简介：分泌途径主要由内膜系统构成,内质网和高尔基体对于分泌蛋白的运输及定位具有重要作用.分泌蛋白的运输包括顺行途径和逆行途径.蛋白质通过质流和受体介导的途径运输到小泡中.在植物中,分泌蛋白的运输主要通过小泡和相连的小管来完成.分子伴侣和质量控制不仅能优化新合成蛋白的折叠和组装,而且去除了有折叠缺陷的蛋白.分泌蛋白的定位需要特定的信号肽,而高尔基体固有蛋白以依赖跨膜长度的方式,沿着分泌途径的细胞器分布.本文对植物表达分泌蛋白的分泌途径及定位、相关的分子伴侣和质量控制进行了综述.

简介：以pLF3为模板,PCR扩增得到葡聚糖酶的启动子,并将启动子基因重新连接到切除启动子基因及葡聚糖酶基因的pLF3载体上,构建pLF3-pro载体.采用PCR的方法扩增朱黄青霉总DNA中的α-1-6-葡聚糖酶基因,并插入到pLF3-pro载体上,构建pLF3-Pro-Dex质粒,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,酶切验证及PCR验证均表明成功构建了pLF3-Pro-Dex质粒,且重组质粒中的α-1-6-葡聚糖酶基因与朱黄青霉中的α-1-6-葡聚糖酶基因有93%的同源性.

简介：引起人泌尿道感染的大肠杆菌(UPEC)的α-溶血素分泌系统属于Ⅰ型分泌系统，能够分泌一种RTX毒素蛋白-α-溶血素。近年来α-溶血素分泌系统的应用日益广泛，特别是在减毒活载体疫苗中呈递外源抗原。本文分析了大肠杆菌α-溶血素分泌系统的遗传特性，详细介绍了其基因的表达调控，为构建更加有效的分泌型载体提供了理论基础。

简介：目的探讨Wnt-1诱导分泌蛋白-1（WISP-1）表达与乳腺癌预后的关系。方法本研究选取南昌市第三医院2011年1～6月手术切除且经常规病理证实的浸润性乳腺癌标本120例及其癌旁组织进行回顾性分析。采用免疫组织化学EnVision两步法检测WISP-1蛋白在120例乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达，同时收集这些患者的临床特征以及随访结果，采用X。检验分析乳腺癌组织中WISP-1表达与患者临床病理特征的关系，采用Kaplan-Meier法计算患者生存率，采用Log-rank检验比较患者生存差异，并用Cox比例风险模型分析影响乳腺癌患者预后的因素。结果WISP-1在浸润性乳腺癌中的阳性表达率（85％，102／120）明显高于癌旁组织（35％，42／120）（χ^2=7．653，P=0．003）。WISP-1表达与患者的肿瘤组织学分级（χ^2=22．846，P〈0．001）、淋巴结转移（χ^2=11．663，P=0．001）、HER-2表达（χ^2=7．825，P=0．005）以及远处转移（χ^2=35．737，P〈0．001）有关。患者随访时间为24．0-60．0个月，中位随访时间为43．9个月。生存分析结果发现，WISP-1表达水平是患者DFS的预后因素（χ^2=19．354，P〈0．001）。低表达WISP-1的患者出现复发转移的中位时间是48个月，而高表达WISP-1的患者出现复发转移的中位时间是40个月。Cox比例风险模型分析提示，WISP-1（OR=2．129，95％CI：1．099-4．124，P=0．025）、年龄（OR=4．617，95％CI：2．803-7．605，P〈0．001）、淋巴结转移（OR=2．014，95％CI：1．209-3．355，P=0．007）是乳腺癌患者DFS的独立预后因素。结论高表达WISP-1的乳腺癌患者预后更差，WISP-1蛋白可能是乳腺癌预后的标志物。

简介：摘要目的研究内分泌治疗疗效与乳腺癌ERβ表达的相关性。方法选择2015年2月-2016年2月到医院就诊的乳腺癌患者130例，均采取乳腺切除术联合内分泌治疗的方法，根据治疗效果分组，治疗有效记为观察组，患者76例，治疗无效记为对照组，患者54例。治疗后，对所有患者ERβ阳性表达进行检测，分析内分泌治疗疗效与乳腺癌ERβ表达的相关性。结果观察组患者ERβ阳性表达率为94.74%，对照组患者ERβ阳性表达率为40.74%，两组相比具有显著差异（P＜0.05）。结论在内分泌治疗疗效与乳腺癌ERβ的表达之间，具有较高的相关性，其能够提高乳腺癌的临床治疗效果。

简介：目的：研制高效分泌表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株。方法与结果：将优化设计的枯草芽孢杆菌MA139β-甘露聚糖酶基因用EcoRI／XbaI双酶切，克隆到诱导型表达载体pPICzoLA中α因子信号肽编码序列的下游，转化大肠杆菌筛选重组质粒，转化毕赤酵母X-33感受态细胞，经Zeocin筛选，获得重组表达菌株X-33／mann。将重组菌株在10L全自动发酵罐中进行高密度发酵培养，甲醇诱导72h发酵活力达到2100U／mL。重组甘露聚糖酶的最适催化温度为40℃，最适催化pH值为6．0。结论：枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达，具有开发作为饲料添加剂的潜能。

简介：摘要目的从阔褶水蛙皮肤分泌物中发现新型蛙皮素多肽，并鉴定其对胰岛细胞的促胰岛素分泌作用。方法通过电刺激法提取阔褶水蛙皮肤分泌物，以分子克隆大量制备蛙皮素多肽单链并测序。通过固相合成法合成已知序列多肽QUB2995，并以反相高效液相色谱(HPLC)纯化合成多肽，通过基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF)确认合成多肽是否为之前发现的新型多肽QUB2995。用qPCR以及ELISA检测QUB2995对小鼠胰岛细胞MIN6及大鼠胰岛细胞INS-1的促胰岛素分泌作用。结果通过分子克隆技术，在亚洲阔褶水蛙的皮肤分泌物中发现了一种新型蛙皮素多肽，命名为QUB2995(GAFGDFLKGAAKAGALKILSIAQCKLSGTC)。该蛙皮素多肽对小鼠胰岛细胞MIN6及大鼠胰岛细胞INS-1具有显著的促进胰岛细胞增殖以及胰岛素分泌作用，在10-5 mol/L浓度下效果最为显著。结论从阔褶水蛙中发现了新型蛙皮素多肽并命名为QUB2995，其对小鼠胰岛MIN6及大鼠胰岛INS-1细胞具有显著促胰岛素分泌作用，显示出作为治疗糖尿病药物的潜在价值。

简介：摘要：目的 观察SSTR2在消化道神经内分泌肿瘤（gastrointestinal neuroendocrine neoplasms, GINENs）中的表达并探讨其临床意义。方法 调阅皖南医学院弋矶山医院病理科2016年3月至2019年3月诊断的经内镜下黏膜剥脱术（endoscopic mucosal denudation, ESD）、内镜下黏膜切除术（endoscopic mucosal resection, EMR）、内镜下息肉摘除（endoscopic polypectomy, EPC）以及根治术切除的GINENs病例共68例，收集临床病理资料，同时选取正常胃黏膜组织蜡块32个作为对照；运用免疫组织化学方法检测SSTR2表达。分析SSTR2表达与临床病理因素之间的关系。结果 68例NENs病例中，SSTR2在高分化NENs中的表达率为69.81%（37/53）高于NECs中的表达33.33%（5/15），两者差异有统计学意义（χ2=6.687，P=0.010）。SSTR2的表达与患者年龄、肿瘤直径、组织学类型、NETs分级有相关性（P＜0.05）；而与淋巴结转移、脉管侵犯、坏死、神经侵犯和临床分期无相关性（P＞0.05）。结论 SSTR2在GINENs的表达与其临床病理参数具有相关性，可以作为一种潜在的预后指标。

简介：摘要本研究首先分析了非小细胞肺癌雌激素受体的表达，然后探讨了非小细胞肺癌内分泌治疗研究进展，现综述如下。

简介：摘要目的探究不同浓度尿酸刺激对成纤维细胞骨桥蛋白(OPN)表达及细胞增殖、凋亡、胶原蛋白分泌的作用。方法培养原代人心脏成纤维细胞(HCF)；按照不同尿酸刺激浓度对HCF进行分组：尿酸0、5、10和15 mg/dl组；刺激48 h后进行以下实验：定量聚合酶链反应(qPCR)检测OPN、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Coll-1的mRNA表达情况；Western blot检测OPN、α-SMA、Coll-1的蛋白表达量；细胞生长活力检测试剂盒检测成纤维细胞活力；CCK-8试剂盒检测细胞增殖毒性；Trans-well实验检测细胞迁移能力；不同浓度尿酸刺激72 h后，碘化丙啶染色试剂盒检测细胞凋亡。结果经48 h不同浓度尿酸处理后，qPCR和Western blot显示，尿酸5、10和15 mg/dl组的心脏成纤维细胞中OPN、α-SMA和Coll-1表达较尿酸0 mg/dl组均有上调趋势，以尿酸10 mg/dl组升高最显著(均为P<0.001)；细胞生长活力检测显示，尿酸5、10和15 mg/dl组的心脏成纤维细胞的生长增殖活力较尿酸0 mg/dl组显著增加(P<0.001、P<0.001和P＝0.013)，细胞增殖活力趋势也呈倒U型曲线关系；CCK-8检测显示，尿酸5和10 mg/dl组的细胞增殖毒性较尿酸0 mg/dl组明显提升(P＝0.020、0.004)；Trans-well实验表明，尿酸5、10和15 mg/dl组的细胞迁移能力增强；不同浓度尿酸刺激72 h后碘化丙啶染色检测显示，尿酸5、10和15 mg/dl组的细胞凋亡减轻，以尿酸10 mg/dl组最明显。结论尿酸可上调心脏成纤维细胞中OPN的表达，促使成纤维细胞增殖活化，增加胶原蛋白分泌。

简介：<正>有一种感觉,美丽而奇妙,发自人的内心,这就是幸福感。曾听人说过,幸福是大脑分泌的一种腺体,只要某种外界因素刺激了大脑,那么人就会分泌幸福的腺体。然而,却

简介：摘要目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平与分泌性中耳炎患者炎症水平的关系及其临床意义。方法选取2017年6月到2022年6月新乡市中心医院收治的44例急性中耳炎患者和同期44例健康体检者作为研究对象，收集中耳积液和外周血，采用蛋白质印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组研究者和不同性质中耳炎患者中耳积液和血清中HIF-1α和炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平；采用Pearson法分析HIF-1α、TNF-α、IL-1β与分泌性中耳炎患者病程的相关性。组间数据比较采用t检验。结果对照组血清HIF-1α表达水平(1.02±0.15)明显低于观察组耳积液和血清HIF-1α表达水平(1.79±0.15、2.26±0.15)，差异有统计学意义(t＝28.730、17.460，P<0.05)。对照组血清TNF-α和IL-6表达水平[(9.94±1.49)、(10.99±2.81) ng/ml]明显低于观察组耳积液和血清TNF-α和IL-6表达水平[(86.02±8.59)、(47.25±8.65) ng/ml和(46.77±6.51)、(32.77±8.62) ng/ml]，差异有统计学意义(t＝68.710、25.050、40.180、10.200，P<0.05)。慢性期患者血清HIF-1α表达水平(2.11±0.05)明显低于急性期患者血清HIF-1α表达水平(2.33±0.12)，差异有统计学意义(t＝3.963，P<0.05)。慢性期患者血清TNF-α和IL-6表达水平[(42.07±6.98)、(24.88±4.36) ng/ml]明显低于急性期患者血清TNF-α和IL-1β表达水平[(49.91±8.27)、(36.81±7.38) ng/ml]，差异有统计学意义(t＝9.725、8.890，P<0.05)。分泌性中耳炎患者血清HIF-1α、与TNF-α和IL-1β表达水平均呈正相关(r＝0.576、0.592，P<0.05)。血清HIF-1α、TNF-α和IL-1β水平与病程均呈正相关(r＝0.485、0.512、0.610，P<0.05)。结论分泌性中耳炎患者耳积液与血清HIF-1α、与TNF-α和IL-1β表达水平显著增加，并与患者病程密切相关。

简介：摘要复合性血管内皮瘤（composite hemangioendothelioma, CHE）是一种少见的中间型血管肿瘤。形态学上，CHE有复杂的结构，由网状、巢状的网状血管内皮瘤样区域和实性片状的上皮样血管内皮瘤样区域组成，部分还出现梭形细胞血管瘤样、Dabska瘤样及高级别血管肉瘤样区域。免疫表达上，瘤细胞表达CD31、ERG、突触素、神经元特异性烯醇化酶，D2-40灶状阳性，而CD34、嗜铬素粒A、CD56、TFE3、CAMTA1阴性。荧光原位杂交检测WWTR1-CAMTA1未见融合信号。随访时间49个月，复发1次，再次手术后辅以放疗，现无症状生存。伴神经内分泌标志物表达的CHE更易发生于深部软组织，形态学上需与其他中间型血管内皮瘤及神经内分泌肿瘤鉴别，生物学行为更具有侵袭性。

简介：

简介：摘要目的构建早老蛋白增强子2（PSENEN）基因沉默的人永生化角质形成细胞（HaCaT）模型，探究PSENEN基因表达下调对HaCaT细胞增殖以及γ分泌酶表达的影响。方法设计3组靶向PSENEN基因的shRNA序列，与线性化的LV3-pGLV-h1-GFP-puro载体构建慢病毒重组表达质粒，经酶切及测序鉴定后，进行慢病毒的包装、纯化和滴度测定。将HaCaT细胞分为5组进行转染：shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组分别加入含沉默PSENEN基因的shRNA1、shRNA2、shRNA3慢病毒原液，NC组加入含阴性对照shNC慢病毒原液，空白组不加病毒液。转染完成后，荧光显微镜下观察荧光表达，流式细胞仪检测转染效率。CCK8法测定HaCaT细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（qPCR）、Western印迹法分别检测PSENEN、呆蛋白（NCT）、早老蛋白1（PS1）、前咽缺陷蛋白1a（APH1a）mRNA、蛋白的相对表达量。统计分析采用重复测量方差分析、单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果倒置荧光显微镜下观察到shRNA1~shRNA3组、NC组均有荧光表达，流式细胞仪示转染效率均达98%以上。qPCR、Western印迹法显示，与NC组（1.054 ± 0.272、1.076 ± 0.075）相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组PSENEN mRNA（0.187 ± 0.010、0.163 ± 0.022、0.174 ± 0.009）、蛋白（0.219 ± 0.097、0.208 ± 0.014、0.185 ± 0.062）表达均显著降低（均P < 0.001）。CCK8法显示，与NC组相比，shRNA1组细胞增殖活性在0、12、36、48 h均显著增高（均P < 0.05），24和60 h差异无统计学意义（均P > 0.05）；shRNA2、shRNA3组在0、12、24、36、48、60 h细胞增殖水平均显著高于NC组（均P < 0.05）。shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组、NC组、空白组间NCT、PS1、APH1a基因mRNA表达差异无统计学意义（F值分别为8.168、4.644、1.981，均P > 0.05），mNCT、imNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白相对表达差异有统计学意义（F值分别为39.268、5.929、27.842、20.663，均P ≤ 0.01）。与NC组相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组mNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白表达均显著降低（均P < 0.01），imNCT蛋白表达变化无统计学意义（均P > 0.05）。结论成功构建了PSENEN基因沉默的HaCaT细胞模型，PSENEN基因沉默会引起HaCaT细胞增殖活性增强，γ分泌酶其他亚基蛋白含量下降。

简介：摘要人类白细胞抗原（HLA）化学本质是一类糖蛋白，是一种高度多态性同种异体抗原，受到被称为人类主要组织相容性复合体（MHC）的基因簇控制。不仅是自身遗传重要标记，同时在机体免疫反应的发生过程有着关键性的作用1。在辅佐细胞（又称抗原提呈细胞）将抗原信息提供给T淋巴细胞这个反应阶段和效应靶细胞的作用阶段，均需要对自身的HLA抗原进行识别。通过分析甲状腺及胰岛内分泌细胞HLA抗原的异常表达情况，对于机体器官特异性自身免疫内分泌相关疾病的诊治有一定指导意义。

简介：目的：利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）纤突糖蛋白S。方法：根据GenBank中猪TGEV纤突糖蛋白S全基因设计一对引物，并在5’引物和3’引物中引入EcoRI、NotI酶切位点，2。2kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体，再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接，SalI线性化重组穿梭质粒pPIC9k—S，电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞，G418筛选鉴定阳性重组子，经甲醇诱导，SDS—PAGE检测诱导后上清。结果：对pPIC9k—S重组酵母表达载体的测序证实已成功克隆了猪TGEVS基因；重组酵母菌诱导表达后，SDS-PAGE检测结果显示表达产物的相对分子质量为为82×10^3，且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外。结论：利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒（河北分离株）纤突糖蛋白S。

简介：摘要目的探讨黄芪甲苷对人内皮祖细胞(EPC)分泌外泌体及外泌体中微小RNA-126(miRNA-126)表达的影响。方法取湖南中医药大学第一附属医院妇产科2019年出生的1名足月健康新生儿脐带血，采用密度梯度离心法分离单个核细胞并培养7 d，其间行形态学观察；取第3代细胞，采用CD31免疫磁珠分选法和双荧光染色法鉴定。将鉴定成功的EPC按照随机数字表法分为黄芪甲苷组和磷酸盐缓冲液(PBS)组。黄芪甲苷组细胞加入终质量浓度100 mg/L的黄芪甲苷培养24 h，PBS组细胞加入等体积的PBS培养24 h。培养结束后收集2组细胞培养上清液中的外泌体，采用蛋白质印迹法检测外泌体特征性标志物CD9、CD63和CD81表达，于透射电子显微镜下观察EPC外泌体(EPC-Exo)形态，采用纳米颗粒跟踪分析技术检测EPC-Exo的粒径，采用二辛丁酸法测定EPC-Exo的浓度(样本数为3)，采用反转录PCR法测定EPC-Exo中与血管新生相关miRNA-126-3p和miRNA-126-5p的表达(样本数为3)。对数据行独立样本t检验。结果(1)培养第4天，细胞开始贴壁生长，圆形、梭形、条形等多形态同时出现；继续培养至第7天时，细胞边缘清晰，呈铺路石样排列，中央细胞呈圆形，周边细胞呈梭形。(2)CD31免疫磁珠分选法显示细胞膜染绿色，细胞核染蓝色；双荧光染色法显示细胞呈橙黄色。经以上鉴定，细胞被证实为EPC。(3)培养24 h，2组EPC-Exo的CD9、CD63和CD81表达均呈阳性，证实本实验已成功提取EPC-Exo。(4)培养24 h，2组EPC-Exo均呈圆形膜囊泡，形态无明显差异。(5)培养24 h，黄芪甲苷组中98.7%的EPC-Exo粒径为84.7～143.1 nm，PBS组中98.0%的EPC-Exo粒径为88.7～123.5 nm。(6)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo的质量浓度为(310±5)μg/mL，明显高于PBS组的(257±5)μg/mL，t＝13.369，P<0.01。(7)培养24 h，黄芪甲苷组EPC-Exo中miRNA-126-3p(t＝16.062，P<0.01)和miRNA-126-5p(t＝3.252，P<0.05)均明显多于PBS组。结论黄芪甲苷可改善人EPC分泌外泌体的功能，且所分泌的外泌体负载miRNA-126。

简介：目的：利用人脐静脉内皮细胞体外培养模型，探讨肾上腺素刺激状态下海带多糖L01对内皮细胞的保护作用，以及其对其分泌的组织型纤溶酶原激活物（t-PA）的影响，从内皮细胞抗血栓功能方面探讨海带多糖L01对心血管系统的保护作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304，用肾上腺素刺激24h、48h、72h采样，ELISA法测定HUVECs培养上清液中的t-PA含量，逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测HUVEC细胞内t-PAmRNA的表达，其扩增产物经电泳后密度扫描及半定量分析。结果：肾上腺素模型组HUVECs培养液中t-PA（24h、48h）含量明显增加，；单给海带多糖对HUVECst-PA分泌无影响。海带多糖L01在肾上腺素刺激下给药24h，48h后t-PA抗原分泌明显降低（P〈0．01），且具有一定的量效关系，但HUVECst-PAmRNA表达各组均无明显差异。结论：肾上腺素可刺激内皮细胞分泌t-PA抗原，海带多糖L01对血管内皮具有一定的保护作用，减少肾上腺素刺激下HUVECs分泌t-PA，而对t-PAmRNA表达无明显影响。

简介：