简介:摘要以百日咳杆菌Prn蛋白作为抗原,免疫兔制备多克隆抗体,利用多抗与固相载体Sepharose4B偶联,制备亲和免疫层析柱。结果显色,经三次免疫百日咳杆菌Prn蛋白,兔血清稀释倍数达到105,多克隆抗体与Sepharose4B凝胶偶联制备获得了免疫亲和层析柱,通过该柱纯化Prn蛋白,纯化率90%以上。
简介:研究了单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定玉米中玉米赤霉烯酮的方法.样品通过乙腈-水(体积比9∶1)提取,提取液用免疫亲和柱净化,WatersC18色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量.对添加不同含量的玉米赤霉烯酮进行6次重复实验,平均回收率为87.8%~90.9%,变异系数(CV)为8.6%~11.3%,检测低限为0.01mg/kg.
简介:目的采用免疫亲和柱净化鱼肉和肝脏中的河鲀毒素,建立高效液相色谱-三重四级杆质谱串联(LC-MS/MS)方法检测鱼肉和肝脏中的河鲀毒素,为水产品中的河鲀毒素检测提供方法依据。方法选用Zic-Hilic色谱柱(150mm×2.1mm,5μm),以10mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸-乙腈为流动相,采用梯度洗脱进行分离。样品用1%乙酸-甲醇沉淀蛋白提取,上清液加入PBS缓冲液后经免疫亲和柱净化,将洗脱液氮吹至干定容后上机测定。多重反应监测(MRM)方式检测。结果河鲀毒素的线性范围为1.0~1000.0ng/ml,鱼肉和肝脏中河鲀毒素的检出限分别为0.3和0.2μg/kg,回收率在52.4%~72.6%之间。结论本方法特异性强、提取效果好、无基质抑制效应,适用于鱼肉和肝脏中河鲀毒素的痕量检测。
简介:摘要:构建 FER时间分辨荧光免疫层析检测法,并在临床上加以应用。将 FER抗体及兔 IgG在硝酸纤维素膜上包被,利用荧光微球对抗 FER单克隆抗体及兔 IgH进行标记,并将其作为检测线及质控线制备荧光免疫层析时使用的试纸条。 FER时间分辨荧光免疫层析检测法的灵敏度可以达到 0.5ng/ml,批内 CV达到 3.6-4.6%,批间 CV达到 3.8%-5.0%,平均回收率达到 100.6%,具有良好的热稳定性。将其与电化学发光分析技术相比较时,相关系数可达到 0.8899,。正常参考值范围男性是 100-350ng/ml,女性是 40-260ng/ml。利用这种方法建立的 FER时间分辨荧光免疫层析检验灵敏度较高,且检测十分可靠。
简介:目的为进一步了解胶体金免疫层析测定(GICA)法在检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的灵敏度及有无“带现象”。方法采用上海实业科华生物技术有限公司的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒与杭州艾康生物技术有限公司的GICA试条对定值质控品和临床上800份标本进行检测,ELISA法以A值〈0.1为阴性,A值0.1~0.5为弱阳性,A值〉0.5为阳性。再用GICA法对其阳性、弱阳性及随机抽取阴性标本中的80份进行复检。结果在800份标本中经ELISA法检出阳性42份,弱阳性8份,余为阴性。用GICA法复检出阳性45份,弱阳性3份,余为阴性。结论GICA法与ELISA法相比较最大的优点是不受抗原过量的影响,即避免产生“带现象”,因此具有较高的特异性。GICA的灵敏度要比成熟的ELISA法偏低。GICA法检测HBsAg方便、快速。
简介:摘要目的分别采用免疫荧光层析法与电化学发光法(ECLIA)检测血清降钙素原并比较结果,从而对免疫荧光层析法进行性能分析。方法选取2016年6月-2016年12月间在我院进行降钙素检查的166份血清标本为研究对象,分别进行电化学发光法(ECLIA)和免疫荧光层析法检测,对检测结果进行统计学分析。结果166例标本在两种不同检测方法下,按照浓度高低可分为阴性组、低风险组、轻度升高组、中度升高组以及高度升高组,并且不同浓度的组别所占比例和对应的组间阳性率在两种检测方法下并无明显差异,无统计学意义(P>0.05);此外所有标本的ECLIA总阳性率为49.40%,与免疫荧光层析法的总阳性率46.99%%之间差异也不明显,无统计学意义(P>0.05)。结论临床上利用免疫荧光层析法与电化学发光法进行血清降钙素原的检测结果相当,而免疫荧光层析法更为操作便捷,且安全性较高,因此值得广泛推广应用。
简介:用18~20nm胶体金标记抗哈维氏弧菌Vibrioharveyi抗体并制备金标垫,分别将羊抗兔IgG和纯化后的抗哈维氏弧菌抗体包被于NC膜上作为质控线和检测线,组装制作了哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条,优化了该试纸条的制作条件,测试了其性能。结果表明:所制备的哈维氏弧菌免疫层析试纸条具有较好的特异性,与费尼斯弧菌Vibriofurnissii、维氏气单胞菌Aeromonasveronii、美人鱼发光杆菌Photobacteriumdamselae、类志贺邻单胞菌PlesiomonasShigelloides、鱼肠道弧菌Vibrioichthyoenteri、鳗利斯顿氏菌Listonellaanguillarum、迟缓爱德华氏菌Edwardsiellatarda、海豚链球菌Streptococcusiniae、嗜水气单胞菌AeromonasHydrophila等9种常见水产病原菌无明显交叉反应,检测灵敏度为3×10^5CFU/mL,5~10min即可得出检测结果,具有快速、简便、特异性强和适应基层推广应用等优点,可用于养殖鱼类病原哈维氏弧菌的现场检测。