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  • 简介:Disulfidebondsarevitalforproteinfunctions,butlocatingthelinkagesiteshasbeenachallengeinproteinchemistry,especiallywhenthequantityofasampleissmallorthecomplexityishigh.In2015,ourlaboratorydevelopedasensitiveandefficientmethodformappingproteindisulfidebondsfromsimpleorcomplexsamples(LuetaLinNatMethods12:329,2015).Thismethodisbasedonliquidchromatography-massspectrometry(LC-MS)andapowerfuldataanalysissoftwaretoolnamedpLink.Tofacilitateapplicationofthismethod,wepresentstep-by-stepdisulfidemappingprotocolsforthreetypesofsamples--purifiedproteinsinsolution,proteinsinSDS-PAGEgels,andcomplexproteinmix-turesinsolution.Theminimumamountofproteinrequiredforthismethodcanbeaslowasseveralhundrednanogramsforpurifiedproteins,ortensofmicrogramsforamixtureofhundredsofproteins.Theentireworkflow--fromsamplepreparationtoLC-MSanddataanalysis--isdescribedingreatdetail.Webelievethatthisprotocolcanbeeasilyimplementedinanylaboratorywithaccesstoafast-scanning,high-resolution,andaccurate-massLC-MSsystem.

  • 标签: DISULFIDE Identification of DISULFIDE BONDS Cross-linking
  • 简介:Circulargenomes,beingthelargestproportionofsequencedgenomes,playanimportantroleingenomeanalysis.However,traditional2Dcircularmaponlyprovidesanoverviewandannotationsofgenomebutdoesnotofferfeature-basedcomparison.Forremedyingtheseshortcomings,wedeveloped3DGenomeTuner,ahybridofcircularmapandcomparativemaptools.Itscapabilityofviewingcomparisonsbetweenmultiplecircularmapsina3Dspaceoffersgreatbenefitstothestudyofcomparativegenomics.Theprogramisfreelyavailable(underanLGPLlicence)athttp://sourceforge.net/projects/dgenometuner.

  • 标签: 基因组分析 三维空间 调谐器 多循环 语境 比较基因组学
  • 简介:据国外媒体1月29日报道。最新研究显示,维生素D或能缓解哮喘症状,体内维生素D含量不足的患者,哮喘症状更严重。

  • 标签: 维生素D 症状 哮喘
  • 简介:C3d是补体C3不可再被酶解的最小片段,在抗原特异性免疫建立之前,C3d可识别非己抗原并与之共价结合,增强了抗原递呈细胞的递呈能力、降低了B细胞的活化阈、提高特异性抗体的滴度、促进抗体亲和力成熟等.近年来研究显示,C3d还可以促进抗原特异性细胞免疫应答水平并改变机体免疫应答模式.所以,C3d是连接固有性免疫和获得性免疫的桥梁.本文对C3d的分子生物学特征、生物学功能以及作为分子佐剂可能的分子机制进行了简要总结.

  • 标签: C3D 免疫应答 分子机制
  • 简介:Ithasbeenshownthattheprogressinthedeterminationofmembraneproteinstructuregrowsexponentially,withapproximatelythesamegrowthrateasthatofthewater-solubleproteins.Inordertoinvestigatetheeffectofthis,ontheperformanceofpredictionalgorithmsforbothα-helicalandβ-barrelmembraneproteins,weconductedaprospectivestudybasedonhistoricalrecords.WetrainedseparatehiddenMarkovmodelswithdifferentsizedtrainingsetsandevaluatedtheirperformanceontopologypredictionforthetwoclassesoftransmembraneproteins.Weshowthattheexistingtop-scoringalgorithmsforpredictingthetransmembranesegmentsofα-helicalmembraneproteinsperformslightlybetterthanthatofβ-barreloutermembraneproteinsinallmeasuresofaccuracy.Withthesamerationale,ameta-analysisoftheperformanceofthesecondarystructurepredictionalgorithmsindicatesthatexistingalgorithmictechniquescannotbefurtherimprovedbyjustaddingmorenon-homologoussequencestothetrainingsets.Theupperlimitforsecondarystructurepredictionisestimatedtobenomorethan70%and80%ofcorrectlypredictedresiduesforsinglesequencebasedmethodsandmultiplesequencebasedones,respectively.Therefore,weshouldconcentrateoureffortsonutilizingnewtechniquesforthedevelopmentofevenbetterscoringpredictors.

  • 标签: 预测算法 三维结构 二级结构预测 跨膜蛋白质 隐马尔可夫模型 培养
  • 简介:在植物昆虫相互作用的偏爱表演关系是在进化生态学的一个中央主题。在许多昆虫之中,鸡蛋是脆弱的,幼虫限制了活动性,使一个适当oviposition地点的选择成为为女性的最重要的决定之一。我们由人工地为2个自然资源,葡萄和植物的一种为偏爱选择在果蝇melanogasterMeigen和果蝇simulansSturtevant调查了oviposition偏爱的进化。我们的学习的主要发现是D的微分回答。melanogaster和D。simulans。尽管偏爱在D的试验性的人口演变。melanogaster,回答不与政体使用了的选择一致。相反,在D的回答。simulans与期望一致,证明这种有为特点的可选的基因变化。而且,在D之间交叉。simulans分叉的线证明涉及葡萄偏爱的基因因素看起来大部分后退。在摘要,我们的人工的选择学习建议那D。melanogaster和D。simulans为这个特点拥有不同基因体系结构。

  • 标签: 黑腹果蝇 人工选择 微分响应 偏好 产卵 进化生态学
  • 简介:以便获得米饭幼仔圆锥花序proteome的高分辨率的electrophorogram,我们评估了通常使用在的各种各样的协议二维(2D)蛋白质的polyacrylamide胶化电气泳动(页)包括染色协议的胶化,使不能调动的pH坡度(IPG)的pH范围脱衣并且样品装载数量。结果证明染色协议使用的银敏化包含冰川的醋酸,钠醋酸盐和钠thiosulfate的答案(在1988由Heukeshoven和Dernick报导了)并且染色方法使用答案包含的Coomassie灿烂的蓝色G-250,铵硫酸盐和磷的酸(在2010由粉红色的等报导了)表明了优异染色效果。另外,当有5-8的pH范围的IPG胶化长带被使用时,我们也与4-7的pH范围证明更高的分辨率被完成,与那相比。最后,最佳的装载数量作为与染色协议的银硝酸盐在联合与pH5-8使用17厘米长的非线性的IPG长带的130g被决定。评估结果将在年轻米饭颖果的proteome分析是有用的。

  • 标签: 聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质组分 协议 水稻 评价 颖果
  • 简介:CellsregulatephospholipaseD(PLD)activityinresponsetonumerousextracellularsignals.Here,weinvestigatedtheinvolvementofPLDactivityintransforminggrowthfactor-β(TGF-β1)-mediatedgrowthinhibitionofepithelialcells.TGF-β1)-mediatedgrowthinhibitionofepithelialcells.TGF-β1inhibitsthegrowthofMDCK,Mv1Lu,andA-549cells.Inthepresenceof0.4%butanol,TGF-β1inducesanincreaseintheformationofphosphatidylbutanol,auniqueproductcatalyzedbyPLD.TGF-β1alsoinducesanincreaseinphosphatidicacid(PA)levelinA-549andMDCKcells.TGF-β1inducesanincreaseinthelevelsofDAGlabeledwith[^3H]-myristicacidinA-549andMDCKcellsbutnotinMv1Lucells.NoincreaseofDAGwasobservedincellsprelabeledwith[^3H]-arachidonicacid.ThedatapresentedsuggestthatPLDactivationisinvolvedintheTGF-β1-inducedcellgrowthinhibition.

  • 标签: 转化生长因子-Β 诱导 细胞生长抑制 磷酯酸D活性 激活 TGFΒ-1
  • 简介:水稻在抽穗开花期对高温胁迫非常敏感,通过挖掘耐热资源,培育耐热水稻品种是应对高温热害最有效的方式。前期研究发现,地方稻资源D43在花期连续高温条件下能保持较高的结实率。本研究在大田和人工气候室不同高温处理下,分析了D43的开花时间与耐热性之间的相互关系。结果表明,高温能够使水稻的开花时间提前,D43表现出稳定的早花时特性,高温胁迫下的开花时间集中在8∶30~10∶00;在开花时间段恒定高温胁迫下,D43的结实率较低;但在大田高温和人工气候室模拟高温胁迫下,D43的开花时间避开了日高温段,从而表现出较高的结实率;花器官形态性状包括花药开裂率、柱头上的花粉附着数、花粉萌发数与结实率之间呈显著正相关,因此可用于评价水稻的花期耐热性。

  • 标签: 水稻 耐热性 开花时间
  • 简介:目的探讨血浆(1—3)-β-D-葡聚糖对早期诊断深部真菌感染的临床价值。方法收集2009年3月-11月间在北京友谊医院感染科住院患者174例,根据侵袭性真菌感染诊断标准,将患者分为排除深部真菌组、确诊组、临床诊断组、拟诊组。应用MB-80微生物动态快速检测系统,检测各组患者血浆(1—3)-β—D-葡聚糖水平,分析比较深部真菌感染组和非深部真菌感染组血浆(1-3)-β-D-葡聚糖的水平。结果深部真菌感染组血清(1-3)-β-D-葡聚糖含量为(153.4±37.0)pg/mL,排除深部真菌感染组血清(1-3)-β—D-葡聚糖含量为(54.6±8.6)pg/mL,两组间有统计学差异(t=3.4,P〈0.01);分析血浆(1-3)-β-D-葡聚糖诊断深部真菌感染,以20pg/mL为诊断阈值,其准确率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为70.1%、87.5%、61.9%、52.1%、91.2%。确诊病例、临床诊断病例、拟诊病例,3组间血清(1—3)-β-D-葡聚糖含量无统计学差异(P〉0.05)。结论深部真菌感染组的葡聚糖水平明显高于排除深部真菌感染组的葡聚糖水平,具有统计学意义。以20pg/mL为诊断阈值,其准确率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为70.1%、87.5%、61.9%、52.1%、91.2%,可作为深部真菌感染的最佳诊断阈值。

  • 标签: 血浆(1—3)-β—D-葡聚糖 深部真菌感染 诊断研究
  • 简介:目的揭示宿主磷脂酶D(phospholipaseD,PLD)应对烟曲霉感染过程中的重要作用和可能机制。方法应用滴鼻方式使野生小鼠和磷脂酶D双基因敲除小鼠(pld1^-/-pld2^-/-)感染烟曲霉孢子后,取小鼠肺组织、抽取支气管肺泡灌洗液,应用组织匀桨与菌落计数的方法检测小鼠肺组织中烟曲霉负荷,采用eBioscience公司的多因子检测试剂盒检测肺泡灌洗液中炎症因子分泌情况;分离两种小鼠的骨髓细胞并诱导分化为成熟巨噬细胞(BMDM),制霉菌素法检测其吞噬和杀死烟曲霉孢子的能力。结果感染烟曲霉孢子6h后,pld1^-/-pld2^-/-小鼠肺部真菌负荷显著高于野生小鼠,其肺泡灌洗液和肺泡巨噬细胞中均存在大量孢子,肺泡灌洗液中炎症因子浓度显著升高;体外实验证明pld1^-/-pld2^-/-小鼠的BMDM细胞吞噬和杀死烟曲霉孢子的能力显著减弱。结论小鼠pld1基因和pld2基因同时敲除导致其巨噬细胞的吞噬和杀死烟曲霉孢子的能力显著减弱,进而可能降低小鼠抗烟曲霉感染的能力。同时机体可能通过分泌大量的炎症因子以招募其他免疫细胞杀灭烟曲霉孢子。

  • 标签: 磷脂酶D 烟曲霉感染 巨噬细胞 炎症因子
  • 简介:目的探讨血液细菌感染对血清(1,3)-β-D-葡聚糖检测结果的影响。方法排除影响G试验结果的干扰因素后,选取符合入组条件的血培养细菌阳性及血培养阴性患者各40例,采集血清进行G试验检测。结果40例血培养细菌阳性标本中革兰阳性菌22例,革兰阴性菌18例,其中只有1例大肠埃希菌的G试验结果为阳性,4例在灰区,其余为阴性。40例血培养阴性标本3例G试验结果在灰区,其余为阴性。血培养细菌阳性组与血培养阴性组G试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论血液细菌感染对G试验检测干扰较小。

  • 标签: (1 3)-β-D-葡聚糖 菌血症 交叉反应
  • 简介:现在的学习试图定义postsynaptic的角色在多巴胺(DA)的规定的密度(PSD)-95受体功能。我们发现PSD-95身体上在co-transfectedHEK-293房间与D1或D2DA受体联系。DA受体的刺激以一种时间依赖者方式改变了在D1受体和PSD-95之间的协会。功能的试金显示PSD-95合作表示没影响D1刺激受体的营地生产,Gs蛋白质激活或受体不敏感性。然而,PSD-95由支持受体再循环加速了使内在化的膜受体的恢复,因此导致使内在化的D1受体的提高的促进感受性。我们的结果提供新奇机制因为调整再循环那的DA受体可以在postsynapticDA功能的调整和synapticneuroplasticity起一个重要作用。

  • 标签: 多巴胺受体 私营部门 调节蛋白 S蛋白 激活 受体介导
  • 简介:目的探讨血浆(1-3)-β-D葡聚糖(即G实验)对院内侵袭性真菌感染的临床价值。方法选择2016.11~2017.4在宁夏医科大学总医院住院患者中院内侵袭性真菌感染的高危患者132例,血浆(1-3)-β-D葡聚糖含量使用MB-80微生物快速检测动态系统及其试剂进行检测,用ROC曲线比较G实验、真菌培养、G实验联合真菌培养的检测结果。结果132例高危院内IFI感染的患者中,共有43例诊断为院内侵袭性真菌感染,真菌培养的敏感度为67%,特异度为96%,阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别是0.72和0.80,G实验的敏感度为70%,特异度为88%,PPV和NPV分别是0.73和0.86;G实验真菌培养检测的敏感度提高为84%,特异度提高为92%,阳性预测值0.78,阴性预测值0.92;G实验Youden指数0.58,真菌培养Youden指数0.63,联合检测Youden指数提高到0.76;G实验结果、真菌培养结果及联合检测结果进行ROC曲线分析,曲线下面积分别为0.717,0.757及0.798。结论G实验是一种快速、简便、实用的侵袭性真菌感染的早期诊断方法,联合传统真菌培养可提高诊断的敏感度、特异度及诊断价值。

  • 标签: (1-3)-β-D葡聚糖 院内侵袭性真菌感染 真菌培养
  • 简介:目的探讨(1,3)-β-D-葡聚糖检测(G试验)在侵袭性真菌病诊断中的价值。方法回顾性研究重庆医科大学附属第一医院2014年1~6月间临床G试验的住院患者结果,分析G试验诊断真菌感染的敏感性、特异性、符合率、阳性预测值、阴性预测值、约登指数等能力指标。结果真菌感染组G试验检测值228.4±250.1pg/mL,非真菌感染组G试验检测值32.6±13.6pg/mL,两组间有显著统计学差异(P〈0.001);G试验对真菌感染的敏感性、特异性、符合率、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为83%、92%、88%、89%、87%、0.75。结论G试验是真菌感染的重要早期实验室指标之一,对其合理应用可有效提高真菌感染的诊治水平,特别是阴性结果对排除真菌感染的意义更大。

  • 标签: (1 3)-β-D-葡聚糖 G试验 侵袭性真菌病
  • 简介:利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并构建了含突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-D92P.将该质粒在毕赤酵母GS115菌株中表达.与野生型表达产物PEL-GS相比较,突变体表达产物PEL-D92P-GS最适作用温度为45℃,比野生型提高了5℃;其热稳定性与野生型相当;突变体在40℃下的表达量为109U/mL,约为野生型的29%.结果分析表明,Pro替代Asp92后,可能是由于Pro一级结构的特点,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合.

  • 标签: 扩展青霉 碱性脂肪酶 最适作用温度 定点突变 重叠延伸PCR法 蛋白质工程
  • 简介:【背景】2,4-D二甲胺盐是一种选择内吸性除草剂,用于清除果园、牧场、水域等环境中的藜、苋等阔叶杂草。本文明确了2,4-D二甲胺盐在防除鱼塘杂草过程中对淡水鱼类的毒性。【方法】采用半静态法测试了2,4-D二甲胺盐对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的急性毒性,并明确了2,4-D二甲胺盐对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的安全浓度。【结果】随着供试鱼苗在药液中暴露时间的延长,LC50。值逐渐减小。2,4-D二甲胺盐对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的96hLC50值分别为369.27、339.20和438.47mg·L^-1。2,4-D二甲胺盐对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的安全浓度分别为36.93、33.92和43.85mg·L^-1。【结论与意义】2,4-D二甲胺盐对草鱼、鲢鱼和鲫鱼表现低毒。本研究为合理使用2,4一D二甲胺盐防除水生杂草提供了依据。

  • 标签: 2 4-D二甲胺盐 草鱼 鲢鱼 鲫鱼 急性毒性