简介：利用SRAP标记,对来源不同的56份有棱丝瓜和8份无棱丝瓜种质的亲缘关系进行了分析。从144对SRAP引物中筛选出60对多态性强、重复性好的SRAP引物。共扩增得到1433条谱带,其中多态性谱带1280条,平均每对引物扩增得到21.33条多态性谱带,多态性位点百分率为88.74%。将丝瓜种质利用UPMGA方法进行聚类分析,结果表明,64份丝瓜种质的遗传相似系数为0.17～0.98。在遗传相似系数0.17处,供试种质被分为2大类群,第一大类群为普通丝瓜,第二大类群为有棱丝瓜,在第二大类群中又被分为以长绿型丝瓜为主和短果型丝瓜2亚群。丝瓜类群的划分与形态学性状比较一致,即首先与棱沟的有无密切相关,其次与瓜条的长短、颜色有较高的相关性。

简介：Phytohormoneabscisicacid(ABA)wascriticalformanyplantgrowthanddevelopmentalprocessesincludingseedmaturation,germinationandresponsetoenvironmentalfactors.WiththepurposetodetectthepossibleABArelatedsignaltransductionpathways,wetriedtoisolateABA-regulatedgenesthroughcDNAmacroarraytechnologyusingABA-treatedriceseedlingasmaterials(undertreatmentfor2,4,8and12h).Of6144cDNAclonestested,37differentialclonesshowinginductionorsuppressionforatleastonetime,wereisolated.Ofthem30and7wereup-ordown-regulatedrespectively.Sequenceanalysesrevealedthattheputativeencodedproteinswereinvolvedindifferentpossibleprocesses,includingtranscription,metabolismandresistance,photosynthesis,signaltransduction,andseedmaturation.6cDNAcloneswerefoundtoencodeproteinswithunknownfunctions.RegulationbyABAof7selectedclonesrelatingtosignaltransductionormetabolismwasconfirmedbyreversetranscriptionPCR.Inaddition,somecloneswerefurthershowntoberegulatedbyotherplantgrowthregulatorsincludingauxinandbrassinosteroid,which,however,indicatedthecomplicatedinteractionsofplanthormones.PossiblesignaltransductionpathwaysinvolvedinABAwerediscussed.

简介：从144对SRAP引物中筛选出61对多态性强、重复性好的SRAP引物，对43份苦瓜种质DNA进行了扩增，共得到2078条谱带，其中多态性谱带863条，平均每对引物扩增得到14．15条多态性谱带，多态性位点百分率为42．11％。用UPM—GA方法进行聚类分析，供试苦瓜种质的遗传相似系数为0．50～0．95，在阈值O．65处（L1）可将苦瓜分为2个类群，第1类群为野生种，第Ⅱ类群为半栽培种和栽培种；在阈值0．80处（L2）将第Ⅱ类群分为5个亚类群，L2的划分反映了苦瓜种质间的遗传多样性与果实性状、来源或地理分布有较高相关性；在阈值0．83处，第Ⅱ类群1亚类群又分为4类，大致分为滑身苦瓜（粗棱无瘤）、大顶苦瓜（棱细大圆瘤、倒锥形）、棱细圆瘤苦瓜以及尖刺瘤或凸瘤苦瓜，分类结果与苦瓜的刺瘤有无、棱条粗细、瘤的形状和瓜色等密切相关，初步认为刺瘤苦瓜为较原始类型。

简介：为了揭示建兰（Cymbidiumensifolium）品种的遗传多样性和亲缘关系,为建兰种质资源的有效利用和开发提供依据,本研究采用SRAP（sequence-relatedamplifiedpolymorphism）分子标记技术对来自四川、台湾、广东的47个建兰品种的遗传多样性进行分析,应用NYSYS软件对SRAP-PCR结果进行聚类分析。结果从88对引物中筛选获得12对特异性强、稳定性好的引物进行SRAP分析,共扩增出188条带纹,其中147条为多态性位点,平均每组引物扩增出12条多态性带。聚类分析表明,47个品种可以分为4个类群：第Ⅰ群由来自四川的3个品种组成;第Ⅱ群的23个品种中有18个来自四川、3个来自广东、2个来自台湾;第Ⅲ群的12个品种中有11个品种源于台湾,1个源于四川;第Ⅳ群仅有1个来自四川,其他品种均来自台湾。结果表明,由于人工驯化,造成了建兰品种遗传背景的混乱,而SRAP分子标记技术能有效地分析建兰品种的遗传多样性和亲缘关系。

简介：利用30对多态性良好的SRAP引物对90份山药种质资源进行PCR扩增,构建扩增图谱,共扩增到722个位点,多态性位点581个,多态性比例为80.47%,每对引物组合检测多态性位点3～30个,每对引物能鉴别6～51份山药种质资源；采用DNA数据分析软件对扩增出的多态性位点进行分析,构建山药种质资源方框指纹图谱,该图谱清晰地反映出每对引物能扩增的多态位点数、鉴别资源份数及资源具体编号,资源在该引物组合下所能检测得到的多态位点数及所处的具体位置等信息；从10对SRAP引物组合中挑选出的21个多态性位点,根据谱带的有无转化成的1/0字符串编码,形成山药种质资源DNA数字指纹图谱,该图谱可鉴别区分90份山药种质资源中的82份资源。同时这些指纹图谱可为下一步的山药品种鉴定,种质资源评价、利用,分子标记辅助育种及品种权保护提供技术支撑。

简介：以莴苣为材料研究了影响SRAP标记PCR结果的因素，包括Mg^2＋、dNTP、引物、Taq酶的浓度以及退火温度等，建立了适用于莴苣属蔬菜SRAP分析的PCR反应体系：在20μl反应体系中，模板DNA为50ng，Mg^2＋浓度为2．0mmol／L，dNTP浓度为0．2mmol／L，引物浓度为0．75μmol／L，Taq酶用量为1U。适宜的扩增程序为94℃5min；94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，51℃lmin，72℃1min，30个循环；72℃7min。对体系的验证结果表明本研究建立的莴苣SRAP体系重复性好、分辨率高、多态性丰富，在莴苣属蔬菜种盾资源评价、分子标记辅助选择言种等骞方面躲有专耍作用。

简介：

简介：目的：构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法：采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMASPIN-400柱分级分离后,收集500bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2kb,平均插入片段长度大于1kb。结论：建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。

简介：Themultiplexpolymerasechainreaction(PCR)techniquewasappliedtodetecttheSARS-CoV(severeacuterespiratorysyndrome-associatedcoronavirus)specifictargetcDNAfragmentsinthepresentstudy.ThetargetcDNAfragmentsofSARS-CoVweresynthesizedartificiallyaccordingtothegenomesequenceofSARS-CoVinGenBanksubmittedbyTheChineseUniversityofHongKong,andwereusedassimulatedpositivesamples.FiveprimersrecommendedbyWorldHealthOrganization(WHO)wereusedtoamplifythefragmentsbysinglePCRandmultiplexPCR.ThreetargetcDNAfragments(121,182and302bp),aswellasthethreedifferentcombinationsofanytwoofthesefragments,wereamplifiedbysinglePCR.ThecombinationofthesethreefragmentswasamplifiedbymultiplexPCR.TheresultsindicatedthatthemultiplexPCRtechniquecouldbeappliedtodetecttheSARS-CoVspecifictargetcDNAfragmentssuccessfully.

简介：目的：构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法：以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料，提取柱头的总RNA，用亲和层析法分离纯化mRNA，利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果：羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2．5×10^5；扩增后文库的库容量约为4×10^8，重组率为96％，插入片段大小为0．4～3kb，平均长度在0．8kb左右。结论：构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库，为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

简介：为研究人血小板因子4(hPF4)的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应(RTPCR)从人红白血病细胞系HEL细胞总RNA中扩增出hPF4基因cDNA序列,将其克隆至pUC18载体中.序列分析证实克隆片段与文献报道的hPF4基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hPF4基因cDNA.

简介：以包含甘薯近缘野生种、地方品种和育成品种的129份种质为供试材料．采用SRAP分子标记对其进行遗传多样性分析，同时用MEGA软件结合DPS软件绘制甘薯及其近缘种进化树。结果表明：（1）基于SRAP标记的124份甘薯栽培种平均遗传距离为0．1848，5份野生种平均遗传距离为0．4822，野生种与栽培种之间的遗传距离平均为0．4135。（2）当遗传距离为0．31时，可以把近缘野生种和栽培品种完全区分开。124份栽培种可以在遗传距离为0．21处划分为8个类别。（3）在基于SRAP标记绘制的进化树上，129份甘薯及其近缘种种质按演化顺序分为3部分，分别为处于进化树最底端的由5个近缘野生种组成的第Ⅰ部分、处于进化树中部的由6个育成品种和1个地方品种组成的第Ⅱ部分．以及进化树上部由117份地方品种和育成品种组成的第Ⅲ部分。（4）从进化时间来看，近缘野生种平均进化时间最长，地方品种次之．育成品种最短．与理论预期一致，同时菲律宾引入的品种与我国福建地方品种进化时间一致，验证了甘薯经由菲律宾引入我国福建地区这一传播途径。SRAP标记可以有效的运用于甘薯遗传多样性及其起源与演化分析。

简介：采用SRAP技术分析了来源于不同国家和地区的42个大花蕙兰品种及4个国兰原生种之间的遗传亲缘关系。34对引物组合中筛选出29对带型稳定、多态性较好的引物组合,共扩增出398条谱带,其中387条为多态带,多态性比率97.2%,平均每个引物组合扩增多态性带13.3条。46份种质之间的相似系数变化范围为0.60-0.99,平均为0.76。基于29个SRAP标记的扩增结果,利用NTSYS2.10e软件计算Dice遗传相似系数,并建立UPGMA聚类图,结果表明：在遗传相似系数0.69处将供试材料分为4类,较好地揭示了大花蕙兰品种及国兰原生种间的遗传多样性与亲缘关系,可为大花蕙兰种质资源利用及杂交育种中亲本选择提供科学依据。

简介：利用SRAP分子标记构建了14份不同地理来源、表型具有差异的油莎豆品系的分子指纹图谱并进行遗传多样性分析。结果表明100对引物中共有多态性引物42对,扩增出多态性带328条,平均每对引物7.8条。28对引物在12个品系上具有特征谱带,除品系4和14外,均可用1对引物进行鉴定;采用引物组合法仅用Me2/Em6和Me8/Em11这2对引物就可将14份材料区分开,并利用这2对引物构建了上述品系的数字指纹图谱。UPGMA聚类分析表明,所有参试材料间的遗传距离在0.12～0.75之间,平均为0.42,表明我国不同地理来源的油莎豆品系遗传差异较大,具有较为丰富的遗传多样性。

简介：为了给南瓜属种质资源鉴定和分类提供分子生物学依据,本研究采用SRAP分子标记技术与DNAMAN指纹图谱绘制软件对88份南瓜属种质资源（包含美洲南瓜、中国南瓜、印度南瓜）进行分子指纹图谱绘制。结果表明：35对SRAP多态性引物共扩增出499条清晰条带,其中多态性条带438条,多态性条带比率高达87.8%。根据扩增出的条带成功绘制出88份南瓜属种质资源的DNA指纹图谱,每一份种质都具有其独特的分子身份证,使得每份种质均可被区别开来。其中,多态性最好的引物是E5EM8,可以同时绘制72份南瓜属种质资源的指纹图谱。所有供试材料用5对多态性SRAP引物即可全部区别开来。研究表明,SRAP分子标记技术可成功地绘制南瓜属种质资源DNA指纹图谱。本研究对南瓜属种质资源鉴别、分子数据库构建及品种权保护具有较重要的意义。

简介：调控血小板生成的血小板生成素(Thrombopoi-erin,TPO)基因序列最近被阐明,这为人们了解血小板的发育调节打开了缺口,同时也为临床治疗血小板贫血提供了一种极有潜力的候选蛋白因子。为了研究TPO的结构与功能的关系,探索其体外高效表达的途径,同比较不同人种TPOcDNA序列的多态性,我们参照文献发表的西方人TPOcDNA序列,用聚合酶

简介：Quantitativegeneexpressionanalysisplaysanimportantroleinidentifyingdifferentiallyexpressedgenesinvariouspathologicalstates,geneexpressionregulationandco-regulation,sheddinglightongenefunctions.Althoughmicroarrayiswidelyusedasapowerfultoolinthisregard,itissuboptimalquantitativelyandunabletodetectunknowngenevariants.Herewedemonstratedeffectivedetectionofdifferentialexpressionandco-regulationofcertaingenesbyexpressedsequencetaganalysisusingaselectedsubsetofcDNAlibraries.Wediscussedtheissuesofsequencingdepthandlibrarypreparation,andproposethatincreasedsequencingdepthandimprovedpreparationproceduresmayallowdetectionofmanyexpressionfeaturesforlessabundantgenevariants.Withthereductionofsequencingcostandtheemergingofnewgenerationsequencingtechnology,in-depthsequencingofcDNApoolsorlibrariesmayrepresentabetterandpowerfultoolingeneexpressionprofilingandcancerbiomarkerdetection.Wealsoproposeusingsequence-specificsubtractiontoremovehundredsofthemostabundanthousekeepinggenestoincreasesequencingdepthwithoutaffectingrelativeexpressionratioofothergenes,astranscriptsfromasfewas300mostabundantlyexpressedgenesconstituteabout20%ofthetotaltranscriptome.In-depthsequencingalsorepresentsauniqueadvantageofdetectingunknownformsoftranscripts,suchasalternativesplicingvariants,fusiongenes,andregulatoryRNAs,aswellasdetectingmutationsandpolymorphismsthatmayplayimportantrolesindiseasepathogenesis.

简介：P16ink4是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`（ink4）基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16ink4cDNA。扩增得到556bp片段（包括引物两端酶切位点的16bp）克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16ink4cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16ink4cDNA已成功地得到克隆。

简介：本实验将含有人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因cDNA的重组真核表达质粒直接注射小鼠骨骼肌,观察了hGM-CSF基因在小鼠体内的分泌表达情况。ELISA结果显示注射重组质粒DNA后,第15天左右小鼠血液hGM-CSF的表达量最高,约有97ng/ml,第20天次之,第25天和第10天的表达量相近,约有49ng/ml。生物学活性检测结果表明,实验组小鼠血液有维持TF-1依赖株细胞的生长作用。表明重组质粒DNA直接注射骨骼肌不仅能表达hGM-CSF,而且表达产物有生物学恬性。

简介：在Brassicaceae的摘要，myrosinase催化glucosinolate的水解作用并且在反草食动物防卫起一个重要作用。我们从从另外的Brassica种类与myrosinase基因展出高顺序身份的Brassicaparachinensis克隆并且描绘myrosinase基因的全身的互补DNA。对有菱形斑纹的蛾(Plutellaxylostella)在防卫调查这myrosinase的角色，我们构造了RNA干扰(RNAi)表示指向了myrosinase和transfected的双strandedRNA的盒子它进B。parachinensis。Myrosinase在结果被压制转基因的工厂。在转基因的工厂上喂的有菱形斑纹的蛾幼虫比在非转基因的工厂上喂的那些有更低的幼虫、蛹的重量，更长蛹的持续时间，和更低的肥沃，建议有菱形斑纹的蛾使防御系统适应了glucosinolate-myrosinase。因此，myrosinase的抑制是为控制有菱形斑纹的蛾的一条潜在的途径。