简介：作为一个模式植物,烟草在植物分子生物学研究中发挥着重要的作用。总RNA的提取质量,对于基因表达、基因克隆、cDNA文库建立、RNA原位杂交以及转基因材料鉴定等分子生物学基础研究至关重要。尤其在进行基因克隆及cDNA文库时,只有高质量的RNA,才能保证cDNA第一链合成的完整性。由于烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的含量较高,因此,在应用TRIzolRNA提取试剂盒进行烟草总RNA提取时,所提取的RNA产物中的蛋白质及多糖等杂质含量偏高。因此,针对这一问题,我们对TRIzol法进行了改进,并获得了高质量的烟草总RNA。经琼脂糖电泳检测,利用该方法提取的烟草总RNA,条带清晰、无拖尾现象,28S与18S的比例约为2:1。紫外吸收值的测定表明,所提取的烟草总RNA的A260/A280的值基本达到了1.9以上,说明所提取的RNA的质量较高,可广泛应用于基因的克隆及基因的表达研究。

简介：目的：建立从红花组织中快速分离总RNA的方法，为进行反转录PCR（RT—PCR）、快速扩增cDNA末端（RACE）、蛋白质印迹法及其他分子生物学实验奠定基础。方法：采用改良Trizol法提取红花苞叶总RNA时，加入DNaseⅠ消化残留DNA，并加入RNase抑制剂，利用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行纯度和浓度检测。RT—PCR后，进行cDNA-序列相关扩增多态性（SRAP）分析。结果：抽提的RNA经电泳检测，可见28S、18S、5SRNA三条带，带的亮度强，且28S的宽度是18S的2倍左右。紫外吸光度D260／D280为1．8～2．0，D260／D230为2．0～2．3。总RNA产物进行cDNA-SRAP扩增，出现清晰的条带。结论：改良Trizol法所提取的RNA纯度高，质量好，完整性好，可成功进行cDNA-SRAP扩增。

简介：随着大量生物领域科研人员进入植物RNA研究领域，开展RNA研究，使得以RNA为终产物的基因组研究取得突破性进展，新的RNA基因不断增加，RNA的新功能不断被发现。但由于RNA的不稳定性，使得RNA操作远比DNA操作困难，且尚有大量未知的RNA及其功能等待人们去探索、研究．而这些研究又都基于高质量RNA的提取。因此，根据笔者自身实验经验，及在查阅大量相关文献的基础上。针对植物总RNA提取的一些关键影响因素、消除对策、RNA检测方法及RNA保存方法上进行了系统的阐述，旨在为高质量植物组织总RNA的制备提供理论参考，为RNA分子生物学实验后续研究提供理论支撑。

简介：检测胰腺组织mRNA的表达已经成为研究胰腺疾病的重要手段，但由于胰腺组织富含RNase，抽提胰腺总RNA是分子生物学实验的难点之一。为此，本实验旨在探讨提取胰腺总RNA的理想方法。

简介：目的：通过对TRIzol一步法进行改进，建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法：样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提；对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提，用2.5mol/L的醋酸钾沉淀，并加入适量糖原（10mg/mL）与RNA共沉淀。结果：琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明，改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染，RNA的产率提高。结论：制备的总RNA纯度高，完整性好，能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求，是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。

简介：以卷丹、麝香百合品种富田和离体鲜切花的花蕾为材料，比较Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB改进法和SDS改进法提取总RNA的效果，结果表明，SDS改进法能有效去除多糖，提取的RNA中28SrRNA亮度约为18SrRNA的两倍，OD260/OD280值介于1．7-2．2之间，卷丹RNA得率为132．52μg／g，富田RNA得率为186．88μg／g。进一步用SDS改进法分别提取富田外轮花瓣、内轮花瓣、雄蕊、雌蕊、叶和茎的RNA，同样可以获得完整的纯度高的RNA，其中28SrRNA亮度约为18SrRNA的两倍，OD260／0D280值介于1．7～2．2之间，说明此方法适用于百合各个组织RNA的提取。经RT—PCR获得了花发育基因的特异性条带，说明用SDS改进法从百合中提取的RNA质量好、产率高、完整性强，完全适合于百合进一步的分子生物学研究。

简介：针对沙棘组织中多糖、多酚、粗蛋白等次生代谢产物含量高的特点，采用RNAplantPlus总RNA提取试剂改良法，成功地提取了沙棘叶片总RNA。所提取的沙棘叶片总RNA凝胶电泳显示28s和18s条带清晰完整，A260/A280和A260/A230比值分别为1.79和2.07，且平均得率为298.1μg/g（鲜叶）。试验结果表明，RNAplantPlus总RNA提取试剂改良法具有方便快捷、提取RNA纯度高、有效排除多种次生代谢产物影响的特点，用该方法提取的沙棘叶片总RNA可以用于后续的分子生物学研究中。

简介：目的探讨单层培养细胞总RNA提取过程中先行细胞消化或离心富集对所提RNA质量是否产生影响。方法培养NGF诱导的PCI2细胞，采用Trizol试剂提取RNA：离心组（A）先将贴壁生长细胞经胰酶消化、离心获得细胞沉淀，加入1mlTrizol进行RNA提取；直接组（B）将培养液弃尽后直接加入Trizol试剂（1ml／10cm2瓶壁）进行RNA提取；均采用琼脂糖凝胶电泳分析RNA完整性，紫外分光光度仪测定RNA浓度和OD260／OD280比值。结果凝胶电泳结果显示，直接组出现3条清晰的条带（28S、18S和5s条带），离心组在电泳末端5S区出现粗大的条带。两组OD260／OD28比值相似，约为1．6。直接组组间样品间RNA浓度相差较大。结论采用离心法和直接法提取贴壁细胞总RNA，先行细胞离心富集增加了RNA降解机会，直接法提取的RNA质量较高，考虑对后续实验的影响，直接法更优于离心法。

简介：用修改了的异硫氰酸胍法从两种森林昆虫Closteraanastomosis和Saperdapopulnea的不同组织中快速提取总RNA.电泳检测和cDNA合成分析结果表明,RNA未降解.经紫外分光光度计检测,A260/A280在1.8到2.0之间,表明RNA的纯度很高.用RT-PCR合成的双链cDNA的长度大于2kb,表明mRNA的完整性.用PCR的方法克隆了C.anastomosisβ肌动蛋白和几丁质酶的基因片段,表明RNA可用于其它分子操作.使用这个方法,在4个小时内可至少从8个样品中提取RNA并进行电泳分析.这些结果表明用这个修改后的一步法提取昆虫总RNA是省时,省钱和有效的.

简介：从动物组织中提取总RNA是现代分子生物学研究中经常使用的重要实验技术,按常规方法获得的总RNA产品中常伴有大分子量染色体DNA污染.为此,我们摸索出了保证RNA制品纯度、质量和产量的DNA酶消化最佳反应条件.利用改良后的方法提取了小鼠脏器组织总RNA,进行了新基因mPC-1在小鼠脏器中表达的组织分布研究.

简介：念珠菌是最主要的致病性真菌之一。随着医学分子生物学的发展，有关对念珠菌的致病基因及其表达的研究越来越广泛，进行这些研究的一个关键步骤就是RNA的提取。主要由几丁质组成的真菌的细胞壁厚且坚韧，因此破壁是提取念珠菌RNA的关键。

简介：目的：从航天诱变向日葵种子中提取高质量的总RNA。方法：采用改进的SDS法,提取缓冲液与氯仿同时作用液氮研磨材料后,用酸酚-氯仿抽提一次,经LiCl过夜沉淀、DNaseⅠ处理、1/2体积的无水乙醇沉淀多糖,最后加入1/10体积的醋酸钠和2倍体积的无水乙醇沉淀总RNA,用琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度法测定产量与纯度,用PT-PCR鉴定RNA的质量。结果：提取的RNA电泳条带清晰,D260nm/D230nm、D260nm/D280nm值分别为2.09、2.00,其产量为35.30μg/100mg,用PT-PCR能扩增出肌动蛋白基因片段。结论：采用该方法提取的总RNA纯度高、完整性好,适于进一步的分子生物学研究

简介：目的探讨将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA转染树突细胞（DCs）最优化的方法。方法以rhGM—CSF、rhIL-4和TNF-α联合诱导外周血单核细胞以获得DCs，观察DCs的形态变化，流式细胞术检测DCs表面标志CD40、HLA—DR、CD83和CD86表达，混合淋巴细胞反应（MLR）测定DCs刺激异体T细胞增殖的能力。采用脂质体转染、电穿孔及被动转染三种方法将MiaPaCa-2总RNA转染DCs，应用实时定量PCR法检测MUC1mRNA表达，MTF法测定DCs存活率。结果所获细胞具有典型的成熟DCs形态特征，CD40、HLA—DR、CD83和CD86阳性表达率分别为34．3％、50．2％、89．2％和73．6％，对同种异体T淋巴细胞具有极强的刺激增殖作用。电穿孔法DCs转染48h后，DCs的MUC1mRNA表达量为45．39±9．33，明显高于脂质体法的31．68±7．25和被动转染法的18．53±3．26；DCs存活率为（80．36±2．43）％，较被动转染法的（91．48±5．42）％略低，但高于脂质体法的（67．44±2．51）％，且基本稳定在80％左右。结论采用电穿法将胰腺癌MiaPaCa－2细胞总RNA体外转染DCs的效率较高，且较安全。

简介：针对多浆旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质的特点，在常规异硫氰酸胍方法的基础上进行改进，摸索出一种霸王叶和根总RNA提取的方法。本方法主要通过在提取缓冲液中加入4％β-巯基乙醇以去除多酚物质的干扰；用2mol／L醋酸钠（pH4．0）、水饱和酚和氯仿：异戊醇（24：1）抽提以去除多糖和蛋白物质。采用该方法提取的霸王总RNA纯度高、完整性好，电泳条带清晰，OD260/OD280值在1．8～2．0之间，其质量完全可以满足进一步分子生物学研究的要求。

简介：RNAi是双链RNA介导的、序列特异性的转录后基因沉默,自1998年发现至今已有很大进展.本文综述了RNA干涉的分子机理及其应用研究进展.

简介：目的通过白色念珠菌改良热酸性酚法RNA提取方法与玻璃珠法、超声破碎法和液氮研磨法的比较，确定一种有效提取白色念珠菌早期生物膜总RNA的方法。方法将培养3h和6h白色念珠菌生物膜分为2组，每组分别采用热酸性酚法、玻璃珠法、超声破碎法和液氮研磨法，提取酵母相白色念珠菌的总RNA，用分光光度计及甲醛变性凝胶电泳检测RNA的浓度、纯度以及完整性。结果1～8号样本RNA总量依次为：9．96、12．72、2．88、4．56、2．76、4．92、7．32、10．68μg。结论热酸性酚法是提取白色念珠菌早期生物膜总RNA的理想方法。

简介：

简介：AbstractGastric cancer (GC) is a common malignancy and is the third leading cause of cancer-related death. At present, there is no simple and effective screening method for early-stage GC, and the treatment results and prognosis are poor. With the continuous improvement of molecular biology techniques, research on circular RNA (circRNA) has gradually expanded over time. Much data supports the role of circRNA in tumorigenesis. Moreover, due to its structural specificity and biological stability, circRNA is anticipated to be a potential biomarker for tumor diagnosis. Studies have confirmed that circRNA can participate in the proliferation, invasion, metastasis, and apoptosis of GC. These findings will lead to novel directions for the diagnosis and treatment of GC. This article reviews the structure and function of circRNA, summarizes the current studies on circRNA, and discusses the potential diagnostic value of circRNA in GC.

简介：摘要目的观察肝细胞癌患者血清中微小RNA(miRNA，miR)-432、微小RNA-432(miR-30b)及微小RNA-432(miR-764)水平。方法选取安徽医科大学第三附属医院2015年1月30日至2018年1月30日收治的150例肝细胞癌患者，同时选取150例年龄匹配的体检结果健康者作为对照组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测研究对象外周血中miR-432、miR-30b及miR-764表达水平。观察miR-432、miR-30b及miR-764与肝细胞癌患者临床病理因素的相关性，并对肝细胞癌患者进行随访，观察miR-432、miR-30b及miR-764与患者总生存期(OS)的相关性。采用独立样本t检验及Log-rank检验。结果肝细胞癌患者外周血中miR-432(2.11±0.71)、miR-30b(1.88±0.68)及miR-764(1.90±0.65)水平均较对照组高(1.12±0.40、1.01±0.38、0.99±0.35，t＝4.879、13.679、15.097，P<0.01)。miR-432、miR-764表达量与肝细胞癌TNM分期有相关(P<0.05)，miR-30b与肝细胞癌TNM分期及分化程度有相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法及Log-rank检验显示，miR-432、miR-30b及miR-764表达量升高组OS短于降低组(Log-rank χ2＝16.433、10.575、7.998，P<0.05)。Cox多因素分析均显示，TNM分期、miR-432、miR-30b、miR-764、肿瘤分化程度是肝细胞癌OS的独立影响因素[比值比(OR)＝2.904、2.135、1.651、1.496、1.205，P<0.05]。结论肝细胞癌患者循环中miR-432、miR-30b及miR-764表达上调，且与患者总生存率降低密切相关。

简介：近年的研究发现非编码RNA（ncRNA）分子能在多个水平参与基因表达的调控机制,其中小分子双链RNA（dsRNA）对相关蛋白表达的特异性抑制作用已经进行了广泛而深入的研究,如小干扰RNA（siRNA）能够诱导与其分子核糖核苷酸排列序列相一致的mRNA降解,