1蛋白表达均显著低于siRNA空白组，细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著高于siRNA空白组（P<0.05）。与抑制物对照组相比，抑制物组CAL27和SCC9细胞miR-296-5p表达显著降低，细胞活力、克隆形成数、迁移率、侵袭细胞数、S期细胞比例、gln消耗量、α-KG产生量、ATP浓度、cyclinD1和GLS1蛋白表达均显著升高，细胞凋亡率、G0-G1期细胞比例显著降低（P<0.05）。与miR空白组相比，miR过表达组CAL27和SCC9细胞TAGLN2 mRNA、蛋白表达量均显著降低。与共转染对照组比较，共转染组CAL27和SCC9细胞TAGLN2 mRNA、蛋白表达量均显著升高（P<0.05）。动物实验结果显示，与对照组相比，敲低组裸鼠的肿瘤体积、质量、circ-BICD2及TAGLN2的表达水平均显著降低，miR-296-5p表达水平显著升高（P<0.05）。结论OSCC组织和细胞中circ-BICD2均为高表达，干扰circ-BICD2可抑制OSCC细胞增殖、迁移侵袭、谷氨酰胺代谢以及肿瘤生长，促进细胞凋亡，其机制与调控miR-296-5p/TAGLN2分子轴有关。

简介：摘要目的观察细丝蛋白A(FLNa)在人原发性肝细胞癌中的表达，探究其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法采用免疫组织化学法及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测70例原发性肝癌及对应癌旁组织中FLNa表达，分析其与患者临床病理特征及预后间的相关性；RT-qPCR法检测不同肝癌细胞株(SMMC-7721、HepG2、HCCLM3、Huh7、PLC/PRF/5、Hep3B)与正常肝脏细胞株HL-7702中FLNa mRNA表达。慢病毒转染法构建过表达FLNa的Hep3B细胞株，RT-qPCR检测转染；噻唑蓝(MTT)法、平板克隆实验、Transwell实验检测细胞增殖、克隆及侵袭迁移能力变化；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶(p-p38MAPK)表达，采用单因素方差分析、χ2检验、LSD-t检验或秩和检验对上述所得数据进行统计分析。结果肝癌组织中FLNa阳性表达率低于癌旁组织(14.3%比81.4%，χ2＝9.725，P<0.05)，FLNa在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁正常组织(3.13±1.02比22.01±2.38，t＝6.520，P<0.05)，其表达与肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度、脉管浸润及淋巴结转移有关(χ2肿瘤大小＝6.400，χ2分化程度＝10.850，χ2脉管浸润＝4.055，χ2淋巴结转移＝7.256，均P<0.05)，但与性别、年龄、肿瘤部位及AFP水平无明显相关(χ2性别＝0.000，χ2年龄＝0.010，χ2肿瘤部位＝0.038，χ2AFP＝3.276，均P>0.05)。FLNa阳性表达患者中位生存期显著高于阴性表达者(23.3个月比10.3个月，P<0.05)。各肝癌细胞株中FLNa表达量均低于HL-7702细胞株(1.95±0.45、1.90±0.58、1.89±0.72、1.99±0.10、1.90±0.49、1.81±0.17比14.08±2.52，FSMMC-7721＝4.120，FHepG2＝4.774，FHCCLM3＝4.655，FHuh7＝4.987，FPLC/PRF/5＝3.735，FHep3B＝5.094，均P<0.05)。过表达FLNa的Hep3B细胞增殖、克隆及侵袭迁移能力显著降低，ERK2、MMP-9、p-p38MAPK表达明显下降(均P<0.05)。结论FLNa在人原发性肝癌中低表达，过表达FLNa可通过抑制MAPK/ERK信号通路活化而抑制肝癌细胞恶性生物学行为。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) MYOSLID靶向微小RNA(miR)-339-5p调控肺癌细胞生物学行为的分子机制。方法收集2016年5月至2018年4月于本院接受手术治疗的肺癌组织及癌旁组织标本20例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肺癌组织及癌旁组织中MYOSLID与miR-339-5p的表达。体外培养肺癌细胞株A549并分组转染，用噻唑蓝(MTT)、双荧光素酶报告实验验证MYOSLID对miR-339-5p的靶向调控作用；通过细胞转染及分组，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移及侵袭，双荧光素酶报告基因检测，蛋白质印迹法(Western blot)检测，细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)，负向调控因子P21(p21)，B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、金属蛋白酶2(MMP)-2、MMP-9蛋白表达用Image J软件分析各条带灰度值。结果抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞活力及Cyclin D1蛋白相对表达量，si-MYOSLID组低于si-NC组[1.00±0.09比0.42±0.04，t＝17.667，P<0.05；0.74±0.06比0.31±0.03，t＝19.230，P<0.05]；p21蛋白si-MYOSLID组高于si-NC组[0.28±0.03比0.69±0.06，t＝18.335，P<0.05，]，差异有统计学意义。抑制lncRNA MY OSLID表达对肺癌A549细胞凋亡率(%)及bax的表达水平，si-MYOSLID组明显高于si-NC组[6.32±0.64比19.48±1.83，t＝20.317，P<0.05；0.32±0.03比0.71±0.07，t＝15.362，P<0.05]；bcl-2蛋白的表达水平，si-MYOSLID组明显高于si-NC组[0.62±0.06比0.23±0.03，t＝17.441，P<0.05]，差异有统计学意义。抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞迁移与侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9的表达水平，si-MYOSLID组低于si-NC组[0.22±0.06比0.43±0.01，t＝14.441，P<0.05；0.15±0.02比0.37±0.02，t＝10.410，P<0.05；0.36±0.02比0.48±0.02，t＝16.041，P<0.05]，差异有统计学意义。miR-NC组肺癌A549细胞增殖、凋亡率低于miR-339-5p组[(1.00±0.09)%比(2.58±0.25)%，t＝17.839，P<0.05；(7.32±0.74)%比(17.45±1.63)%，t＝16.041，P<0.05]；迁移细胞数及侵袭细胞数，miR-NC组高于miR-339-5p组(98.36±9.54比52.64±5.28，t＝12.579，P<0.05；84.33±8.41比44.69±5.17，t＝12.046，P<0.05)，差异有统计学意义。miR-339-5p过表达对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的影响-Cyclin D1蛋白表达，miR-NC组高于miR-339-5p组(0.76±0.07比0.38±0.03，t＝14.968，P<0.05)；p21蛋白表达miR-NC组低于miR-339-5p组(0.27±0.03比0.64±0.06，t＝16.546，P<0.05)；bcl-2蛋白表达，MMP-9蛋白表达，MMP-2蛋白表达，miR-NC组低于miR-339-5p组(0.61±0.06比0.28±0.03，t＝14.758，P<0.05；0.71±0.07比0.33±0.03，t＝14.968，P<0.05；0.88±0.08比0.43±0.04，t＝15.093，P<0.05)bax蛋白表达，miR-NC组低于miR-339-5p组(0.31±0.03比0.68±0.06，t＝16.546，P<0.05)，差异有统计学意义。干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭的作用，与si-NC组比较，si-MYOSLID组逆转miR-339-5p表达，凋亡率(%)及迁移细胞数最明显，si-MYOSLID和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p差异有统计学意义[(2.41±0.24)比(1.53±0.14)，F＝119.730，P<0.05；(19.63±1.95)比(12.48±1.23)，F＝130.702，P<0.05；(43.16±4.38)比(82.64±8.26)，F＝141.749，P<0.05]；与si-MYOSLID+anti-miR-NC组比较，si-MYOSLID+anti-miR-339-5p凋亡率[(12.48±1.23)%，F＝130.027，P<0.05]干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的作用，蛋白表达si-MYOSLID组和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p组差异有统计学意义。结果显示抑制MYOSLID的表达可通过靶向miR-339-5p而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭，并可诱导细胞凋亡，MYOSLID可能为肺癌治疗的潜在新靶点。结论lncRNA MYOSLID通过调控miR-339-5p促进肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭，抑制细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lncRNA ADPGK-AS1)对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响及其调控机制。方法收集2017年2月至2018年11月在驻马店市中心医院和郑州大学第一附属医院接受RB手术治疗的RB患者39例39眼的术中瘤旁组织和瘤体组织标本，采用实时荧光定量PCR法检测ADPGK-AS1和miR-623在标本组织中的相对表达量。体外培养人RB细胞Y-79，将培养细胞分为小干扰RNA正常对照组(siRNA-NC组)、siRNA-ADPGK-AS1组、微小RNA正常对照组(miR-NC组)、miR-623组、siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组和siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组，采用MTT法检测各组细胞增生率；采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭数；采用双荧光素酶报告实验检测Y-79细胞中ADPGK-AS1和miR-623的靶向关系；采用Western blot法检测不同干预组细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达量。结果与瘤旁组织比较，RB组织中ADPGK-AS1相对表达量升高，miR-623相对表达量明显降低，差异均有统计学意义(t＝40.522、48.497，均P<0.01)；与siRNA-NC组比较，siRNA-ADPGK-AS1组细胞中Ki-67蛋白相对表达量明显下降，Y-79细胞增生A值显著降低，差异均有统计学意义(t＝26.833、18.522，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝22.123、26.183，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1组迁移细胞数和侵袭细胞数均明显少于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(t＝12.385、19.201，均P<0.01)；双荧光素酶报告实验证实ADPGK-AS1可靶向结合miR-623；miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量明显低于miR-NC组，差异均有统计学意义(t＝22.137、22.200、21.094，均P<0.01)；与miR-NC组比较，miR-623组Y-79细胞增生A值显著降低且迁移细胞数和侵袭细胞数均明显减少，差异均有统计学意义(t＝16.398、11.400、17.846，均P<0.01)；siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组细胞中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量均明显高于siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组，差异均有统计学意义(t＝20.795、17.493、23.479，均P<0.01)；与siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-NC组比较，siRNA-ADPGK-AS1＋anti-miR-623组增生A值明显升高且迁移细胞数及侵袭细胞数明显增多，差异均有统计学意义(t＝15.600、14.495、17.855，均P<0.01)。结论敲低ADPGK-AS1基因可抑制RB细胞增生、迁移和侵袭，其作用机制与miR-623的表达上调有关。

简介：摘要目的探讨Six同源盒蛋白4(Six homeobox 4，Six4)蛋白在肝癌中表达及对肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法选取2018年6月到2019年6月新乡医学院第一附属医院收集的169例肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象，采用免疫组织化学分析肝癌组织和癌旁组织中Six4蛋白表达水平；采用常间回文重复序列丛集-Cas9(CRISPR-Cas9)在人类肝癌细胞HepG2中建立Six4敲除细胞系，命名为对照组和SIX4 KO组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖；采用Transwell分析两组细胞迁移；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析上皮间质标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平，计量数据比较采用t检验。结果肝癌组织中Six4蛋白表达水平(169.59±18.59)高于癌旁组织(79.43±10.43)，差异有统计学意义(t＝4.179，P<0.05)。本研究成功构建Six4敲除细胞系。Six4 KO组细胞吸光值(1.21±0.19)低于对照组(2.15±0.28)，差异有统计学意义(t＝3.441，P<0.05)。对照组细胞EdU染色阳性率(76.45±8.90)%明显高于Six4 KO组细胞(31.63±7.43)%，差异有统计学意义(t＝4.693，P<0.05)。Six4 KO组细胞迁移数量(65.64±9.99)个低于对照组(119.48±12.08)个，差异有统计学意义(t＝3.748，P<0.05)。Six4 KO组细胞E-cadherin相对表达水平(1.49±0.21)高于对照组(0.33±0.11)，差异有统计学意义(t＝5.184，P<0.05)。Six4 KO组细胞间质标记物N-cadherin和Vimentin相对表达水平(0.58±0.11、0.68±0.23)低于对照组(1.74±0.28、1.89±0.26)，差异均有统计学意义(t＝4.274、4.109，P<0.05)。结论SIX4蛋白在肝癌组织中呈高表达，参与肝癌细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化等恶性细胞生物学行为。

简介：摘要目的探讨miR-497通过靶向调节Yes相关蛋白1（Yes-associated protein 1，YAP1）表达对甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）细胞生物学行为的影响。方法将人PTC细胞株TPC-1细胞分为对照组、miR-497组、si-YAP1组和miR-497+si-YAP1组，采用LipofectamineTM3000脂质体转染，荧光素酶报告实验验证miR-497和YAP1靶向关系。MTT法检测各组细胞增殖活性，流式细胞仪分析细胞凋亡率，Transwell检测侵袭细胞数，划痕实验检测细胞迁移率。Western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）和活化的半胱天冬酶3（cleaved Caspase-3）表达。采用SPSS 22.0分析数据，正态分布计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两组间比较采用SNK-q。结果与对照组比，miR-497组和si-YAP1组细胞YAP1 mRNA和蛋白表达下降（q=14.682、14.597，23.743、23.571；P<0.05），细胞增殖活性、侵袭细胞数和迁移率下降（q=4.724、4.568、3.841，4.216、3.952、3.274；P<0.05），凋亡率升高（q=3.783、4.336，P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9和cleaved Caspase-3蛋白表达下降（q=5.823、5.981、6.036、6.485，5.934、6.110、6.573、6.614；P<0.05），TIMP-1蛋白表达升高（q=6.071、6.148，P<0.05）；与si-YAP1组相比，miR-497+si-YAP1组细胞miR-497水平升高（q=14.726，P<0.05），YAP1 mRNA和蛋白表达下降（q=3.089、3.126，P<0.05），细胞增殖活性、侵袭细胞数和迁移率下降（q=2.654、2.537、2.246，P<0.05），凋亡率升高（q=2.875，P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9和cleaved Caspase-3蛋白表达下降（q=4.371、4.365、4.383、4.368，P<0.05），TIMP-1蛋白表达升高（q=4.275，P<0.05）。结论miR-497可靶向负调控YAP1表达，抑制TPC-1细胞增殖、侵袭和迁移。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-133b靶向调控多聚嘧啶通道结合蛋白1(PTBP1)调控乳腺癌细胞生物学的行为机制。方法选取乳腺癌及癌旁组织标本83例，收集患者临床病理资料，同时选取乳腺癌细胞系(MCF-7)、正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A)，实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-133b和PTBP1 mRNA表达，分析与临床病理特征的关系，MCF-7细胞分为阴性对照组、miR-133b模拟物(mimic)组、miR-133b inhibitor组、miR-133b mimic+PTBP1沉默组和miR-133b inhibitor+和PTBP1沉默组，噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测MCF-7细胞增殖及周期的变化，划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭，蛋白质印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和PTBP1蛋白表达，双荧光素酶实验验证miR-133b对PTBP1的靶向调控机制。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，计数资料采用χ2检验和Fisher精确检验进行分析。结果miR-133b和PTBP1 mRNA在乳腺癌组织(0.94±0.18、4.28±0.27)及乳腺癌细胞的表达水平(1.09±0.22、3.65±0.19)分别明显低于和高于癌旁组织(2.12±0.09、t＝4.343，P<0.05；1.37±0.21、t＝6.006，P<0.05)及MCF-10A细胞(1.99±0.11、t＝5.223，P<0.05；1.15±0.09、t＝5.774，P<0.05)。miR-133b和PTBP1均与TNM分期(1.204±0.057、3.865±0.172，χ2＝6.217，P<0.001)和淋巴转移(0.489±0.041、1.632±0.147，χ2＝7.031，P<0.001)等明显相关，而与年龄(0.601±0.052、2.008±0.187，χ2＝0.261，P>0.05)、分化程度(0.592±0.057、1.994±0.187，χ2＝0.274，P>0.05)和病理分级无关(0.587±0.059、1.921±0.172，χ2＝0.257，P>0.05)。与阴性对照组比较，miR-133b mimic组增殖率[(35.43±1.74)%、(8.43±0.35)%，F＝166.465，P<0.05]、迁移、侵袭细胞数(109±10.562、77±5.751，t＝4.663，P<0.05；128±11.624、81±7.251，t＝7.453，P<0.05)、bcl-2(2.78±0.32、0.76±0.11，t＝4.122，P<0.05)和PTBP1表达(3.45±0.33、0.89±0.26，t＝3.154，P<0.05)明显降低，G1期阻滞明显延长(F＝276.872，P<0.05)，bax表达明显增加(1.22±0.12、3.39±0.46，t＝9.123，P<0.05)，miR-133b mimic+PTBP1沉默组变化更为明显(1.22±0.12、7.71±0.23，t＝6.009，P<0.05)，miR-133b inhibitor组明显逆转上述指标变化(1.22±0.12、0.76±0.11，t＝3.334，P<0.05)，miR-133b inhibitor+PTBP1沉默组逆转更为明显(1.22±0.12、0.33±0.11，t＝5.098，P<0.05)。双荧光素酶实验显示miR-133b可靶向调控PTBP1。结论miR-133b靶向调控PTBP1从而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

简介：

简介：摘要：国家新一轮的基础教育课程改革正在区域实验当中，不久将全面推开。这给我们的教师带来了巨大的挑战和机遇。课程改革，需要一批有改革意识的教师来操作。从理论上，以及实践的经验上来看，教师本身的素养能否跟得上课程改革的步伐，从根本上决定了课程改革的成败。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胸腺生成素反义RNA 1(TMPO-AS1)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法2016年6月至2019年12月，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测20例食管癌组织和癌旁组织中lncRNA TMPO-AS1和微小RNA(miR)-501-3p的水平，食管癌Eca109细胞分为lncRNA TMPO-AS1干扰组(转染si-NC和si-TMPO-AS1)；miR-501-3p过表达组(转染miR-NC和miR-501-3p)；lncRNA TMPO-AS1过表达组(转染pcDNA和pcDNA-TMPO-AS1)；lncRNA TMPO-AS1和miR-501-3p共抑制组(转染si-TMPO-AS1＋anti-miR-NC和si-TMPO-AS1＋anti-miR-501-3p)。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测食管癌Eca109细胞增殖、凋亡率、细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白水平，双荧光素酶报告系统验证lncRNA TMPO-AS1与miR-501-3p的调控关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差进行分析。结果食管癌组织组中的lncRNA TMPO-AS1水平(2.64±0.26)高于癌旁组织(1.00±0.09，t＝26.657，P<0.05)，miR-501-3p水平(0.44±0.04)低于癌旁组织(1.00±0.07，t＝31.063，P<0.05)；干扰lncRNA TMPO-AS1的Eca109细胞24 h增殖(0.36±0.03)低于si-NC组(0.39±0.03，t＝2.121，P<0.05)，48 h增殖(0.45±0.04)低于si-NC组(0.75±0.07，t＝11.163，P<0.05)，72 h增殖(0.57±0.05)低于si-NC组(1.16±0.09，t＝17.191，P<0.05)，迁移细胞数[(54.14±5.65)个]低于si-NC组[(113.02±9.87)个，t＝15.531，P<0.05]，侵袭细胞数[(47.69±5.01)个]低于si-NC组[(96.32±9.88)个，t＝13.169，P<0.05]，细胞凋亡率[(22.15±2.22)%高于si-NC组[(6.98±0.69)%，t＝19.576，P<0.05]；过表达miR-501-3p的Eca109细胞48 h增殖(0.51±0.05)低于miR-NC组(0.77±0.07，t＝9.067，P<0.05)，72 h增殖(0.65±0.06)低于miR-NC组(1.15±0.09，t＝13.867，P<0.05)，迁移细胞数[(61.23±6.33)个]低于miR-NC组[(115.25±9.25)个，t＝14.458，P<0.05]，侵袭细胞数[(53.14±5.33)]低于miR-NC组[(98.32±8.47)个，t＝13.543，P<0.05]，细胞凋亡[(19.58±1.74)%]高于miR-NC组[(7.23±0.77)%，t＝19.471，P<0.05]，差异均有统计学意义。结论lncRNA TMPO-AS1通过靶向miR-501-3p促进食管癌细胞的恶性生物学行为，可被视为食管癌患者的潜在治疗靶标。

简介：

简介：摘要：新课改对教师提出了更高的要求，但新课改下的教学行为不是一味地追求新，教师要不断从自身的教学行为中发现问题，秉承以往好的教学行为，进行积极的探索。