简介:摘要目的探讨microRNA-31(miR-31)在高糖诱导足细胞上皮-间充质转分化(EMT)中的机制。方法将体外培养的人肾小球足细胞按不同糖浓度分为低糖组(LG)、高渗组(HM)和高糖组(HG);按是否转染过表达miR-31(miR-31 mimics)分为miR-31过表达组(miR-31m组)、阴性对照组(miR-NC组)和脂质体组(Mock组);按照是否转染沉默低氧诱导因子-1抑制剂(FIH-1)及沉默miR-31(miR-31 inhibitor)分为FIH-1沉默组(si-FIH-1组)、miR-31沉默组(miR-31i组)、FIH-1沉默+miR-31沉默组(si-FIH-1+miR-31i组)及阴性对照组(NC组)。采用实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞低氧诱导因子-1抑制剂(FIH-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平;采用双荧光素酶靶标实验验证miR-31与FIH-1基因的靶向关系。结果与LG和HM组比较,HG组miR-31表达水平显著升高(F=146.8,P<0.01),FIH-1蛋白表达水平明显下降(F=54.23,P<0.01),而TGF-β1及α-SMA蛋白表达水平均显著升高(F=360.6,P<0.01;F=193.7,P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,FIH-1是miR-31的靶基因。si-FIH-1与miR-31i共同转染时,可以恢复si-FIH-1或miR-31i单独转染导致的FIH-1、TGF-β1、α-SMA的mRNA及蛋白表达变化。结论miR-31靶向调控FIH-1促进足细胞EMT,抑制miR-31的表达可减轻高糖诱导的足细胞EMT。
简介:背景:细胞共培养技术是在体外条件下将细胞与另一种细胞共同培养。对于成骨细胞和脂肪细胞横向分化研究多采用体外条件下成脂诱导液诱导成骨细胞发生横向分化,而忽略了体内环境中细胞互相作用的因素。目的:探讨在Transwell间接共培养条件下成熟脂肪细胞诱导成骨细胞成脂横向分化的能力。方法:①选取小鼠成纤维样3t3-l1前体脂肪细胞进行成脂诱导为成熟脂肪细胞;②实验分组:A组接种成熟脂肪细胞(Transwell间接共培养体系下室),B组接种小鼠成骨样细胞mc3t3-e1(以1∶4比例接种到Transwell间接共培养体系上室),C组单独培养的小鼠成骨样细胞mc3t3-e1;③检测指标:分别在7,14,21d倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,检测各组细胞三酰甘油相对含量、成脂目的蛋白PPARγ2表达,并进行油红O染色以及茜素红染色观察;以0,24,36h为截点检测B组与C组细胞增殖抑制率的变化。结果与结论:①培养2周时,3t3-l1细胞由长梭形变为圆形,胞质内脂滴增多呈亮圆形,油红O染色鉴定后备用;②细胞形态:B组共培养7d时呈长梭形,未见透明脂滴;14d时胞质内出现黑色颗粒及小圆形脂滴;21d细胞形态由长梭形变为椭圆形或圆形,脂滴变大;③茜素红染色:7,14,21d时B组细胞呈染色区减少的趋势,C组细胞无明显变化均呈大片着色区;④油红O染色:7,14,21d时,B组细胞染色区呈递增趋势且与时间成正比,C组细胞染色阴性且无明显变化;⑤三酰甘油:B组细胞三酰甘油聚集量呈递增趋势且与时间成正比,B组组间及与A组相比差异有显著性意义(P<0.05),C组无明显变化(P>0.05);⑥MTT抑制率:B组细胞增殖抑制率与时间成正比,与C组差异有显著性意义(P<0.05);⑦Westernblot实验:B组细胞PPARAγ2蛋白表达量呈递增趋势且与时间成正比,与A、C组相比,差异均有�
简介:论现代青年的分化谢维和(特约撰稿人)现代社会中青年的分化,是当今青年发展的重要特征,这种分化与整个社会发展中的分化是联系在一起的,而日常常具有某种"先锋"的特点。它引起了人们对青年的不同看法和评价,对教育和青年工作也带来了挑战。坦率地说,现在青年教育...